Диссертация (1141275), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Для ихпроведениянеобходимобылоразработатьметодикикачественногоиколичественного анализа БАВ.4.3. Разработка методик стандартизации таблетокПри проведении исследования были использованы стандартные образцы(РСО эвкалимина и цикориевой кислоты), полученные в лаборатории фитохимииФГБНУ ВИЛАР.ПодлинностьУчитывая сложные по химическому составу БАВ растительных экстрактовэвкалимини эстифан, для определения подлинности выбраны качественныереакции на доминирующие БАВ (терпеноидные фенолальдегиды (эуглобали) итритерпеноиды эвкалипта, а также фенолкарбоновые кислоты экстракта эхинацеипурпурной):– дитерпены – при добавлении раствора ванилина в серной кислоте появляетсяокрашивание от фиолетово-красного до красно-коричневого с фиолетовымоттенком цвета;- оксикоричные кислоты - с раствором железа(III) хлорида наблюдаетсязеленовато-коричневое окрашивание;дополнительное подтверждение – ТСХ с РСО цикориевой кислоты иэвкалимином;- фенолоальдегиды – УФ-спектрофотометрия (Рисунок 28); (УФ-спектрпоглощения раствора из таблеток имеет максимум поглощения при длине волны118280 ± 1 нм1,0001,0000,500Абс.Абс.0,5000,0000,000-0,058-0,058200,00250,00300,00350,00400,00200,00250,00300,00нм.350,00400,00нм.а)б)Рисунок 28.
УФ-спектры поглощения растворов из таблеток (а-состав №4; бсостав №8) при длине волны 280 ± 1 нм.Полученные спектры свидетельствуют о возможности использования их каккачественную характеристику лекарственной формы.Использованные вспомогательные вещества, как в составе №4, так и всоставе №8, не влияют на оптическую плотность растворов, полученных из обоихсоставов.ТСХ – анализ - на хроматограмме испытуемого раствора наблюдаются зоныадсорбции от светло-розового до розового с фиолетовым оттенком цвета науровне зон адсорбции того же цвета на хроматограмме стандартного раствораэвкалимина. Ввиду идентичности хроматограмм из разных составов таблеток –приводится одна хроматограмма (Рисунок 29).119RfRs1,01,50,90,80,70,61,00,50,40,30,50,20,10123Рисунок 29.
Хроматограмма растворов из таблеток (1 - состав №8); 2 –цикориевой кислоты; 3 – эвкалимина, в системе н-бутанол-вода-уксусная кислота(40:10:10) (УФ-свет, 365 нм).Как показали результаты ТСХ-анализа, дополнительных зон адсорбции необнаружено ни в одном из исследованных растворов таблеток (составы №№4 и 8),что свидетельствует об отсутствии каких-либо изменений в комбинированныхсоставах и о возможности использования ТСХ как качественной характеристикилекарственной формы - «таблетки для рассасывания».Количественное определение биологически активных веществ в таблеткахдля рассасывания проводили гравиметрически (эвкалимин) испектрофотометрически (сумма оксикоричных кислот в эстифане) по методикам,описанным в гл.II .Установлено, что в одной таблетке в среднем содержится 25 мг эвкалиминаи 4,5 мг суммы оксикоричных кислот в пересчете на цикориевую кислоту.120Валидация аналитических методикДля подтверждения пригодности разработанных аналитических методикопределения подлинности ЛФ, проведена их валидация.Для проведения испытания на подлинность были взяты экспериментальныеобразцы таблеток трех серий.
Из каждой серии подготовлены две параллельныепробы.Определение специфичности методаКритерий приемлемости:а)оксикоричныекислоты–должнопоявлятьсязеленовато-коричневоеокрашивание;б) дитерпены – должно появляться окрашивание от фиолетово-красного докрасно-коричневого с фиолетовым оттенком цвета;в) фенолоальдегиды – на хроматограмме испытуемого раствора должнынаблюдаться зоны адсорбции от светло-розового до розового с фиолетовымоттенком цвета на уровне зон адсорбции того же цвета на хроматограмместандартного раствора эвкалимина (фенолоальдегиды);г) фенолоальдегиды – УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны (280 ± 1) нм(фенолоальдегиды).Результаты анализа представлены в таблицах 41 – 45.Таблица 41Результаты определения оксикоричных кислот в экспериментальных составахтаблеток для рассасывания с экстрактами эвкалипта прутовидного (эвкалимин) иэхинацеи пурпурной (эстифан)Полученный результатСоответствиеразработаннойметодике1Наблюдается зеленовато-коричневое окрашиваниеСоответствует2Наблюдается зеленовато-коричневое окрашиваниеСоответствует1Наблюдается зеленовато-коричневое окрашиваниеСоответствуетИспытуемыйпрепаратсерия 1серия 2121серия 32Наблюдается зеленовато-коричневое окрашиваниеСоответствует1Наблюдается зеленовато-коричневое окрашиваниеСоответствует2Наблюдается зеленовато-коричневое окрашиваниеСоответствуетТаблица 42Результаты определения дитерпенов в экспериментальных составах таблеток длярассасывания с экстрактами эвкалипта прутовидного (эвкалимин) и эхинацеипурпурной (эстифан)Испытуемыйпрепаратсерия 11Появляется окрашивание фиолетово-красного цветаСоответствует2Появляется окрашивание фиолетово-красного цветаСоответствует1Появляетсяокрашиваниефиолетовым оттенком цветакрасно-коричневогос2Появляетсяокрашиваниефиолетовым оттенком цветакрасно-коричневогос1Появляется окрашивание фиолетово-красного цветаСоответствует2Появляется окрашивание фиолетово-красного цветаСоответствуетсерия 2серия 3СоответствиеразработаннойметодикеПолученный результатСоответствуетСоответствуетТаблица 43Результаты определения фенолоальдегидов с помощью ТСХ вэкспериментальных составах таблеток для рассасывания с экстрактами эвкалиптапрутовидного (эвкалимин) и эхинацеи пурпурной (эстифан)Полученные результатыСоответствиеразработаннойметодике1Нахроматограммеиспытуемогорастворанаблюдаются зоны адсорбции светло-розовогоцвета на уровне зон адсорбции того же цвета нахроматограмме стандартного раствора эвкалимина.Соответствует2Нахроматограммеиспытуемогорастворанаблюдаются зоны адсорбции светло-розовогоцвета на уровне зон адсорбции того же цвета нахроматограмме стандартного раствора эвкалимина.Соответствует1Нахроматограммеиспытуемогорастворанаблюдаются зоны адсорбции светло-розовогоСоответствуетИспытуемыйпрепаратсерия 1серия 2122ИспытуемыйпрепаратПолученные результатыСоответствиеразработаннойметодикецвета на уровне зон адсорбции того же цвета нахроматограмме стандартного раствора эвкалимина.2Нахроматограммеиспытуемогорастворанаблюдаются зоны адсорбции розового сфиолетовым оттенком цвета на уровне зонадсорбции того же цвета на хроматограмместандартного раствора эвкалимина.Соответствует1Нахроматограммеиспытуемогорастворанаблюдаются зоны адсорбции светло-розовогоцвета на уровне зон адсорбции того же цвета нахроматограмме стандартного раствора эвкалимина.Соответствует2Нахроматограммеиспытуемогорастворанаблюдаются зоны адсорбции светло-розовогоцвета на уровне зон адсорбции того же цвета нахроматограмме стандартного раствора эвкалимина.Соответствуетсерия 3Таблица 44Результаты спектрофометрического метода определения фенолоальдегидов вэкспериментальных составах таблеток для рассасывания с экстрактами эвкалиптапрутовидного (эвкалимин) и эхинацеи пурпурной (эстифан)Полученные результатыСоответствиеразработаннойметодике1УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм имеет максимум поглощения при длине волны 280 нмСоответствует2УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм имеет максимум поглощения при длине волны 280 нмСоответствует1УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм имеет максимум поглощения при длине волны 281 нмСоответствует2УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм имеет максимум поглощения при длине волны 281 нмСоответствует1УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм имеет максимум поглощения при длине волны 279 нмСоответствует2УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до340 нм имеет максимум поглощения при длине волны 279 нмСоответствуетИспытуемыйпрепаратсерия 1серия 2серия 3Следовательно, по визуальной оценке качественной реакции – появлениезеленовато-коричневого окрашивания (оксикоричные кислоты) и окрашивания от123фиолетово-красного до красно-коричневого с фиолетовым оттенком цвета(дитерпены) – соответствует критерию приемлемости;б) ТСХ – на хроматограмме испытуемого раствора наблюдаются зоны адсорбцииот светло-розового до розового с фиолетовым оттенком цвета на уровне зонадсорбции того же цвета на хроматограмме стандартного раствора эвкалимина(фенолоальдегиды) – соответствует критерию приемлемости;в) УФ-спектр поглощения раствора Б в области от 220 до 340 нм имеет максимумпоглощения при длине волны (280 ± 1) нм (фенолоальдегиды) – соответствуеткритерию приемлемости.Такимобразом,экспериментальныханалитическиесоставовтаблетокметодикидляопределениярассасыванияподлинностиудовлетворяюткритериям приемлемости.Валидация аналитической методики количественного определенияэвкалимина гравиметрическим методомРабочие стандартные смеси были приготовлены пяти уровней поконцентрации эвкалимина (80 %, 90 %, 100 %, 110 %, 120 %) (Таблица 46).Таблица 46Навески исследуемых экспериментальных образцов таблеток для рассасывания% от номинальногоИнгредиентный состав8090100110120Эвкалимин (ФС 42-3606-98, ФГБНУВИЛАР), г0,1200,1350,1500,1650,180Эстифан (Эхинацеи экстракт сухой)(ВФС 42 – 2372-94,ЗАО «ВИФИТЕХ», Россия), г0,1500,1500,1500,1500,150Сахар (сахароза) (ГОСТ 21-94, ГОСТР 53396-2009, ГОСТ 31895-2012), г3,3003,3003,3003,3003,300Лимонная кислота (ГОСТ 908-2004), г0,3000,3000,3000,3000,300Микрокристаллическая целлюлоза(МКЦ) (ФС 42-2185-93), г0,2100,2100,2100,2100,210Кальция стеарат (ТУ 2232-002-0,0420,0420,0420,0420,04212457149839-07), гТальк GOLCHA Associated Exports(EX-SX-03 )(Индия), г0,0420,0420,0420,0420,042Содержание эвкалимина, мг/табл.19,4821,9224,3526,7929,22В качестве стандартной смеси с 100 % уровнем принята смесь ссодержанием эвкалимина 24,35 мг/табл.Определение линейности методикиКритерий приемлемости: визуальнаяоценкакривойкакфункциисодержания анализируемого вещества; параметры регрессивной прямой (a, b) изуравнения y=a+bx, коэффициент корреляции |r|≥0,99.Содержание эвкалимина должно быть при 100 % уровне не менее 24,35мг/табл.
Тест выполнен одним аналитиком. Определение содержания эвкалиминапроводили согласно разработанной методики.Линейность метода проводили на пяти уровнях содержания: 80 %, 90 %, 100%, 110 %, 120 % от теоретического содержания вещества (в трех параллелях).Определениеоптическойплотностирабочихрастворовосуществляливсоответствии с разработанной методикой. Результаты измерений представлены втаблице 47.Таблица 47Результаты определения линейности методики количественного определенияэвкалимина в экспериментальных составах таблеток для рассасывания№%X исхmX фактаbr18019,480,088719,400,0020,0010,99928019,480,089119,5038019,480,089019,4649021,920,100321,9359021,920,100121,8969021,920,102322,37125№%X исхmX факт710024,350,111324,35810024,350,112924,69910024,350,111724,441011026,790,121826,651111026,790,121826,651211026,790,122126,701312029,220,133429,191412029,220,130228,491512029,220,132929,07аbrПо результатам измерений построен график (Рисунок 30) зависимостимассы сухого остатка (m) от содержания эвкалимина (Х, мг/табл).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
