Диссертация (1145717), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Через 2 часа капсулу убирали. Следующие 22часа никаких воздействий на мышей не осуществляли.2) Группе «М» инъецировали внутрибрюшинно 150 мкл физиологического раствора,содержащего метирапон. Через 30 минут после инъекции на решетке клетки размещаликапсулу с дистиллированной водой. Через 2 часа капсулу убирали. Следующие 22 часаникаких воздействий на мышей не осуществляли.3) Группе «ДМП» вводили внутрибрюшинно физиологический раствор, а через 30 минутна решетке клетки размещали капсулу с раствором 2,5-ДМП.
Через 2 часа капсулуубирали. Следующие 22 часа никаких воздействий на мышей не осуществляли.4) Группе «ДМП+М» инъецировали внутрибрюшинно 150 мкл физиологическогораствора, содержащего метирапон. Через 30 минут на решетке клетки размещали капсулус раствором 2,5-ДМП. Через 2 часа капсулу убирали. Следующие 22 часа никакихвоздействий на мышей не осуществляли.5) Группе «ИММ» инъецировали внутрибрюшинно физиологический раствор, а через 30минутмышейиндивидуальнорассаживаливиммобилизационныекамеры.Иммобилизацию проводили в течение 2-х часов. После ее завершения мышей выпускалиобратно в клетку, где онинаходились следующие 22 часа без дополнительныхвоздействий.6) Группе «ИММ+М» инъецировали внутрибрюшинно 150 мкл физиологическогораствора, содержащего метирапон.
Через 30 минут после инъекции мышей индивидуальнорассаживали в иммобилизационные камеры. Иммобилизацию проводили в течение 2-х77часов. После ее завершения мышей выпускали обратно в клетку, где они находилисьследующие 22 часа без дополнительных воздействий.Через 22 часа после завершения последнего воздействия животных забивалиметодом цервикальной дислокации. Для проведения ана-телофазного теста костный мозгфиксировали и шифровали согласно стандартной процедуре (см. разделы 2.2.2., 2.2.3.).2.2.12.
Эксперимент 8. Исследование роли катехоламинов в цитогенетическихэффектах на клетках костного мозга самцов линии СВА при действии 2,5-ДМП ииммобилизацииЦель эксперимента: исследовать влияние β-адреноблокатора – пропранолола – нагенотоксические эффекты 2,5-ДМП и иммобилизации у самцов линии CBA.Эксперимент проводили с использованием 36 самцов мышей линии СВА.Рис. 15. Схема эксперимента по изучению роли катехоламинов в возникновениигенотоксических эффектов при действии 2,5-ДМП и иммобилизации. «Nжив.
»–количество животных в группе. Остальные пояснения в разделе «протокол эксперимента».78За три дня до начала стрессорных воздействий 18 мышам в питьевую воду начиналидобавлять пропранолол (>99%, Alinda), из расчета 10 мг вещества на кг массы мыши вдень (по Hara et al., 2013). Пропранолол является неселективным блокатором βадренорецепторов,препятствуясвязываниюэтихрецепторовсадреналиноминорадреналином.(Fraundorfer et al., 1994).В качестве хемосигнала использовали 0,01% водный раствор 2,5-ДМП (1,5 мл),предоставляемый по стандартной методике (см. раздел 2.2.2).Другимвоздействиемявляласьдвухчасоваяиммобилизация,проводимаястандартным способом (см.
Эксперимент 5, пункт 2.2.8.).В качестве контроля использовали мышей, которые свободно передвигались вклетке. При этом на решетку клетки помещали капсулу с фильтровальной бумагой,содержащей дистиллированную воду.Протокол эксперимента. Мыши были разделены на 6 экспериментальных групп, по 6мышей каждая. Каждую группу содержали в отдельном помещении без воздушногоконтакта с соседними помещениями.1) Контрольной группе «К» за три дня до начала эксперимента меняли в поилке воду начистую, а в день эксперимента на решетке клетки размещали капсулу, содержащуюфильтровальную бумагу с 1,5 мл дистиллированной воды. Через 2 часа капсулу убирали.Следующие 22 часа никаких воздействий на мышей не осуществляли.2) Группе «П» за три дня до начала воздействий заменяли воду в поилке на новую,содержащую пропранолол в расчете на потребление 10 мг/кг/день.
В день экспериментана решетке клетки размещали капсулу, содержащую фильтровальную бумагу с 1,5 млдистиллированной воды. Через 2 часа капсулу убирали. Следующие 22 часа никакихвоздействий на мышей не осуществляли, при этом мыши продолжали пить воду спропранололом до момента фиксации материала.3) Группе «ДМП» за три дня до начала эксперимента меняли в поилке воду на чистую. Вдень эксперимента на решетке клетки размещали капсулу, содержащую фильтровальнуюбумагу с 1,5 мл 0,01% раствора 2,5-ДМП. Через 2 часа капсулу убирали. Следующие 22часа никаких воздействий на мышей не осуществляли.4) Группе «ДМП+П» за три дня до начала воздействий заменяли воду в поилке на новую,содержащую пропранолол в расчете на потребление 10 мг/кг/день.
В день экспериментана решетке клетки размещали капсулу, содержащую фильтровальную бумагу с 1,5 мл0,01% раствора 2,5-ДМП. Через 2 часа капсулу убирали. Следующие 22 часа никаких79воздействий на мышей не осуществляли, при этом мыши продолжали пить воду спропранололом до момента фиксации материала.5) Группе «ИММ» за три дня до начала эксперимента меняли в поилке воду на чистую. Вдень эксперимента мышей индивидуально рассаживали в иммобилизационные камеры.Иммобилизацию осуществляли в течение двух часов.
После ее завершения мышейвыпускали обратно в клетку, где они находились следующие 22 часа без дополнительныхвоздействий.6) Группе «ИММ+П» за три дня до начала воздействий заменяли воду в поилке на новую,содержащую пропранолол в расчете на потребление 10 мг/кг/день. В день экспериментамышей индивидуально рассаживали в иммобилизационные камеры. Иммобилизациюосуществляли в течение двух часов. После ее завершения мышей выпускали обратно вклетку, где они находились следующие 22 часа без дополнительных воздействий, приэтом мыши продолжали пить воду с пропранололом до момента фиксации материала.Через 22 часа после завершения стрессорных воздействий животных забивалиметодом цервикальной дислокации. Для проведения ана-телофазного теста костный мозгфиксировали и шифровали согласно стандартной процедуре (см.
разделы 2.2.2., 2.2.3.).2.2.13. Эксперимент 9. Исследование влияния феромона 2,5-ДМП и хемосигналовсамок-одиночек, а также сочетанного действия этих хемосигналов на стабильностьхромосомного аппарата клеток костного мозга самцов мышей линии СВАЦель эксперимента: изучить совместное действие хемосигналов 2,5-ДМП и ХСО настабильность генома клеток костного мозга самцов линии CBA.Эксперимент проводили с использованием 56 самцов и 20 самок (донорыхемосигналов) мышей линии СВА.Сбор хемосигналов самок-одиночек осуществляли согласно стандартной процедуре(см. раздел 2.2.9). Поскольку было проведено 2 повторности, суммарно былоиспользовано 20 самок.
В качестве контроля использовали чистую подстилку. Привоздействии ХСО (или чистой подстилкой) опилки докладывали в клетку к самцам безвысаживания мышей, прямой контакт человека с мышами исключали.Другим действующим фактором являлся 0,01% водный раствор 2,5-ДМП (1,5 мл),предоставляемый по стандартной методике (см. раздел 2.2.2).80Рис.
16. Схема эксперимента по изучению цитогенетических эффектов от раздельного исочетанного воздействия 2,5-ДМП и хемосигналов самок-одиночек. «N жив.» – количествоживотных в группе. Плюсом разделено количество мышей в первой и второйповторностях. Остальные пояснения в разделе «протокол эксперимента».Протокол эксперимента. Было проведено две повторности эксперимента. Мыши былиразделены на 5 экспериментальных групп, по 5-6 мышей каждая. Каждая группанаходилась в отдельном помещении и не имела воздушного контакта с соседними.1) У контрольной группы «К» в клетке два дня подряд заменяли подстилку на чистую иодновременно со второй заменой размещали на решетке клетки перфорированнуюкапсулы с дистиллированной водой.2) У группы «ДМП», также как и у контрольной группы, оба дня подстилку заменяли начистую, но на второй день на решетке клетки располагали капсулу, содержащуюфильтровальную бумагу с 1,5 мл 0,01% раствора 2,5-ДМП.
Капсулу убирали через 24часа.3) Животных группы «ХСО» дважды подвергали процедуре замены подстилочногоматериала, подкладывая опилки, загрязненные самками-одиночками. Таким образом,хемосигналы самок действовали на самцов в течение 48 ч. Во время второй замены нарешетке клетки размещали капсулу с дистиллированной водой.4) У группы «предХСО+ДМП» (для изучения возможности предварительной модуляцииэффекта 2,5-ДМП) за 48 часов до фиксации материала в клетке меняли подстилку на81подстилку, загрязненную самками-одиночками. За 24 часа до фиксации материалаподстилку самок-одиночек заменяли на чистую, а на клетку располагали капсулу,содержащую фильтровальную бумагу с 1,5 мл 0,01% раствора 2,5-ДМП.
Воздействие 2,5ДМП осуществляли 24 часа.5) В группе «ДМП+ХСО» за 48 часов до фиксации материала в клетке меняли половинуподстилки на чистую. За 24 часа до фиксации материала производили замену подстилкинаэквивалентноеколичествоподстилки,загрязненнойсамками-одиночкамисодновременным размещением на решетке клетки перфорированной капсулы с 1,5 мл0,01% раствора 2,5-ДМП. Воздействие обоими хемосигналами продолжалось 24 часа.Замену подстилки в дни эксперимента осуществляли без высаживания мышей изклеток, поэтому заменяли только половину подстилочного материала.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
