Диссертация (1141275), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Суммарная концентрация растительныхэкстрактов в композиции составляла 0,4; 2,0; и 4,0 мг/мл.Скорость ферментативной реакции, катализируемой iNOS, определяликинетическим методом при температуре 37 0С при длине волны 340 нм поизменению оптической плотности НАДФН до (контроль) и после (опыт)добавления в реакционную среду 20 мкл тестируемых растворов.Для изучения противовоспалительной активности таблетированной формы,содержащей 0,025 г растительного экстракта эстифан и 0,025 г растительногоэкстракта эвкалимин, проводили экстрагирование при комнатной температуре втечение 24 часов. Для этого таблетки массой 0,703-0,706 г измельчали в яшмовойступке и переносили в бюксы.
К полученным порошкам, массой 0,3 г, добавлялипо 12,5 мл буферного раствора (50 мМ HEPES рН=7.40) («экстракт №1»).«Экстракт №2» получали при добавлении к измельченным порошкам по 12,5 мл20% этилового спирта. Приготовленные «экстракты» фильтровали черезмелкопористый бумажный фильтр («синяя полоса»).144Полученные результаты показали, что раствор эстифана в концентрации13,3 мкг/мл ингибирует скорость ферментативной iNOS- реакцииin vitroна 60% посравнению с контролем, а в концентрации 6.67 мкг/мл – достоверно на 24%.Раствор эвкалимина в тех же концентрациях достоверно ингибирует скоростьiNOS- реакции на 25% и 20%, соответственно.При снижении концентрации эстифана и эвкалимина в растворе до 1,33мкг/мл скорость iNOS-реакции возрастала (Таблица 60).Таблица 60Влияние на скорость ферментативной реакции, катализируемой индуцибельнойNО-синтазой in vitro, различных концентраций растительных экстрактов эстифани эвкалиминВарианты опыта:концентрация эстифана иэвкалимина в 1 млреакционной пробыКонтроль (без препарата)Эстифан(13,3 мкг/мл)Эстифан(6,67 мкг/мл)Эстифан(1,33 мкг/мл)Эвкалимин(13,3 мкг/мл)Эвкалимин(6,67 мкг/мл)Эвкалимин(1,33 мкг/мл)Диклофенак(6,67 мкг/мл)Скорость ферментативной iNОS-реакции(М±m)мкмоль НАДФН/Соотношениемг белка в мин.опыт/контроль (%)1,005 ± 0,0411000,402 ± 0,012400,759 ± 0,022762,188 ± 0,0642180,755 ± 0,029750,804 ± 0,030801,384 ± 0,0421380,696 ± 0,02176Представленные результаты эффективности ингибирующего действияэстифана и эвкалимина на iNOS-реакцию в концентрации 6,67 мкг/мл совпадают срезультатами, полученными на препарате сравнения (диклофенак) и доказываютналичие противовоспалительной активности у обоих компонентов.Установленная в экспериментах in vitro активация скорости iNOS-реакциипри снижении концентрация компонентов в растворе, указывает на наличие БАВ,активирующих ферментативную реакцию, с иммуностимулирующими илипротивомикробными свойствами.145Результаты исследования влияния фармацевтической композиции (смеси)растительныхэкстрактовнаскоростьферментативнойiNОS-реакциипредставлены в таблице 61.Таблица 61Влияние на скорость ферментативной реакции, катализируемой индуцибельнойNО-синтазой in vitro, растворов фармацевтической композиции растительныхэкстрактов эстифан и эвкалимин (1:1) в разной концентрацииСкорость ферментативной реакцииВарианты опытаиндуцибельной NO-синтазы (М ± m)мкмоль НАДФН/ мгСоотношениебелка в мин.опыт/контроль (%)Контроль (без препарата)1,205 ± 0,021100Эстифан + Эвкалимин13,3 мкг/мл+13,3 мкг/мл6,67 мкг/мл + 6,67 мкг/мл1,33 мг/мл + 1,33 мг/мл0,880 ± 0,0280,736 ± 0,0230,826 ± 0,030736168Полученные результаты показывают ингибирующее действие исследуемойкомпозициинаскоростьферментативнойiNОS-реакции.Присниженииконцентрации веществ в растворе с 13,3 мкг/мл до 6,67 мкг/мл ингибирующийэффект на iNОS-реакцию возрастал с 17% до 39%.
При снижении концентрациивеществ в растворе до 1,33 мкг/мл ингибирование скорости iNОS-реакциисоставляло 32%, что отличает композициюот растворов индивидуальныхвеществ.Представленныевтаблице62результатыпоказывают,чтоБАВ,переходящие в экстракт №1 и экстракт №2 достоверно снижают скоростьферментативной iNOS–реакции на 20% и 26% (при добавлении 20 мкл в пробу)или на 26% и 17% (10 мкл), соответственно.
Это свидетельствует об эффективнойпротивовоспалительной активности фармацевтической композиции растительныхэкстрактов эстифан и эвкалимин (1:1), содержащейся в таблетированной форме.Полученные данныесогласуются с результатами, установленными на146индивидуальных экстрактах эстифан и эвкалимин и их композиции этих врастворах.Таблица 62Влияние на скорость ферментативной реакции, катализируемой индуцибельнойNО-синтазой in vitro, экстрактов, полученных из таблеток, содержащихфармацевтическую композицию эстифан и эвкалимин (1:1)Варианты опытаСкорость ферментативной реакции,катализируемой индуцибельной NOсинтазой (М ±m)мкмоль НАДФН/мг белка в мин4,932 ± 0,22Соотношениеопыт/контроль (%)1003,106 ± 0,156320 мкл в 3 мл пробы4,020 ± 0,168010 мкл в 3 мл пробы3,653 ± 0,147420 мкл в 3 мл пробы3,653 ± 0,117410 мкл в 3 мл пробы4,202 ± 0,1583Контроль (без препарата)Диклофенак(13,3 мкг/мл)Экстракт буфером HEPES рН 7,4Экстракт 20% водным спиртомПолучены результаты определения противовоспалительной активностиэкстрактов по ингибирующему влиянию на активность ксантиноксидазы in vitro,из которых следует, что экстракт «№2» на 20% этиловом спирте содержит БАВ,которые достоверно снижают активность ксантиноксидазы на 11 %, чтосвидетельствуют о наличии противовоспалительного, а также противовирусного ипротивомикробного действия (Таблица 63).147Влияние извлечений из таблеток с растительнымиэвкалимин (0,025:0,025 г) на активность ксантиноксидазыТаблица 63экстрактами эстифан иВыход мочевой кислоты (МК) за 20 минИсследуемые объектыфермент.реакции окисления ксантинаМКоп / МКк , %МК, нмоль/мгбелка в минКонтроль(фермент +субстрат, без БАВ)2,00 ± 0,10100Экстракт №1.2,32 ± 0,12116Экстракт №21,78 ± 0,0889Такимобразом,спомощьюбиотест-системinvitroустановленапротивовоспалительная активность индивидуальных растительных экстрактовэстифан, эвкалимин, их композиций (смеси) в растворе и в таблетированнойформе (исследован состав №8) при соотношении веществ 1:1 в диапазонеконцентраций 2,0 мг/мл – 0,2 мг/мл, причем противовоспалительный эффектфармацевтической композиции растительных экстрактов «эстифан+эвкалимин»,по сравнению с индивидуальными экстрактами эстифаном и эвкалимином,определяется в более широком диапазоне концентраций.Полученные результаты позволяют считать разработанную лекарственнуюформу на основе растительных экстрактов эвкалимин и эстифан в виде таблетокдля рассасывания перспективной для оказания противовоспалительного действия.Иммуностимулирующая активностьИсследования проводили по методикам, подробно изложенным в гл.2 и гл.
3.РезультатыиндивидуальнымипоактивациирастительнымиНАДФН-оксидазнойэкстрактамиреакцииэвкалиминиinvitroэстифанпредставлены в гл. 3 и в таблице 64 не приводятся, так как значения повторяются.148Таблица 64Результаты действия экспериментальных составов таблеток с растительнымиэкстрактами эвкалимин и эстифан на НАДФН-оксидазную реакцию in vitroСкорость НАДФН-оксидазной реакции, M±mВариант опытанмоль/мин на 10 мклгомогената%Контроль00Протимозин- α69,8±0,75100,0Таблетки состава № 9 3,3мкг/мл34,7±1,6349,7Таблетки состава № 9 6,6мкг/мл57,9±2,3583,0Таблетки состава № 8 3,3мкг/мл10,5±0,3915,0Таблетки состава № 86,6мкг/мл3,11±0,114,5В таблице 64 приведены результаты влияния на НАДФН-оксидазнуюреакцию in vitro таблетированных составов №4 и №8.Установлено, что в контроле без растительных экстрактов, активацияскорости НАДФН-оксидазной реакции равнялась 0.
АктивацияНАДФН-оксидазы происходит при добавлении протимозина-α. Окисление происходит соскоростью 69,8 нмоль/мин на 10 мкл гомогената.Дозозависимый иммуностимулирующий эффект был выявлен у таблетоксостава № 8. Так, в меньшей концентрации таблетки увеличивали скоростьНАДФН-оксидазной реакции на 50% от эффекта протимозина-α, а в большейконцентрации – на 83% . В то же время таблетки состав №4 увеличивали скоростьНАДФН-оксидазной реакции незначительно, без дозозависимого эффекта.149Таким образом, установлено наличие наибольшей иммуностимулирующейактивности у таблеток экспериментального состава №8, который и был выбран вкачестве окончательного.4.6.
Характеристика ЛФ – таблетки для рассасывания с растительнымиэкстрактами эвкалипта прутовидного и эхинацеи пурпурнойРезультаты проведенных исследований позволили разработать состав(Таблица 65) и технологическую схему производства таблеток для рассасыванияпод условным названием «Эвкафан» (Рисунок 32).Таблица 65Состав ингредиентов на одну таблетку «Эвкафан»Наименование ингредиентовКоличество ингредиентов, гЭвкалимин0,025Эстифан0,025Сахароза0,551Лимонная кислота0,05Микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ)0,035Кальция стеарат0,007Тальк0,007Масса таблетки0,7Полученные таблетки имеют круглую форму, гладкую поверхность,плоскоцилиндрические, без риски; диаметр – 12 мм, высота – 45 мм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
