Диссертация (1141275), страница 12

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 12)

В разработанной методике процент восстановлениянаходился в пределах от 97,27% до 100,64% и имеет среднее значение 99,20%, чтосоответствует требованиям правильности.Контроль внутри лабораторной прецизионности методикиПрецизионность аналитического метода характеризует степень близостинезависимых результатов индивидуальных испытаний и выражается величинойстандартногоотклонения.Экстремальныепоказателипрецизионности–сходимость (повторяемость) и воспроизводимость.Повторяемость (сходимость) методики характеризует степень согласованностирезультатов измерений (испытаний), полученных одним и тем же методом наидентичных объектах испытаний, в одной и той же лаборатории, одним и тем же83аналитиком, с использованием одного и того же оборудования, в пределахкороткого промежутка времени. Критерий приемлемости: коэффициент вариациипараллельных определений для 6 измерений должно быть не более 5%.Результаты определения суммы фенолальдегидов в пересчете на эвкалиминвмикроэмульсии с АН и МЦ-100 представлены в таблице 20.Таблица 20Результаты испытания повторяемости аналитической методикиПовторностьСодержание суммы фенолальдегидов впересчете на эвкалимин в микроэмульсияхОбразец с АНОбразец с МЦ-10010,03920,046120,04040,045630,03940,045940,03920,045550,04110,048760,04090,04550,0400330,046217Относительное стандартноеотклонение (RSD), S, %0,07970,124Коэффициент вариации CV, %1,99142,6831Среднее значениеКритерийприемлемостивыражаетсявеличинойотносительногостандартного отклонения, который составляет 0,12% и не превышает 4%, а такжезначение коэффициента вариации не превышают 5%, что свидетельствует опрецизионности методики в условиях повторяемости.Воспроизводимость методики характеризует меру совпадения результатовизмерений, полученных одним и тем же методом, на идентичных образцах, в84разных лабораториях, разными операторами, с использованием различногооборудования.

Результаты представлены в таблице 21.Таблица 21Результаты испытания сходимости аналитической методикиАналитик12ПовторностиОбразец с АНОбразец с МЦ10,03920,046120,04040,045630,03940,045910,03960,045820,03980,045630,04020,04580,03980,04580,04230,0191,06360,4143Среднее значение содержаниясуммыфенолальдегидовваналите, %Относительноестандартное отклонение S, %Коэффициент вариации CV, %Коэффициент вариации не должен превышать 2%. Он составил 1,06%, чтопозволяетсчитатьвнутрилабораторнуювоспроизводимостьрезультатовприемлемой.Полученные экспериментальные данные позволяют оценить методикуколичественного определения суммы фенолальдегидов в пересчете на эвкалиминв ЛФ положительно по параметрам:- специфичность (совпадение максимумов поглощения при длине волны 280±1нм;- линейность (коэффициент корреляции 0,9998);- правильность (точность методики) (диапазон процента восстановления – от97,27% до 100,64% и имеет среднее значение 99,2%);85- твует требованиям правильности.- Контроль внутри лабораторной прецизионности методики:- Ошибка! Источник ссылки не найден.

(коэффициент вариации 0,12%);- Ошибка!Источникссылкиненайден.(коэффициентвариациивнутрилабораторной воспроизводимости не превышает 2% (1,06%).Поэтому есть основания считать разработанную методику пригодной длядостоверного количественного определения суммы фенолальдегидов в пересчетена эвкалимин в изучаемых ЛФ.Разработка методики количественного определения суммыфенолкарбоновых кислот в пересчете на цикориевую кислотуУчитывая, что основным терапевтическим компонентом экстракта эстифанаявляется цикориевая кислота, то количественное определение проводили впересчѐте на это вещество.Фенолакарбоновые кислоты характеризуются сильным поглощением в УФобласти света и характеристическими экстремумами.Нами сняты спектры спиртовых извлечений из ЛФ, а также растворовэвкалимина и цикориевой кислоты (Рисунок 18).Рисунок 18.

Спектры извлечений и РСО: 1 - раствор РСО эвкалимина, 2- растворРСО цикориевой кислоты, 3 – извлечение из ЛФ с АН.86Из рисунка видно, что на спектре извлечения присутствует плечо при длиневолны 328±1нм, который соотносится с максимумом при этой длине волны наспектре цикориевой кислоты.Установлено, что при этой длине волны максимумы поглощенияотсутствуют на спектрах извлечения из плацебо и раствора эвкалимина. Это сталоопределяющим для выбора длины волны 328 нм±1 в качестве аналитической(Рисунок 19).Рисунок 19.

Спектры извлечений и РСО: 1 – раствор РСО цикориевой кислоты,2- извлечение из ЛФ, 3- извлечение из плацебоСодержание суммы фенолкарбоновых кислот в образцах ЛФ с АН и МЦсоставило от 0,0030 до 0,0045%. Для экспериментального подтверждениясоответствия методики количественного определения суммы фенокарбоновыхкислот в пересчете на цикориевую кислоту в ЛФ требованиям нормативнойдокументации, проведена ее валидация по алгоритму, указанному в предыдущейметодике. Относительная погрешность среднего результата разработаннойметодики, установленная на образце ЛФ с АН, не превышает ±4,6% (Таблица 22).87Таблица 22Метрологические характеристики результатов количественного определениясуммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на цикориевую кислоту в ЖЛФnf65P (%)95T (P, f)2,57X%0,00332S22,210-8SSx1,510-46,0110-5XсрX1.5410-43,7810-4ĒEср%%11,44,6Установлено совпадение плеча на спектре извлечения из ЛФ и максимумана спектре РСО эвкалимина при 328±1нм, полученных на регистрирующемспектрофотометре в диапазоне длин волн 200-500 нм (Рисунок 19), чтосвидетельствует о специфичности методики.Определение линейности проводили на 9 уровнях концентраций СОцикориевой кислоты в диапазоне 1,2 – 12 мгк/мл (Таблица 23).Таблица 23Результаты испытания линейности аналитической методики№ измерения123456789Концентрация СО(цикориевая кислота), мкг/млАналитический отклик(оптическая плотность)1.22.43.64.86.07.28.49.610.80,0960,1850,2820,3800,4640,5710,6510.7570.845В ходе определения линейности методики установлено, что графикзависимости имеет линейный характер в указанном диапазоне концентраций,коэффициент корреляции близок к единице (0,9996), что соответствует критериюприемлемости линейности (Рисунок 20).88Рисунок 20.

График линейной зависимости оптической плотности иконцентрации раствора фенолкарбоновых кислот в пересчете на цикориевуюкислоту.Правильность аналитического метода характеризует близость результатовиспытаний, полученных данным методом, к истинному значению. Показателемправильности метода обычно является значение систематической погрешности.Модельные смеси готовили трех концентраций с содержанием цикориевойкислоты 25%, 50%, 75% к исходному содержанию суммы фенолкарбоновыхкислот в ЛФ (Таблица 24).Таблица 24Результаты испытания правильности аналитической методики№ п/пНайдено,мкгДобавленоРСО, мкгОжидаемоезначение, мкгПолученноезначение,мкгАбсолютнаяошибкаВыход,%1.133,2841,242,2+1,0102,4891.233,2841,241,7+0,5101,21.333,2841,242,3-1,1102,72.133,21649,248,9-0,399,32.233,21649,249,8+0,6101,22.333,21649,249,4+0,2100,43.133,22457,256,0-1,297,93.233,22457,256,4-0,898,63.333,22457,257.6+0,4100,7Среднее значение процентавосстановления, %100,5В разработанной методике процент восстановления находился в пределах от97,9% до 102,7% и имеет среднее значение 100,5%, что соответствуеттребованиям правильности.Контроль внутрилабораторной прецизионности методикиОпределение повторяемости методики количественного определения суммыфенокарбоновых кислот в пересчете на цикориевую кислоту выполняли на двухразличных образцах ЛФ, с АН и МЦ в условиях, при которых шесть независимыхрезультатов измерений получали одним и тем же методом в одной и той желаборатории одним и тем же специалистом с использованием одного и того жеоборудования, реактивов, в пределах короткого промежутка времени (Таблица 25)Таблица 25Результаты испытания повторяемости аналитической методикиПовторность1Содержание суммы фенолкарбоновых кислот впересчете на цикориевую кислоту в образцах ЖЛФОбразец с АНОбразец с МЦ0,00310,00429020,00350,004630,00340,004540,00320,004750,00330,004360,00340,00420,0033170,004417стандартноеотклонение (RSD), S, %0,01340, 0214Коэффициент вариацииCV, %4,054,84Среднее значениеОтносительноеКритерийприемлемостивыражалсявеличинойстандартного отклонения, который составляет околокритериев приемлемости, а такжеотносительного0,03% и не превышаетзначение коэффициента вариации непревышают 5%, что свидетельствует о прецизионности методики в условияхповторяемости.Определениевнутрилабораторнойвоспроизводимостиметодикипроводили на одних и тех же образцах препарата в трех повторностях.

Результатыпредставлены в таблице 26.Таблица 26Результаты испытания сходимости аналитической методикиАналитик12ПовторностиОбразец с АНОбразец с МЦ-10010,00310,004420,00320,004630,00340,004510,00330,00439120,00320,004530,00320,00450,0032330,0044670,0090,012,912,31Среднее значение содержаниясуммы фенолкарбоновых кислот ваналите, %Относительноестандартное отклонение S, %Коэффициент вариации CV, %Коэффициент вариации не должен превышать 5% (содержание этогокомпонента на уровне примесей).

Он составил 2,91%, что позволяет считатьвнутрилабораторную воспроизводимость результатов приемлемой.Полученныеэкспериментальныеданныепозволяютоценитьметодикуколичественного определения суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете нацикориевую кислоту в ЛФ положительно по параметрам:- специфичности методики (совпадение максимумов поглощения при длиневолны 328±1нм ;- линейности методики (коэффициент корреляции 0, 9996);- правильности (точности) методики (диапазон процента восстановления – от97,9% до 102,7% и имеет среднее значение 100,5%);-внутрилабораторной прецизионности методики:-сходимость методики (коэффициент вариации 4,84%);-воспроизводимость методики (коэффициент вариации внутри лабораторнойвоспроизводимостинепревышает5%(2,91%).Поэтомувалидационныерезультаты оценки этой методики анализа позволяют оценить ее положительно попараметрам: правильность, прецизионность, сходимость, воспроизводимость,линейность, специфичность, что позволяет его использовать при оценкеразработанных ЛФ, а также при сквозной стандартизации от экстракта клекарственной форме и при формировании нормативной документации.923.8.

Исследование высвобождения БАВ из ЛФИсследование проводили для водорастворимых фенолкарбоновых кислот втрех повторностях для микроэмульсии и мицеллярного растворана основе АН иМЦ-100. По полученным значениям оптической плотности диализной жидкостирассчитывали концентрацию БАВ.Результаты представлены в таблицах 27, 28 и на рисунках 21, 22.Таблица 27Результаты высвобождения БАВ из микроэмульсииОбразец 1 (основа МЦ-100)Время,мин.ОптическаяплотностьСодержание суммы фенолкарбоновых кислот врастворе, мг%150,5620,72300,7740,59450,7170,83600,3690,85900,4381,01200,5601,31800,5651,3Образец 2 (основа АН)Время,Оптическаямин.плотностьСодержание суммы фенолкарбоновых кислот врастворе, мг%150,5650,73300,7770,60450,7190,85600,3710,86900,4401,051200,5651,321800,5691,3393Рисунок 21. Динамика высвобождения БАВ из микроэмульсии за 180 минэксперимента (№1 основа – МЦ-100; №2 – основа – АН).Таблица 28Результаты высвобождения БАВ из мицеллярного раствораОбразец 1 (основа МЦ-100)Время,ОптическаяСодержание суммы фенолкарбоновыхмин.плотностькислот в растворе, мг%150,5310,20300,5990,45450,4450,51600,2710,62900,3660,841200,4140,951800,4140,95Образец 2 (основа АН)Время,ОптическаяминплотностьСодержание суммы фенолкарбоновыхкислот в растворе, %150,6080,23300,6230,48450,6060,6994600,3220,74900,3900,901200,5141,21800,4661,1Рисунок 22.

Динамика высвобождения БАВ из мицеллярного раствора за 180 минэксперимента (№1 основа – МЦ-100; №2 – основа – АН).Анализируя полученные результаты можно констатировать тот факт, чтовысвобождение фенолкарбоновых кислот из ЛФ, независимо от вспомогательныхвеществ и вида ЛФ имеет одинаковую тенденцию к увеличению концентрацииБАВ в диализной жидкости.В течение 3 часовой экспозиции исследуемых образцов ЛФ наблюдаетсяплавное нарастание концентрации БАВ в диализной жидкости, что позволяетпрогнозировать терапевтическую эффективность разработанной ЛФ.Однако микроэмульсия на основе и МЦ-100, и АН высвобождает БАВ болееэффективно (на 18% больше), чем мицеллярный раствор, что вероятно, можно,объяснить содержанием в системе лецитина.953.9.

Характеристики

Список файлов диссертации