Диссертация (1140298), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Наиболее успешно это делается с использованиемметодов клинической лимфологии.40Полученные литературные данные ставят на повестку дня включениев базовую терапию при хирургическом лечении переломов, препаратов,стимулирующихангиогенез,пролиферативнуюактивностьклетоксоединительной ткани, надкостницы.Все это послужило обоснованием особой актуальности изученияэффективностисочетаниятрадиционноголечениястерапиейиммунофаном у пациентов с переломами костей голени и их влияния нарепаративную регенерацию.Таким образом, анализ литературных данных показывает, чтосуществует множество нерешенных проблем при лечении переломовкостей голени, и особенно дистального метафиза большеберцовой кости.До сих пор, несмотря на появляющиеся все новые и новые конструкциидля остеосинтеза, не удается в полной мере достичь идеального сочетанияточной репозиции костных отломков с их стабильной фиксацией исоблюдением принципов БИОС.
Незаслуженно мало внимания уделяетсятакже стимуляции восстановления кости в зоне перелома, которая,учитываяанатомическиеСуществующиеособенности,возможностиплохоиспользованияснабжаетсякровью.лимфотропнойтерапиииспользуются редко или бессистемно и не имеют достаточного научногообоснования для такой локализации перелома.Этипроблемыисследования.послужилиосновойдлявыполненияданного41ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ РАБОТЫ2.1. Стимуляция остеогенеза2.1.1.
Методика стимуляции образования микрососудов надкостницыИсходя из имеющихся представлений о неоангиогенезе и остеогенезе,проанализированных в первой главе, нам представляется важным изучитьвоздействие иммуномодулятора иммунофана на процессы ангиогенеза втканях надкостницы. Выбор препаратов обусловлен, в частности, тем, чтоиммунофан, обладая высокой реактогенной способностью, активно вступаетв реакции с различными биологическими объектами, в том числе с клеткой.Стимулирующее воздействие иммуномодулятора на остеогенез былоосуществлено с применением двух методик:1) изучение ангиогенеза надкостницы2) изучение пролиферативной активности фибробластов, остеобластови макрофагов надкостницы.Материаломдляэкспериментальныхисследованийявились27половозрелых нелинейных крыс - самцов, массой 130 – 150 гр в возрасте 8-12месяцев.
Животные содержались в виварии с учетом рекомендацийхрономедицины и хронобиологии и (Комаров Ф.И. 1989).За одни сутки до повреждения крысам лимфотропно вводилииммуномодулятор.Остеотомиядиафизабольшеберцовойкостиинадкостницы наносилась под эфирным наркозом после рассечения кожи иобнажения передне-медиальной поверхности большеберцовой кости крысы.С помощью фрезы производилась поперечная частичная остеотомия,глубиной до 1 мм, после чего рана ушивалась наглухо.Контролем служили фрагменты надкостницы диафиза большеберцовойкости интактных крыс.
Животные выводились из эксперимента на 3, 7 и 14сутки.Исследование кровеносных микрососудов надкостницы проводилосьангиографическим методом путем наливки сосудистого русла препаратомомнипаком и производством серии рентгенограмм.42Анализ полученных данных позволил установить, что образованиекровеносных микрососудов происходило путем возникновения своеобразныхвыростов эндотелияв виде«конусов роста» или«почек». Плотностькровеносных сосудов определялась в единице объема в процентах в полезрения при увеличении в 160 раз.У основной группы животных через 3 суток после операции плотностьсосудистого русла увеличилась до 53, 27% (рис.
10), а на 7 сутки - до 61.43%(рис. 11).Через 2 недели плотность сосудистого русла составила 57.14%(рис.12). Причем, была заметна тенденция к ремоделированию кровеносныхмикрососудовпутемсозданияанастомозовмеждуобразующимися«почками» противоположных капилляров.Рисунок 10 - Ангиограмма сосудов голени крысы через 3 суток послеоперации.43Рисунок 11- Ангиограмма сосудов голени крысы через 7 суток послеоперации.Рисунок 12 - Ангиограмма сосудов голени крысы через 14 суток послеоперации.44В контрольной группе плотность сосудистого русла за весь периоднаблюдений не превысила 44,17% (рис.
13).Таким образом лимфотропное введение иммунофана стимулируетпроцессы неоангиогенеза у экспериментальных животных, способствуетобразованию новых капиллярных сетей и приводит к увеличению общейплощади кровеносного русла, что ускоряет репаративную регенерацию как внадкостнице, так и в костной ткани.Рисунок 13 -. Ангиограмма сосудов голени крысы контрольной группычерез 14 суток после операции.452.1.2. Методика стимуляции остеобластовКак известно, одним из показателей успешного развития процессарепаративной регенерации в условиях повреждения костной ткани являетсяпролиферативная активность фибробластов, остеобластов и макрофаговнадкостницы, являющихся камбиальными структурами для воспроизводствакости.Митотическуюактивностьклетокнадкостницыисследовалииммуногистохимическим методом с помощью моноклональных антител(МКА) типа РСNА, позволяющим учитывать не только клетки, вступившие вмитоз, но и готовящиеся к этому процессу, поскольку моноклональныеантитела(РСNА)специфическисвязываютсясбелкомциклином,содержащимся только в клетках, находящихся не в Gо–фазе митотическогоцикла [45, 110].Исходя из этого, целью исследования по второй методике явилосьизучение иммуномодуляторов на процессы пролиферативной активностифибробластов, остеобластов и макрофагов надкостницы.Былипроведеныэкспериментынаживотныхпоизучениюповрежденной ткани надкостницы бедренной кости на фоне изолированногои в комбинации лимфотропного введения иммуномодулятора (иммунофана).Работа выполнена на 16 крысах линии Wistar массой до 180 г ввозрасте 8-12 месяцев.
Выбор крыс линии Wistar обосновывается тем, чтолимфатическая система и иммунный комплекс по архитектонике и функциинаиболее близки к организму человека (Куприянов В.В. и соавт. 1983, Пол У.1988, 1989). Таким образом уменьшается возможность ошибок в обработкеданных, полученных у крыс,на человеческий организм. Животныесодержались в виварии с учетом рекомендаций хрономедицины ихронобиологии и (Комаров Ф.И.
1989). Забор биологического материалаосуществлялся с учетом положений хронобиологии в определённый периодсуток между 12 и 14 часами, учитывая то обстоятельство, что в лимфоиднойтканипроисходятциклическиесуточныеизменения(Т.С.Смирнова,Л.В.Ермолина, 1988; Г.С.Катинас с соавт., 1981; Ф.И.Комаров, 1989).46Повреждения надкостницы наносились под эфирным наркозом послерассечения кожи и обнажения передне-медиальной поверхности бедреннойкости крысы. С помощью фрезы производилась поперечная частичнаяостеотомия, глубиной до 1 мм, после чего рана ушивалась наглухо.Все животные были разделены на 2-е группы:1-я группа включала животных, которым за 1 сутки до повреждениянадкостницыпроводилиперфузиюлимфатическойсистемыиммуномодуляторами;2-я группа включала интактных животных.Животные выводились из опыта на 3, 7 и 14 сутки.
Область остеотомиирезецировалась и выдерживалась в 10% спиртовом растворе формальдегида втечение 2-х недель. Затем по стандартной методике были приготовленыпарафиновые столбики, из которых микротомом были изготовлены срезы.Срезы окрашивались по Ван-Гизону и гематоксилином-эозином.Приготовленные препараты были изучены на разных режимах увеличения(от 100 до 400-кратного) и сфотографированы при помощи микроскопа совстроенной цифровой фотокамерой Olympusbx51 (фотокамера Olympusu-tvo5 xc-3).Морфологические исследования позволили дать количественнуюоценку числа прореагировавших клеток путем визуально подсчета их в 10полях зрения микроскопа с вычислением среднего количества в одном поле.У животных 1-й группы через 3 дня после повреждения числопролиферирующих макрофагов увеличивалось более чем в 2 раза, а числоостеобластов и фибробластов так же превышало контрольные значения исоставляло 3,14 ± 0,21 и 2,71 ± 0,34 соответственно (рис.
14).Через 7 суток число пролиферирующих макрофагов снижалось до 3,07± 0,11 в поле зрения, а остеобластов и фибробластов - до 2,41 ± 0,16 и 2,09 ±0,17. Через 14 дней число пролиферирующих клеток было таким же, как уконтрольных животных.47БАРисунок14-.Остеобластынадкостницыприлечениииммуномодулятором через 3 суток (гематоксилин-эозин, х250) - А.