Диссертация (1144791), страница 20
Текст из файла (страница 20)
Диаметрэндотрахеальной трубки выбирался соизмеримым с размером трахеи животного,что позволяло ограничить раздражение и растяжение стенок гортани и трахеи, атакже способствовало снижению саливации и гиперсекреции желез слизистойоболочки верхних дыхательных путей, а также являлось мнеее травматичным.102Разработанная конструкция позволяла осуществлять удаление накапливающейсяв верхних дыхательных путях слизи в процессе всего эксперимента без полногопрекращения искусственной вентиляции легких и остановки ИВЛ.Рис. 3.1.
Чертеж конструкции разработанной интубационной трубки (патент на полезнуюмодель RUS 121389 27.04.2012). Интубационная трубка – 1; отвод для аспирации слизи – 2;заглушка – 3; переходник – 4; эндотрахеальная трубка – 5; проксимальный конец – 6.Разработка интубационной трубки была продиктована тем, что известныетрубки, выпускаемые рядом фирм, имеют прямую цилиндрическую форму иизготовлены из жёсткого полиэтилена с наружным диаметром 2,5-3 мм и длиной3-5 см. Проксимальный конец трубки соединяется с выходным шлангом аппаратаИВЛ, а дистальный конец трубки вводится в трахею животного. Одним изсерьезных недостатков таких интубационных трубок является то, что в ходепродолжительного эксперимента нередко возникает ситуация, когда в трахее и,собственно, в интубационной трубке скапливается слизь, частично илиполностью обтурирующая просвет дыхательных путей.
В случае накопленияслизи эффективная вентиляция легких нарушается, что проявляется в видегипоксии животного, респираторного ацидоза и, как следствие, сниженияартериального давления. Удаление слизи в этом случае требует полногоотсоединения интубационной трубки от выходного шланга и аспирации слизитонким катетером. На этот период проведение ИВЛ становится невозможным.При возобновлении адекватной вентиляции полное восстановление газового103состава крови и гемодинамических параметров происходит лишь спустянесколькодесятковминут.Этосущественновлияетнадальнейшуюинтерпретацию результатов эксперимента. Другим недостатком таких трубокявляется фиксированный диаметр дистального конца трубки, совпадающий с еедиаметром.
Поскольку диаметр трахеи животного зависит как от его видовойпринадлежности, так и от массы животного, то чрезмерно большой по диаметруинтубационной трубки дистальный конец может вызвать раздражение ирастяжение стенок гортани и трахеи, что в свою очередь приведет к повышеннойсаливации и гиперсекреции желез слизистой оболочки верхних дыхательныхпутей.Вследствиеэтогоможетвозникнутьдополнительнаяобтурациядыхательных путей и интубационной трубки слизью, которая в свою очередьприведет к ее закупорке.
Слишком малый диаметр интубационной трубки, а,следовательно, ее дистального конца не будет обеспечивать эффективнуювентиляцию легких.После интубации, животное располагали на спине за конечностификсировали к операционному столу. На коже проводили L-образный разрез посредней линии груди, а затем в подмышечную область, после чего кожный лоскутотделяли по линиям разреза. Аналогичным образом, отступя 1 мм от среднейлинии влево, отделяли большую и малую грудные мышцы. Затем следовал разрезпо нижнему краю III ребра, через который осуществляли доступ в груднуюклетку.
Проводили выделение дуги аорты и отходящих от нее магистральныхсосудов: плечеголовного ствола, левой подключичной артерии и левой общейсонной артерии (tr. brachiocephalicus, a. subclavia sin., a. carotis communis sin.).Схематичное изображение места окклюзии магистральных сосудов представленона рисунке 3.2.104Рис. 3.2. Схематичное изображение мест окклюзии магистральных сосудов, отходящих от дугиаорты: плечеголовного ствола, левой подключичной артерии и левой общей сонной артерии (tr.brachiocephalicus, a. subclavia sin., a. carotis communis sin.).105Под препарированные сосуды подводили лигатуры (рис. 3.3) и затемнакладывали микрохирургические зажимы, что приводило к прекращениюкровоснабжения головного мозга. Снятие зажимов позволяло восстановитьперфузию головного мозга.
Далее для ликвидации пневмоторакса послойноушивали операционную рану. Герметизацию грудной полости проводили за счетналожения межреберных швов и закрытия раны отделенными ранее пластамимышц и кожным лоскутом. Затем отдельными узловыми швами сшивалипроведенные в начале операции L-образные разрезы кожи. Швы обрабатывалииодинолом. Далее проводили восстановление самостоятельного дыхания. Дляэтого из ротовой полости и трахеи удаляли слизь, после чего проводилиотключениеаппаратаИВЛ.Через2-3минутыпослевозникновениясамостоятельного дыхания животное экстубировали. До момента выходаживотных из наркоза их температура поддерживалась на уровне 37.0 ± 0.5°C засчет внешнего источника тепла.Рис.
3.3. Дуга аорты крысы с подведенными лигатурами под плечеголовной ствол, левуюподключичную артерию и левую общую сонную артерию (tr. brachiocephalicus, a. subclavia sin.,a. carotis communis sin.).1063.2 Валидация разработанной модели полной глобальной ишемииреперфузии головного мозга у крысВ настоящем разделе описаны результаты, доказывающие применимостьразработанной модели полной глобальной ишемии-реперфузии головного мозгапутем временной окклюзии магистральных артерий, отходящих от дуги аорты икровоснабжающих головной мозг. Верификация наличия ишемии и реперфузииголовного мозга в указанной модели производилась несколькими способами.3.2.1 Результаты экспериментов, свидетельствующих о возникновении ишемииголовного мозга при использовании разработанной моделиДля подтверждения отсутствия кровоснабжения головного мозга приокклюзии магистральных артерий, отходящих от дуги аорты, проводилиспециальные дополнительные эксперименты.Первая серия дополнительных экспериментов.
У 5 крыс после наложениямикрохирургических зажимов на плечеголовной ствол, левую подключичнуюартерию и левую общую сонную артерию пунктировали обе ОСА и обе а.vertebralis через for. аlare первого шейного позвонка. При наложенных зажимахна магистральные сосуды, отходящие от дуги аорты, кровь из пунктированныхсосудов не вытекала, тогда как при снятии зажимов наблюдалось сильноекровотечение из сонных и позвоночных артерий. Данное явление былозафиксировано у всех животных (n=5), использованных в эксперименте.Вторая серия дополнительных экспериментов заключалась во введениикрасящего вещества (использовали 1,5 мл 1% синего Эванса) in vivo в бедреннуюартерию крысы при наличии (n=5) и отсутствии (n=4) окклюзии магистральныхартерий, отходящих от дуги аорты. В группе с окклюзией магистральныхсосудов, отходящих от дуги аорты, после внутривенного введения синего Эвансане наблюдали окрашивания мозга и внутренней поверхности черепа, тогда как в107группе без окклюзии магистральных сосудов, отходящих от дуги аорты, отмечалиинтенсивное окрашивание данных структур в синий цвет (рис.
3.4).Рис. 3.4. Результаты эксперимента, подтверждающего возникновение ишемии головного мозгапри использовании разработанной модели. Введение 1,5 мл 1% синего Эванса in vivo вбедренную артерию крысы при наличии (отсутствие синей окраски) и отсутствии (синяяокраска) окклюзии магистральных артерий, отходящих от дуги аорты.Ишемическое повреждение головного мозга длительностью 10 и 15 минутмоделировали разработанным способом. Летальность оценивали к 24 и 48 часампосле операции. Животные случайной выборкой были распределены наследующие экспериментальные группы:1) «Ишемия 15 минут» (n=12).
В группу входили крысы, которымнакладывали микрохирургические зажимы на магистральные артерии,отходящие от дуги аорты (плечеголовной ствол, левая подключичнаяартерия и левая общая сонная артерия) на 15 минут.2) «ЛО 15» (n=9). Животным проводили аналогичные манипуляции безналожения зажимов на магистральные артерии в течение 15 минут.3) «Ишемия 10 минут» (n=10). В группу входили крысы, которымнакладывали микрохирургические зажимы на магистральные артерии,отходящие от дуги аорты, на 10 минут.4) «ЛО 10» (n=8). Животным проводили аналогичные манипуляции безналожения зажимов на магистральные артерии в течение 10 минут.Летальность животных в первые сутки после проведения операции значимо неотличаласьмеждуложнооперированнымиживотнымииживотнымис108моделированием глобальной ишемии предложенным способом (P>0,05). Однакоко 2-м суткам летальность в группе «Ишемия 15» была существенно выше посравнению с группой «ЛО 15» (P<0,05) и составила 58,6% (табл.
3.1).Таблица 3.1Летальность крыс при моделировании полной глобальной ишемии-реперфузииголовного мозга разработанным методомЭкспериментальнаягруппа1-е сутки после операции2-е сутки после операцииЛО 1511,111,1(n=9)(1/9)(1/9)ЛО 10012,5(n=8)(0/8)(1/8)Ишемия 15 мин25,058,3*(n=12)(3/12)(7/12)Ишемия 10 мин10,030,0(n=10)(1/10)(3/10)(n)Различия значимы: * по сравнению с показателем в группе «ЛО 15» при Р<0,05.При длительности ишемического повреждения 10 минут достоверныхразличий в летальности при сравнении с соответствующей ложнооперированнойгруппой обнаружено не было (P>0,05).
Увеличение летальности животных ко 2-мсуткам после 15-минутной глобальной ишемии головного мозга, по-видимому,объясняется феноменом отсроченной гибели нейронов (Kirino T., 1982). Приуменьшении времени моделирования глобальной ишемии до 10 минут,летальность ко 2-м суткам реперфузионного периода уменьшалась до 30,0%(табл. 3.1).1093.2.2 Гистологический анализ повреждения головного мозга при моделированииполной глобальной ишемии-реперфузии разработанным способомГистологический анализ фронтальных срезов головного мозга ко 2-мсуткам реперфузионного периода после моделирования 15-минутной ишемиивыявил морфологические изменения в клетках коры, стриатума и гиппокампа.Изменения выражались в виде периваскулярного и перицеллюлярного отека,повреждения всех полей гиппокампа, преимущественно пирамидных нейроновполей СА1 и СА3, со сморщиванием и набуханием, гиперхроматозом ихроматолизом клеток.
В группе ложнооперированных крыс пирамидные нейроныгиппокампа имеют круглые бледно окрашенные ядра, после перенесенной 15минутной ишемии головного мозга, погибшие и необратимо поврежденныенейроны имели ядра в состоянии пикноза (рис. 3.5).Ишемическое повреждение, вызванное 10-минутной глобальной ишемией споследующим реперфузионным периодом длительностью 48 часов, такжеприводило к морфологическим изменениям в различных структурах головногомозга с преимущественным повреждением коры и полей СА1 и СА3 гиппокампа(рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
