Диссертация (1144820), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Метаболизм гомоцистеинаMTHFR677C>T/rs180метилентетрогидроф 1133олат редуктазаMTRRметионинсинтазмитохондриальное окисление,транспорт ЖК, синтез липопротеинов,катаболизм триглицеридов и обменфакторов воспаления.Выполняет функции по регуляциигенов, вовлеченных в окисление ЖК иобмен холестерина.66A>G(I22M)/rsУчаствует в АТФ зависимомтранспорте ионов калия.Участвует в обмене гомоцистеина.Катализирует превращение 5,10метилентетрагидрофолата в 5метилентетрагидрофолат – субстратдля реметилирования гомоцистеина вметионин.Участвует в обмене гомоцистеина.126редуктаза1801394MTR метионин2756A>G/Участвует в обмене гомоцистеина.синтазаrs1805087CBS цистатион бета- A114VУчаствует в обмене гомоцистеина исинтазаметионина.IX.
Структурная и функциональная организация миокардаMYH7 белок7864С>TКомпонент структурного белкатяжелой цепи βмиозина.миозинаADD1 аддуцин460G>TБелок цитоскелета мембраны.Запускает сборку спектрин-актиновойсети. Вовлечен в передачу сигналавнутри клетки, взаимодействует соструктурными белкамицитоплазматической мембраны,которые влияют на транспорт ионовчерез мембрану.SELP селектин P76666А>СПринимают наибольшее участие в(Thr715Pro),адгезии лейкоцитов.V599L, S290NSELE селектин E561А>ТСпособствует адгезии, главным(Ser128Arg)образом на стадии раннего развития1839С>Татеромы.(Leu554Phe)98G>TPPP3R1 (CNB1)5I/5D /Продукт синтеза данного гена входит вкальциневринrs199565681состав регуляторной субъединицыСа2+ -модулинфосфотазы,являющейся одним из основныхрегуляторов концентрации ионов Са ворганизме.X.
ДругиеIGF1R рецептор157121A>G/rs9 Вовлечен в передачу «сигналаинсулиноподобного07806инсулина».фактора роста 1IGFBP380143T>G/rs57 Является основным связывающиминсулиноподобный42694белком для IGF-I и IGF-II в сывороткефактор ростачеловека в постнатальный период.SOD2Ala16ValУчаствует в митохондриальнойсупероксиддисмутаз (401T>C)/детоксикации свободных радикалов,а2rs4880играя первостепенную роль вобеспечении резистентности клетокпротив суперокиси, произведенной как127AMPD1 скелетномускульная аденозинмонофосфатдезаминаза (Мизоформа)FTO альфакетоглутаратзависимаядиоксигеназа34C>T/rs1760272980493T>G/rs17817449побочный продукт окислительногофосфорилирования.Участвует в ряде биохимическихпроцессов азотистого обмена.Регулирует экспрессию генов,участвующих в метаболизме,контролирует пищевое поведение изатраты энергии.128ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ2.1.Созданиеколлекцийобразцовбиологическогоматериала.Формирование клинических групп.Исследование проводили на образцах биологического материала,полученных от женщин с патологией беременности (гестоз) (ФГБНУ«НИИ АГиР им.Д.О.Отта») и без таковой (Роддома №18 г.
СанктПетербурга) общей численностью 250 человек, на образцах ДНК доноров 228человек(ФГУ«Российскийнаучно-исследовательскийинститутгематологии и трансфузиологии» ФМБА России и ФГБНУ «НИИ АГиРим.Д.О.Отта»), детей-школьников популяционной группы - 294 человека(ГУЗГП № 109, ДПО № 64 Фрунзенского района г. Санкт-Петербурга иСанкт-Петербургскаягосударственнаяпедиатрическаямедицинскойакадемии МЗ и СР РФ), детей с АГ – 170 человек (Санкт-Петербургскаягосударственная педиатрическая медицинской академии МЗ и СР РФ) идетей с ожирением и метаболическим синдромом – 162 человек (ГУЗГП №109, ДПО № 64 Фрунзенского района г.
Санкт-Петербурга).В исследуемые группы не были включены образцы ДНК лицнеславянского этнического происхождения, а также образцы ДНК, несоответствующие ниже приведенным критериям.Так, из группы беременных женщин с гестозом предварительно былиисключены пациентки с тромбозами в анамнезе и с приобретеннымиформами тромбофилии (антифосфолипидный синдром). В окончательномварианте эта группа включала 146 женщин с гестозом средней, тяжелойстепени и преэклампсии (согласно классификации Савельевой и соавт.(Савельева, Кулаков, 2000).
Диагноз гестоз устанавливали при наличии неменее двух клинических проявлений в следующих сочетаниях: повышениеартериальногодавления(АД)иотеки,отекиипротеинурия,сопровождающаяся повышением АД, а также классической триадысимптомов - отеки, гипертензия, протеинурия.129Контрольную группу составили 101 женщина с физиологическимтечением беременности («беременные, контроль»), у которых отсутствовалив анамнезе тромбозы, хронические и инфекционные заболевания, другаяакушерская патология.Группу доноров («Доноры») составили 228 человек (154 мужчин и 74женщин) славянской национальности, без хронических заболеваний ивыраженной патологии в анамнезе.Группу детей с артериальной гипертензией составили 170 человек(«Дети с АГ»). Диагноз ставился в тех случаях, когда при казуальныхизмерениях артериального давления (АД) у ребенка неоднократно (не менее3-х раз при отдельных визитах к врачу) отмечался повышенный уровень АД(Образцова и др., 2005).Группу детей с ожирением и метаболическим синдромом составили162 человека («Дети с МС»).
Из группы были исключены дети с вторичныможирением, гипоталамическим синдромом пубертатно-юношеского периода,врожденными пороками развития органов и систем.Контрольная группа детей – школьников была представлена 294субъектами с нормальной или недостаточной массой тела, 1-й или 2-йгруппой здоровья.Основные характеристики групп представлены в таблице 2.130Таблица 2. Характеристика групп.Беременные,контроль104-ДонорыДети с АГДети с МСШкольникиОбщие данныеВсего, NМужчины (мальчики), NБеременные,гестоз146-23315517012416272294131Женщины (девочки), N14610478469016319,426,037,3182153100110120---607080---------19,823,027,42*8,614,017,02**1091301472***65851002****24,231,240,5513.117**120152.5220***6597,51501*1116171**1121301491***6272891****17,323,136,500,0040,2---Средний возраст173043САД, мм рт стДАД, мм рт стИндексмассы(ИМТ), кг/м2Белок в мочетела*00,58612,6****87.3110.613831.363.59511,91930,5Примечание: возраст, САД (систолическое АД), ДАД (диастолическое АД), ИМТ (индекса массы тела) указаны с 95%доверительным интервалом.*, **, ***, ****- статистически значимые отличия между беременными с гестозом и контрольной группой беременных поданным возраста (р=8,843*10-5), САД (р< 2,2*10-16), ДАД (р< 2,2*10-16) и белка в моче (р< 2,2*10-16).1*, 1**, 1****, 1****- статистически значимые отличия между детьми с АГ и школьниками по данным возраста (р=5,666*10-16),САД (р< 2,2*10-16), ДАД (р< 2,2*10-16) и ИМТ (р< 2,2*10-16).2*, 2**, 2****, 2****- статистически значимые отличия между детьми с МС и школьниками по данным возраста (р=0,065), САД-6(р=1,886*10 ), ДАД (р< 2,2*10-16) и ИМТ (р< 2,2*10-16).При сравнении выборок использован U-критерий Манна-Уитни.131Анализ эпигенетических маркеров и экспрессии генов был проведен набиологических образцах от 17 русских женщин, родоразрешенных придоношенных сроках беременности путем операции кесарева сечения.
Девятьженщин имели физиологически нормальную беременность (контрольнаягруппа) и восемь – беременность, осложненную тяжелым гестозом. Висследование эпигенетических маркеров были включены образцы плацент отшести пациенток контрольной группы и шести больных гестозом.Для анализа экспрессии генов использованы восемь плацент женщин сгестозом (три с приэклампсией и доношенной беременностью, и пять спреэклампсией, осложненной гипертензией) и шесть образцов плацентконтрольной группы.
Возраст обследованных женщин контрольной группыварьировал от 27 до 30 лет, женщин с гестозом от 20 до 43 лет. Критериямиотбора женщин (рожениц) контрольной группы являлось отсутствие ванамнезетромбозовсоматическогоианамнеза,тромботическихинфекционныхосложнений,заболеванийотягощенногоиакушерскихпатологий во время беременности (Айламазян, Мозговая, 2008). Диагнозтяжелый гестоз (приэклампсия) был установлен по наличию главныхклинических симптомов – протеинурия, отеки, гипертензия (повышениесистолического давления от 135 мм рт. ст.
и выше, диастолического давленияот 85 мм рт. ст. и выше) в соответствии с балльной системой классификациитяжестигестозаГ.М.Савельевой(Савельева,Кулаков,2000).Экстрагенитальная патология пациенток с гестозом включала ожирение,вегетососудистую дистонию по гипертоническому типу, хроническийпиелонефрит (Айламазян, Мозговая, 2008). Отдельно была выделена группаженщин с преэклампсией, развившейся на фоне гипертонической болезни.Образцы плацент были получены в родильных отделениях ФГБНУ«НИИ АГиР им.Д.О.Отта» и ГБУЗ «Родильный дом №10», г. СанктПетербург.
От всех лиц, участвовавших в исследовании, было полученоинформированное согласие.1322.2. Выделение геномной ДНК.2.2.1. Экстракция ДНК из лимфоцитов периферической крови.Выделение ядерной ДНК проводили в соответствии с методикой,приведенной в руководстве Сэмбрука (Sambrook et al., 1989).КонцентрациюДНКоценивали,используяспектрофотометр(«Nanodrop», «Termo Scientific», США) при измерении оптической плотностипри 260 и 280 нм. Считали, что выделенное ДНК высокого качества, еслиотношение А260/A280 было > 1,8. ДНК хранили в буфере ТЕ при +4оС.2.2.2.
Экстракция ДНК из клеток буккального эпителия.1. Соскобы эпителия ротовой полости помещали в пробирку на 2 мл,заполненную физиологическим раствором (0,9% NaCl). Центрифугировали 5мин при 5000 об/мин. Супернатант сливали.2. В пробирку, содержащую осадок добавляли 400 мкл буфера дляпротеиназы К.3. Далее см.п.4 раздела 2.2.1.2.2.3. Экстракция ДНК из ворсин плаценты.1. С помощью стерильных пинцетов отделяли клетки плаценты.
К нимдобавляли 400 мкл буфера, состава: 10 мМ Трис-HCI (pH 10,5), 0,15M NaCI,1 мМ ЭДТА.2. Далее см.п.4 раздела 2.2.1.2.3. Обработка ДНК бисульфитом натрия.Для бисульфитной обработки геномной ДНК использовали наборреагентов «EpiTect Bisulfite Kit» («Qiagen», США). Все процедуры проводилив соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Далее осуществлялиочистку ДНК, согласно протоколу фирмы производителя. Очищенную ДНКхранили при температуре -20ºС.1332.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
