Диссертация (1140426), страница 15
Текст из файла (страница 15)
контрольными подгруппами.⃰ ⃰ – статистически достоверные различия (при p<0.05) между контрольной группой I.A. и группой лиц,страдающих бесплодием.93КЛЕТКИ ЛЕЙДИГАПо данным наших исследований, среди мужчин 22 – 35 лет принормальном сперматогенезе и при гипосперматогенезе клетки Лейдигапреобладают у последних (21.4±0.23% против 7.4±0.07%). У лиц пожилоговозраста также наблюдается увеличение клеток Лейдига по сравнению смужчинами 22 – 35 лет (13.9±0.2%). Результаты сравнительного анализаколичества клеток Лейдига приведены в табл.
20.Таблица 20Количество клеток Лейдига в интерстициальной ткани яичкапри нормальном сперматогенезе и при азооспермииНОРМАЛЬНЫЙИдиопатическоеструктурыСПЕРМАТОГЕНЕЗбесплодие(количество клеток)(количество клеток)22 – 35 лет61 – 74 года7.4±0.0713.9±0.2 ⃰21.4±0.23 ⃰ ⃰клетки Лейдига⃰ – статистически достоверные различия (при p<0.05) между I.A. и I.Б. контрольными подгруппами.⃰ ⃰ – статистически достоверные различия (при p<0.05) между контрольной группой I.A. и группой лиц,страдающих бесплодием.Данные проведённых иммуногистохимических реакций исследуемыхбелков в совокупности с результатами подсчёта различных клеточных форми количественного анализа распределения маркеров в них можнотрактовать как нарушение аутокринной и паракринной регуляции мужскихполовых клеток при идиопатической азооспермии, что возможно, являетсянаиболее значимым в патогенезе данной формы бесплодия.
Особо следуетподчеркнуть о включение в этих условиях компенсаторных механизмов состороны местных регуляторов с целью подавления патологическиизмененного сперматогенеза.АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ПОСРЕДСТВОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИВ ходе оценки уровня экспрессии генов, продукты которых ответственныза внутриклеточную регуляцию апоптоза, были выявлены существенные94статистические различия (p < 0.05) как между исследуемыми образцамифрагментов биоптатов яичек группы IV (идиопатическое бесплодие) cразнымипатоморфологическимиформами,обнаруженнымивходегистологического исследования, так и при их сравнении с контролем.Выявлено значительное повышение относительного уровня экспрессиипроапоптических генов внутреннего пути BAX и BAK, наиболее выраженноев группе пациентов с гипосперматогенезом (рис.
56а). Напротив, экспрессияантиапоптотических генов BCL2 и BCLW оказалась снижена. При этомобнаружено, что значения относительной экспрессии гена BCLW значительнонижеконтрольногоуровнявовсехпатоморфологическихформахидиопатического бесплодия, в то время как уровень экспрессии BCL2изменен умеренно (рис. 56б).BAKBAX2 .54**2 .03*1 .5**БМC КС21 .010 .50 .0КРГСБМ0C КСКРГСРисунок 56а. Экспрессия проапоптотических генов BAK и BAX в яичках пациентов снормальным сперматогенезом (группа IА) и при идиопатическом бесплодии (группа II).
Повертикали: относительный уровень экспрессии, усл. ед.; КР – контроль (I группа, 22 – 35 лет); ГС –гипосперматогенез; БМ – блок мейоза; СКС – Сертоли-клеточный синдром. *– статистическизначимые отличия от контроля, p < 0.05.BCL2BCLW1 .02 .50 .8*2 .0*0 .61 .50 .41 .00 .20 .50 .0КРГСБМC КС**ГСБМ*0 .0КРC КСРисунок 56б. Экспрессия антиапоптотических генов BCL2 и BCLW в яичках пациентов снормальным сперматогенезом (группа I) и при идиопатическом бесплодии (группа IV). Повертикали: относительный уровень экспрессии, усл. ед.; КР – контроль (I группа, 22 – 35 лет); ГС –гипосперматогенез; БМ – блок мейоза; СКС – Сертоли-клеточный синдром. *– статистическизначимые отличия от контроля, p < 0.05.95Глава IVОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ(ПРОТЕОМИКА СПЕРМАТОГЕНЕЗА)Точное время развития мужских половых клеток от сперматогоний (стадияпролиферации) до сперматозоидов (окончание стадии формирования) труднозафиксировать, что в первую очередь связано со сложностью определенияначаларостаиихдифференцировки,атакжедостаточнойпродолжительностью начальных этапов роста [Каган С.А., 1969; РайцинаС.С., 1985; Волкова О.В., Боровая Т.Г., 1999; Быков В.Л., 2000; Gupta S.,,2006; Bostwick D.G., 2014].Вработеколичественнуюанализировалиоценкувремяисследуемыхпоявления,белковприраспределение,нормальномипатологическом сперматогенезе.Учитывая вышеизложенное мнение, был произведён количественныйанализ экспрессии регуляторных факторов в клетках в зависимости от ихтипа, дифференцировки или влияния внешних причин.Морфологическая картина при мужском идиопатическом бесплодии.Комплексный анализ показал наличие всех необходимых условий –структур (клеток Сертоли и Лейдига, миоидных клеток, кровеносных илимфатических сосудов, нервов) для нормального функционированияполовых клеток [Быков В.Л., 200; Gupta S., 2006; Bostwick D.G., 2014].
Этиданныеусилилиммуногистохимическийанализиммуномеченияисследуемых белков. Однако, половые клетки, в большинстве наблюдений,с дистрофическими изменениями, что указывает на первичный характер ихповреждений.Нарушениясперматогенеза(тотальнаяилисубтотальнаягерминальная аплазия) во всех образцах обнаружены на фоне хорошоразвитой и даже несколько гиперплазированной интерстициальной ткани,то есть биопсийный материал яичка доказывает первичный характер96поражения половых клеток. Кроме того, биопсия в этих случаях даётвозможность установить наличие той или иной степени нарушенийсперматогенеза, а главное – определить направление процесса в сторонупрогрессирования или обратного развития [Johnsen S.G., 1970; БрагинаЕ..Е., и др., 2004; Koh P.O.
et al., 2011; Гамидов С. и др., 2013].Учитывая обнаруженную функциональную активность соматическихи эндокринных клеток яичка при необструктивной азооспермии, а именно,наличие отличных друг от друга гистофенотипов в пределах одногоизучаемого образца, целесообразно говорить о фокальном вариантеСертоли-клеточного синдрома (Sertoli cell only-syndrome (SCA), focalis).«Гиперплазия клеток Сертоли» проявляется увеличением общегочисла клеток в 2, а в некоторых семенных канальцах в 3 раза насветооптическом уровне – Сертоли-клеточный синдром (SSO) на фонегерминативно-клеточной аплазии (GCA).
Клетки Сертоли являютсястабильными неделящимися клетками. При нормальном сперматогенезе(при световой микроскопии) они маскируются за большим количествомполовых клеток; при бесплодии (SCO-синдроме) же, напротив, половыеклетки отсутствуют и поэтому хорошо визуализируются только лишьклетки Сертоли. Поэтому часто употребляемый при микроскопическомописании мужского бесплодия термин «гиперплазия клеток Сертоли» впатологической анатомии и андрологии является не корректным.Пролиферация сперматогоний в просветах семенных канальцев притотальной и субтотальной формах аплазии половых клеток (GCA) снижена(Кi-67+), а апоптоз, напротив, повышен (caspase-9+).Инсулиноподобный фактор роста при фокальном варианте Сертоликлеточого синдрома экспрессирует только в единичных сохранившихсясперматогониях(IGF-I+).Такимобразом,сперматогониивсвоейцитоплазме, содержат мизерное количество биологически активныхвеществ, обладающих митогенной активностью.97Возможно, нарушенасекреция и дальнейшее поглощение этих пептидов между клеткамиСертоли и половыми клетками.Иммунопозитивная экспрессия PLAP+ у сперматогоний говорит овозможнойантенатальнойпричинеразвитиямужскогобесплодия.Учитывая, что в норме PLAP является специфическим маркёром толькополовых клеток семенников плода и новорождённого, то экспрессия этогофактора у взрослых, возможно, указывает на задержку или даже наотсутствие сперматогенеза.
То есть, речь идёт о дедифференцировке и/иликрайней незрелостью половых клеток. По-видимому, мужские половыеклетки у лиц, страдающих идиопатическим бесплодием, можно, считатьфетальными. Таким образом, можно выдвинуть гипотезу о том, чтоосновной из причин развития мужского идиопатического бесплодияследует считать несостоятельность сперматогенеза уже антенатально.Вопрос, в какой конкретно период эмбриогенеза (оплодотворение,дробление, имплантация, гаструляция или гисто/органогенез) происходит«поломка», приводящая впоследствии к нарушению сперматогенеза,остаётся открытым. При этом, важно учитывать морфофункциональнуюхарактеристику половых клеток отца, так как наследственные аномалии игенетические мутации могли произойти уже в его сперматозоиде, которыйзатем и оплодотворил яйцеклетку матери.Положительная экспрессия PLAP+ можно также расценивать как рискмалигнизаци (развития семиномы, PLAP+/OCT+) [Albrecht W.
et al., 2004;Мацко Д.Е. и др., 2006; Андреева Ю.Ю. и др., 2012]. Для точнойверификацииисследованияподобногоi12pпораженияиучитыватьнеобходимоданныепроведениеFISH-интратестикулярнойультрасонографии. Необходимо провести амплификацию хромосомныхпоследовательностейДНК,свойственныххромосоме12(12p)длявыявления возможной связи между идиопатическим бесплодием иразвитием семиномы [Loriot A. et al., 2003; Брагина Е..Е. и др., 2004].98Поэтому эта группа мужчин нуждается в постоянном динамическомнаблюдении.
С другой стороны – обнаруженные камбиальные половыеклетки должны послужить объектом дальнейших исследований, с цельюопределения их возможных пролиферативных и дифференциальныхсвойств.Отрицательную ИГХ-реакцию с антителами к CD117, можнорасценивать как отсутствие унипотентных свойств у половых клетокпринимая во внимание характеристику маркера [Grieco V. et al., 2010; DabbsD.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
