Диссертация (1145717), страница 22
Текст из файла (страница 22)
1), то для последующего анализаданные этих групп были объединены.Анализ изменения концентрации кортикостерона в плазме крови после 30минутного предоставления 2,5-ДМП – показал достоверное увеличение (p=0,03)концентрации до медианного уровня 40,67 нг/мл, по сравнению с контрольным – 1,57нг/мл (рис. 26, «А»). Увеличение произошло более чем в 25 раз.
При часовой экспозиции2,5-ДМП, концентрация кортикостерона у мышей достоверно снижалась, по сравнению с30-минутным воздействием тем же хемосигналом (p=0,028), и составляла 1,4 нг/мл (что неотличалось от контрольных значений).Предоставление самцам мышей хемосигналов самок-одиночек (ХСО) в видезагрязненной подстилки не привело к изменению концентрации кортикостерона ни через30, ни через 60 минут (рис. 26, «А»). Медианная концентрации через 30 минутпредоставления ХСО составила 1 нг/мл, а через 60 минут – 3,2 нг/мл. Не было обнаруженоизменения концентрации кортикостерона, по сравнению с контрольными показателями ипри совместном предоставлении 2,5-ДМП и ХСО. После 30-минутного воздействия99обоими хемосигналами концентрация кортикостерона составляла 2,1 нг/мл, а при 60минутной экспозиции – 0,95 нг/мл.Рис.26.Изменениеконцентрациикортикостерона(А),окситоцина(Б),лютеинизирующего гормона (В), тестостерона (Г) в плазме крови самцов мышей линииСВА при запаховом воздействии 2,5-ДМП«ДМП», хемосигналов самок-одиночек«ХСО», совместном действии этих хемосигналов «ДМП+ХСО» в течение 30 или 60минут, а также – при контрольном воздействии дистиллированной водой «H2O».Использованашкалаконцентрацияидесятичногомежквартильныйлогарифма.диапазон.НаграфикахСравненияуказанамедианнаяпроизводиликритериемКраскелла-Уоллиса, достоверно различающиеся группы соединены линиями, надкоторыми указан уровень значимости различий.Медианная концентрация окситоцина у мышей контрольной группы составляла3,86 мклМЕ/мл (рис.
26, «Б»). При тридцатиминутном воздействии хемосигналами ненаблюдали достоверных изменений концентрации окситоцина ни у одной группы:«ДМП30 мин» – 2,89 мклМЕ/мл; «ХСО30 мин» – 4,43 мклМЕ/мл, «ДМП+ХСО30 мин» –1,74 мклМЕ/мл.100Через час после начала воздействия 2,5-ДМП концентрация окситоцина снизиласьдо медианного уровня 1,49 мклМЕ/мл, что достоверно отличалось, как от контроля(«H2O») (p=0,032), так и от группы «ДМП30 мин» (p=0,046). При этом, при совместномдействии 2,5-ДМП и ХСО в течение 60 минут концентрация окситоцина не отличалась отконтрольной и составляла 3,13 мклМЕ/мл.
У группы «ХСО60 мин» также не наблюдалиотличий от контрольной группы и группы «ХСО30 мин», и медианная концентрацияокситоцина составляла 1,74 мклМЕ/мл.Изучение концентрации лютеинизирующего гормона (ЛГ) и тестостеронапоказало отсутствие достоверных изменений при действии всех изученных хемосигналов(рис. 26, «В», «Г»). Концентрация ЛГ в плазме крови самцов контрольной группы («H2O»)составляла 1,54 млМЕ/мл (рис. 26, «В»). У животных остальных групп медианнаяконцентрация колебалась в диапазоне от 1,95 (у группы «ХСО 60 мин») до 4,45 млМЕ/мл(у группы «ДМП60 мин»). Медианная концентрация тестостерона у мышей контрольнойгруппы («H2O») составляла 6,8 нМоль/л. У мышей группы «ХСО 30 мин» наблюдалитенденцию к повышению концентрации тестостерона до уровня 31,3 нМоль/л, однако изза высокой гетерогенности контрольной группы отличия не были достоверными (p=0,23)(рис.
26, «Г»). Медианные концентрации тестостерона у остальных групп также неотличались друг от друга и от контроля («H2O») и колебалась в диапазоне от 6,2 нМоль/л(у самцов группы «ХСО60 мин»), до 11,5 нМоль/л (у группы «ДМП+ХСО30 мин»).Таким образом, было выявлено, что при действии 2,5-ДМП, но не ХСО происходитповышение концентрации стресс-гормона кортикостерона (через 30 мин) и понижениеконцентрации «анти-стресс гормона» окситоцина (через 60 мин) в плазме крови самцовмышей линии CBA. Однако роль стресс-гормонов в генотоксических эффектах стрессаоставалась неизвестной.3.7. Эксперименты 7 и 8.
Исследование роли глюкокортикоидных гормонов икатехоламинов в цитогенетических эффектах на клетках костного мозга самцовлинии СВА при действии 2,5-ДМП и иммобилизацииДалее была изучена роль глюкокортикоидов и катехоламинов в генотоксическомэффектестресса.фармакологическимДляэтогоблокаторомнасамцовсинтезамышейлинииCBAглюкокортикоидоввоздействовали(метирапоном)–Эксперимент 7 или блокатором β2-адренорецепторов (пропранололом) – Эксперимент 8, азатем исследовали наличие нарушений митоза при иммобилизационном стрессе ивоздействии 2,5-ДМП (табл. 2).101Таблица 2. Частота митотических нарушений в клетках костного мозга (%) самцов линииСВА после совместного действия стрессорных воздействий – 2,5-ДМП «ДМП» илииммобилизации «ИММ» и блокаторов стресс-гормонов метирапона «М» и пропранолола«П».ВариантвоздействияК1ДМП1ИММ1К+МДМП + МИММ + МК2ДМП2ИММ2К+ПДМП + ПИММ + ПЧисложивотных555555666666Числоделений10291254104610291036828103212601256123712501245Частоты отдельных типов нарушений (%)ОМОХОФМП0,491,360,290,680,881,590,960,880,861,910,571,050,491,360,390,580,481,450,680,870,601,330,480,970,481,070,481,070,712,060,711,270,801,990,561,110,731,370,570,320,561,760,481,200,321,770,560,96Общий%2,824,31*4,40*2,823,473,383,104,76*4,46*2,994,003,61Примечания: забор материала производили через 22 часа после окончания стрессорныхвоздействий, длительность которых составляла 2 часа.
«К» контрольное воздействие –предоставление воды при отсутствии иммобилизации. Знаком плюс «+» – обозначеносочетанное воздействие двух факторов. ОМ – одиночный мост; ОХ – отставшаяхромосома; ОФ – одиночный фрагмент; МП – множественные перестройки; общий % –суммарная частота всех типов повреждений.В верхней половине таблице представлены результаты эксперимента с использованиемметирапона,а в нижней – пропранолола. Звездочками помечены группы достоверноотличающиеся от контроля («*» - p<0,05) критерий ANOVA.В обоих экспериментах контрольные группы не различались; кроме того, не былоотличий между группами, которые подвергали иммобилизации, а также – подвергализапаховому воздействию 2,5-ДМП. Поэтому данные соответствующих групп разныхповторностей были объединены (рис. 27, «А», «Б»), а результаты представлены взависимости от типа стрессора.
Данные всех групп были распределены нормально и былипроанализированы критерием ANOVA.Частота нарушений митозов у мышей объединенной контрольной группы составляла2,95%. Трехдневное пероральное воздействие пропранололом (при добавлении его впитьевую воду), как и инъекция метирапоном, не привели к изменению частотыхромосомных перестроек, частота нарушений митозов составила 2,99% (для группы«К+П») и 2,82% (для группы «К+М») (рис. 27, «А», «Б»).102Рис. 27.
(А), (Б) Частота митотических нарушений в клетках костного мозга (М±SE,%)самцов линии СВА после совместного действия стрессорных воздействий – 2,5-ДМП«ДМП» (А) или иммобилизации «ИММ» (Б) и блокаторов стресс-гормонов метирапона«М» и пропранолола «П». «К» - контрольное воздействие. Знаком плюс «+» - обозначеносочетанноевоздействиедвухфакторов.Звездочкамипомеченыдостоверноразличающиеся группы («*» – p<0,05; «***» – p<0,001), критерий ANOVA.(В) Спектры различных нарушений митоза у контрольной группы «К», при действии 2,5ДМП «ДМП» и иммобилизации «ИММ».(Г), (Д) Влияние пропранолола (Г) и метирапона (Д) частоту стресс-индуцированныхнарушений митоза (%). На графиках показаны среднее, максимальные и минимальныезначения нарушений митоза, а также – межквартильные интервалы.
Достоверностиразличий и подписи, аналогичны (А) и (Б).Двухчасовое воздействие 2,5-ДМП (рис. 27, «А») с последующим 22-часовымпериодом адаптации (без предоставления запаха) привели к повышению частоты НМ уобъединенной группы «ДМП» в 1,5 раза до уровня 4,53% (отличия от контрольных групп«К», «К+М» и «К+П» достоверны, p<0,001). Предварительная инъекция метирапонапривела к снижению частоты НМ, по сравнению с группой «ДМП», на 1% до уровня3,47% (p<0,05), при этом группа «ДМП+М» не отличалась, как от контроля «К», так и отконтрольных мышей, которым вводили метирапон «К+М». Средняя частота НМ при103совместном действии пропранолола и 2,5-ДМП (группа «ДМП+П») составила 4,08%, чтоне имело достоверных отличий, как от группы «ДМП», так и от группы«К+П»(воздействие пропранололом на контрольную группу). При этом было обнаруженодостоверное отличие группы «ДМП+П» от контроля «К» (p<0,05).Двухчасовая иммобилизация с последующим 22-часовым периодом адаптации(группа «ИММ») (рис.
27, «Б») привела к повышению частоты НМ у объединеннойгруппы в 1,45 раза до уровня 4,31% (отличия от контрольных групп «К», «К+М» и «К+П»достоверны, p<0,001).Совместное действие иммобилизации и метирапона (группа «ИММ+М») привело кдостоверному снижению частоты НМ, по сравнению иммобилизацией «ИММ» (p<0,05),до уровня 3,38% (рис. 27, «Б»). Данный показатель не отличался от контрольных групп«К» и «К+М».Совместное действие иммобилизации и пропранолола («ИММ+П») нейтрализовалодействие иммобилизациии и привело снижению частоты НМ, по сравнению с группой«ИММ» (p<0,05) до 3,61%. Данный показатель не отличался контрольных групп «К» и«К+П».Воздействие 2,5-ДМП («ДМП») и иммобилизации («ИММ») не различалось по силегенотоксического эффекта.Анализ спектров различных нарушений митоза показал, что все исследованныегруппы не отличались друг от друга по соотношению отдельных типов нарушений.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
