Диссертация (1140426), страница 12
Текст из файла (страница 12)
15) и (рис. 20,21).70IV стадия сперматогенезаРис. 20. (слева)/21. (справа) Яичко (группа I.A.), семенной каналец; ИГХ с антителами к Вcl-2,докрашивание гематоксилином; рис. 20 ×40, м.о. – 50 мкм, рис. 21. ×100, м.о. – 10 мкм.Сперматогония ( ), сперматоцит I – профаза мейоза I ( ), сперматоцит II ( ), сперматида ( );клетка Сертоли, ядро ( ); клетка Лейдига ( ); миоидная клетка ( ).Caspase-9 (каспаза-9, маркёр апоптотической активности)В извитых семенных канальцах стабильно положительная реакция с антителамик caspasa-9 отмечена в ядрах сперматогоний («+») и в цитоплазме сперматоцитов I(«++»).
Сперматоциты II и сперматиды в разных участках канальцевдемонстрируют различную ИГХ-реакцию: часть из них положительная, а в другихотрицательная экспрессия к caspasa-9 («±/+»). Миоидные клетки стенки семенныхканальцев и клетки фибробластического ряда на caspasa-9 не окрашиваются.Неодинаково маркируются и клетки Лейдига: существуют клетки, цитоплазма иядро которых не содержит caspasa-9, другие же оказываются позитивные к данномуфактору (табл. 16 и табл. 16а) и (рис. 22).сперматоцит II, метафаза («++»)сперматоцит I («–»)сперматогония, ядро («++»)миоидная клетка, ядроРис.
22. Яичко (группа I.A.), положительнаяреакция с caspasa-9; ИГХ метод,докрашивание гематоксилином, ×100,м.о. – 10.71ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗСТВОЛОВОЙ АКТИВНОСТИ МУЖСКИХ ПОЛОВЫХ КЛЕТОКPLAP (Плацентарноподобная щелочная фосфатаза)Окрашивание цитолеммального маркёра PLAP в половых клетках, в клеткахСертоли и Лейдига, а также в миоидных клетках не обнаружено («–») (рис.
23).интерстициальная тканьизвитой семенной каналецРис. 23. Яичко (группа I.A.),иммунонегативная реакция с PLAP; ИГХметод, докрашивание гематоксилином, ×40,м.о. – 50 мкм.CD 117Экспрессия маркёра дифференцировки CD117 отмечена в единичныхсперматогониях («+»), в некоторых первичных сперматоцитах («+»), во вторичныхсперматоцитах («+++») и в ранних сперматидах («++»), а также в единичныхклетках Лейдига («++»), располагающихся ближе к извитому семенному канальцу.В популяциях остальных половых клеток различных стадий сперматогенеза, вклетках Сертоли, а также в миоидных клетках экспрессии CD117 не обнаружено(«–») (табл.
17) и (рис. 24, 25).Сперматоцит II («+++»)сперматоцит IIсперматоцит IсперматогонияРис. 24. (слева)/ 25. (справа). Яичко (группа I.A.), иммунопозитивная цитоплазматическая реакцияс CD117 в извитом семенном канальце; ИГХ метод, докрашивание гематоксилином, слева ×20,м.о. – 100 мкм, справа ×100, м.о. – 10 мкм.72ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФАКТОРА РОСТАIGF-1 (инсулиноподобный фактор роста-1)При выявлении IGF-I наиболее ярко маркируются все половые клетки («++») исоматическиеклеткиинтерстициальнойткани(«+»),атакжеэндотелийкровеносных сосудов («+»). Иммуномечением (аффинитетом) обладает цитоплазмаполовых клеток, а ядра – базофильные. Уровень (степень) экспрессии IGF-Iснижается в процессе сперматогенеза от сперматогоний («+++») до сперматозоидов(«++»). Не чувствительны к IGF-I клетки Сертоли и клетки миоидного слоя стенкисеменного канальца (табл.
18) и (рис. 26).семенной каналецинтерстициальная тканьРис. 26. Яичко (группа I.A.); ИГХ с антителами к IGF-I,докрашивание ядер гематоксилином, ×20, м.о. – 100 мкм.733.2. Морфофункциональная характеристика структур семенникамужчин I.Б. группы (при нормальном сперматогенезе)В отличие от молодых людей у пожилых отмечают слабовыраженныедистрофические изменения половых клеток и клеток Сертоли в некоторыхсеменных канальцах. Площадь ареала половых клеток незначительноснижена по сравнению с таковой в I-ой группе (см. Статистические данные)(табл. 9, 10, 11) и (рис.
27, 28).интерстициальная ткань с клетками Лейдигаслой миоидных клетокСперматогенный эпителий:4-й ярус (сперматиды)3-й ярус (сперматоциты II)2-й ярус (сперматоциты I)базальный отсек (сперматогонии)Рис. 27. Яичко, извитой семенной каналец при нормальном сперматогенезе(подгруппа мужчин 61–74 лет), H&E, ×20, м.о. – 100 мкм.слой миоидных клетокСперматогенный эпителий:5-й ярус (сперматозоиды)4-й ярус (сперматиды)3-й ярус (сперматоциты II)2-й ярус (сперматоциты I)базальный отсек (сперматогонии)Рис. 28. Яичко, извитой семенной каналец при нормальном сперматогенезе(подгруппа мужчин 61–74 лет), H&E, ×20, м.о. – 100 мкм.74ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗПРОЛИФЕРАТИВНОЙ И АПОПТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИKi-67 (белок клеточной пролиферации)Экспрессия Ki-67 обнаружена в ядрах некоторых сперматогоний («+++»). Впопуляциях остальных половых клеток различных стадий сперматогенеза, вклетках Сертоли и Лейдига, а также в миоидных клетках экспрессии Ki-67 необнаружено («–») (табл.
13) и (рис. 29).клетки Лейдигасперматогония («+++»)клетка Сертоли (ядро)Рис. 29. Яичко (группа I.Б.), положительная интрануклеарная реакция в ядрах некоторыхсперматогониев; ИГХ метод с Ki-67, докрашивание гематоксилином, ×10, м.о. – 150 мкм.р53 (белок проапоптотической активности)Средняя степень экспрессия белка р53 отмечается в единичных сперматогониях(«++») и в клетках Сертоли («+»). В остальных половых клетках других стадийсперматогенеза, в клетках Сертоли и Лейдига, а также в миоидных клеткахэкспрессии р53 не обнаружено(«–») (табл. 14) и (рис.
30).сперматоцит I («–»)сперматогония (++)Рис. 30. Яичко (группа I.Б.), положительная интрануклеарная реакция в ядрах некоторыхсперматогониев; ИГХ метод с р53, докрашивание гематоксилином, ×20, м.о. – 100 мкм.75Вcl-2 (маркёр антиапоптотической активности)Иммуномечение на Вcl-2 отмечена в единичных сперматогониях: около 10% от общегоих количества («±»); во вторичных сперматоцитах («++») и округлых сперматидах («+»).В популяциях остальных половых клеток различных стадий сперматогенеза, в клеткахСертоли и Лейдига, а также в миоидных клетках окрашивание на Bcl-2 не обнаружено («–») (табл.
15) и (рис. 31).Рис. 31. Яичко (I.Б.); ИГХ метод сантителами к Вcl-2, докрашиваниегематоксилином, ×40, м.о. – 50 мкм.кровеносный сосуд (вена)клетка Сертоли (ядро)сперматоцит IсперматогонияCaspase-9 (каспаза-9, маркёр апоптотической активности)В извитых семенных канальцах стабильно положительная ИГХ-реакция на caspasa-9отмечена в сперматогониях («++») и в первичных сперматоцитах («++»).
В клеткахСертоли и Лейдига, а также в миоидных клетках иммуномечение на caspasa-9 необнаружено (табл. 16, табл. 16а) и (рис. 32).сперматогония («+»)сперматоцит Iсперматоцит IIсперматидаклетка Сертоли (ядро)Рис. 32. Яичко (группа I.Б.), положительная цитоплазматическая реакция у некоторых половыхклеток и иммуномечение в ядрах сперматогоний; ИГХ метод с caspasa-9, докрашиваниегематоксилином, ×100, м.о. – 10 мкм.76ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗСТВОЛОВОЙ АКТИВНОСТИ МУЖСКИХ ПОЛОВЫХ КЛЕТОКPLAP (Плацентарноподобная щелочная фосфатаза)Окрашивание на PLAP в половых клетках, в клетках Сертоли и Лейдига, а такжев миоидных клетках не обнаружено («–») (рис. 33).клетка Сертоли (ядро)сперматогониясперматоцит IРис. 33. Яичко (группа I.Б.), иммунонегативная реакция; ИГХ метод с PLAP,докрашивание гематоксилином, ×40, м.о.
– 50 мкм.CD 117Выраженная положительная реакция на антитела к стволовому маркёру CD 117обнаруженавперинуклеарныхзонахвторичныхсперматоцитов(«+++»),сперматидах («+++») и сперматозоидах («++»), то есть в клетках, располагающихсяв адлюминальном отсеке извитого семенного канальца, ближе к его просвету.Таким образом, отмечена потенция возрастания степени экспрессии в половыхклетках последних стадий сперматогенеза после эквационного мейотическогоделения (созревание и формирование). Кроме того, визуализируется экспрессиямаркёра в единичных клетках Лейдига («++»), располагающихся ближе к канальцу.Маркирование на CD117 в клетках Сертоли («–») и в миоидных клетках («–») необнаружено (табл. 17) и (рис.
34, 35).77сперматоцит II (положительнаяметка в цитоплазме)сперматидасперматоцит IРис. 34./35. Яичко (группа I.Б.), семенной каналец; ИГХ метод с антителами к CD117,докрашивание гематоксилином, ×20, м.о. – 100 мкм; вставка – сперматоциты II, ×100,м.о. – 10 мкм.ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФАКТОРА РОСТАIGF-I (инсулиноподобный фактор роста-1)Иммуномечение на IGF-I обнаружена в половых клетках на всех этапахсперматогенеза («++») и слабое окрашивание в клетках Сертоли («±») семенныхканальцев (табл.
18) и (рис. 36).интерстициальная тканьсеменной каналецРис. 36. Яичко (группа I.Б.), извитой семенной каналец, иммунопозитивное окрашиваниево всех половых клетках; ИГХ метод с антителами к IGF-I, докрашивание ядергематоксилином, ×40, м.о. – 50 мкм.783.3. Морфофункциональная характеристика структур семенникамужчин II-ой группы (при азооспермии)В биоптатах яичек у разных пациентов наблюдали различнуюморфологическую картину (нескольких гистологических вариантов): у 3-х –гипосперматогенез (в семенных канальцах располагаются сперматогонии иразрушенные первичные сперматоциты), оценка сперматогенеза по шкале S.Johnson (JS) в модификации De Kretser и Holstein – 4 бала; у 21-го – блоксозреваниясфокусамисубтотальнойаплазиигамет(единичныесперматогонии), JS=3 балла; у 5-ти – Сертоли-клеточный синдром (толькоклетки Сертоли), JS=2 балла; у 1-го – тубулярная атрофия канальцев, JS=1балл.Во всех исследуемых препаратах биопсийного материала при бесплодииопределяются семенные канальцы с изменениями общего строения: диаметруменьшен в 1,5 – 2 раза (гипоплазия) (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
