Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1140039), страница 6

Файл №1140039 Диссертация (Значение определения циркулирующего натрийуретического пропептида (pro ANP) и его локально-почечного мессенджера (cGMP) в оценке активности и прогноза хронического гломерулонефрита) 6 страницаДиссертация (1140039) страница 62019-05-31СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 6)

Далее методом калориметрии определяли плотностьокраски раствора, по которой вычисляли концентрацию вещества, то есть pro ANP.Процедуру анализа выполняли в соответствии с инструкциями к набору.II.3.2 Исследование cGMP (вторичного мессенджера ANP) в моче больныхХГН.У больных ХГН исследовали уровеньэкскреции с мочой сGMP методомиммуноферментного анализа: 10 мл утренней мочи собирали в сухие пластиковыепробирки и центрифугировали (при 1500 об/мин) в течение 5 минут при комнатной38температуре для удаления клеток мочевого осадка, затем забирали надосадочныйслой мочи, который до проведения исследования замораживали при температуре 20С. Результат концентрации cGMP выражали в пмоль/мл.Использовалинабор (Assay Designs' Correlate-EIA™ cyclic GMP, США)кроличьих поликлональных антитела к сGMP для конкурентного связывания сGMP.После инкубации при комнатной температуре избытки реагентов удаляли припромывке и добавляли субстрат.

После короткой инкубации энзиматическуюреакцию останавливали и развившееся желтое окрашивание измеряли с помощьюмикропланшетного ридеражелтойокраскибыладлиной волны 405 нм. Интенсивность развившейсяобратнопропорциональнаколичествусGMP,присутствующего в образцах или стандартах. Для расчета концентрации сGMPиспользовали показания оптической плотности (ОП). Применяли стандарт cGMPStandard – вариант без ацилирования (реакция присоединения ацильной группыкарбоновой кислоты, повышает чувствительность метода).Перед тем как добавить поликлональные антитела к раствору стандарта cGMPон подвергался разведению по определенной методике. Было пронумеровано шестьстеклянных пробирок 12 x 75 мм с №1 по №6.

В пробирку №1 вносили 900 мклбуфера для разведения стандарта (рабочий буфер 2 или культуральная среда) и 800мкл соответствующего раствора для разведения стандарта в пробирки №2-6, затем впробирку №1 вносили 100 мкл - 5000 пмоль/мл стандарта, затем содержимоетщательно перемешали на вортексе (прибор для интенсивного перемешивания). Изпробирки №1 переносили в пробирку №2 200 мкл раствора и снова тщательноперемешали на вортексе. Такую процедуру повторяли в пробирках №3 - №6. В39результате получили серию стандартных разведений с концентрациями 500, 100, 20,4, 0.8 и 0.16 пмоль/мл, соответственно.Буфер для промывок приготовляли путем разведения 5 мл поставляемого внаборе концентрата буфера в 95 мл деионизированной воды.Все реагенты оставляли в пробирках при комнатной температуре в течение неменее 30 минут, причем образцы и стандарты дублировали на случай ошибок.Концентрацию cGMP в образцах рассчитали следующим образом:1.

Сначала опредилили «среднюю чистую оптическую плотность связывания» длякаждого стандарта и образца вычитанием среднего значения «оптической плотностинеспецифического связывания» из среднего значения «оптической плотностисвязывания», то есть, средняя «чистая ОП» = среднее значение «ОП связывания» среднее значение «ОП неспецифического связывания».2. Затем рассчитывали связывание для каждой пары (дублей) стандартов как процентот максимального связывания. При этом использовали следующую формулу: %связывания = «чистая ОП» x 100 / «чистая ОП».403. При помощисвязывания»графической бумаги (Logit-Log) отмечали точки «процентапротивконцентрацийcGMPвстандартахспостроениемкалибровочной кривой.Концентрацию cGMP в исследуемых образцах определили интерполяцией наточки калибровочной кривой, при этом полученная линия имела уклон 1.060 икоэффициент корреляции 0.998.Параметры используемого набора определяли в соответствии с указаниямиперечисленными в протоколе оценки Национального Комитета по КлиническимЛабораторным Стандартам (NCCLS).Чувствительность метода была рассчитана на основании сравнения среднейоптической плотности шестнадцати (16) повторов максимального связывания сосредней оптической плотностью шестнадцати (16) повторов стандарта № 6.

ПределчувствительностиметодаравенконцентрациичеловеческогоcGMP,соответствовавшей двум стандартным отклонениям от нуля по калибровочнойкривой.Воспроизводимостьметодавнутрисериирассчиталимногократнымтестированием (n=16) образцов с низкой, средней и высокой концентрацией cGMP водной постановке.II.4. Методы статистической обработки полученных результатовДля статистического анализа полученных данных был использован пакетприкладных программ STATISTICA 6,0 и SPSS 11.5. На основании критериевШапиро-Вилка и χ2 Пирсона было оценено нормальное распределение исследуемыхпоказателей. При сравнении параметров, имевших ненормальное распределение,использовали критерий Манна-Уитни или критерий Крускалла-Уоллиса.

Определялимедиану,разбросвеличинпоотношениюкмедианепопоказателюинтерквартильного размаха (25%, 75% процентили). В тексте работы все значения41представлены в виде медианы, в фигурных скобках указан интерквартильныйразмах.Корреляционныйанализ проводилиметодом ранговойкорреляцииСпирмена. Критический уровень значимости для всех статистических данныхпринимали равным 0,05.42ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯIII.1. Определение уровня pro ANP в плазме крови больных ХГНОценка уровня pro ANP в плазме крови больных ХГН и здоровыхдобровольцев показала, что у больных ХГН в среднем он был выше (3,09 {2,08-5,32}нмоль/л), чем у здоровых людей (2,67 {1,95-3,24} нмоль/л), однако разница недостигластатистическойзначимости(р>0,05)из-забольшогоразбросаиндивидуальных показателей среди больных ХГН (табл 1,рис 1).Таблица.1.

Уровень pro ANP в плазме крови больных ХГН и контрольнойгруппыГруппыУровеньproANP,Достоверностьнмоль/лБольные ХГН3,09 {2,08-5,32}р>0,05(гр I,II,III,IV), n-60Контрольная(здоровые), n-9группа2,67 {1,95-3,24}43Рисунок 1. Уровень pro ANP в плазме крови больных ХГН и здоровых людей(контроль)Больные ХГНКонтрольнаягруппаПлазменный показатель proANP зависел от клинической активности ХГН: у больныхпротеинурическими формами в целом (группы I,II,III) он был достоверно выше, чему больных вне обострения (группа IV), соответственно 4 {2,56-6,49} и 2,04 {1,512,97} нмоль/л, р˂0,05 (табл 2, рис 2).Таблица.

2. Зависимость уровня pro ANP от активности ХГНБольные ХГНУровень pro ANP, Достоверностьнмоль/лПротеинурическиеформы 4 {2,56-6,49}(группы I,II,III) (n-49)Р I,II,III-IV˂0,05Неактивный ГН (гр IV) (N-11)2,04 {1,51-2,97}Контроль (n-9)2,67 {1,95-3,24}рК-IV>0,05pК-I,II,III˂0,0544Рисунок 2. Зависимость уровня pro ANP в плазме крови от активности ХГНАнализ уровня pro ANP отдельно среди больных протеинурическими формамиХГН выявил зависимость степени повышения уровня pro ANP в плазме крови отклинической активности ХГН - выраженности ПУ, белковых сдвигов крови и/илиналичия ПН. У больных с умеренным МС (группа III) имелась лишь незначительнаятенденция к повышению pro ANP по сравнению со здоровыми людьми и больными снеактивный ГН.

У больных с НС (группы I,II), то есть с наиболее клиническиактивными формами нефрита, средний уровень pro ANP был достоверно выше, чему здоровых лиц и больных групп III,IV (табл 3,рис 3).45Таблица.3. Уровень pro ANP в плазме крови больных разными клиническимиформами ХГНГруппы больных ХГНПоказательДостоверностьn=60Протеинурические формыХГНPro ANP, нмоль/лРГруппа I - НС с ПН7,08 {4,28-8,67}р I-к˂0,05р I-II˂0,05n=18р I - III˂0,05p I-IV˂0,05Группа II - с НС без ПН (n=16)3,86 {1,91-4,81}р II-к˂0,05p II-IV˂0,05Группа III - с умеренным МС2,93 {1,94-5,3}р III-к >0,052,04 {1,51-2,97}р IV-к˃0,05n=15Группа IV-с неактивным ГНn=11Контрольная группа здоровых 2,67 {1,75-3,25}pK-I˂0,05людей (К)pK-II˂0,05n=9Результаты представлены в виде медианы, в скобках указаны 25 и 75процентили46Рисунок 3.

Уровень pro ANP в плазме крови больных различнымиPro ANP (нмоль/л)клиническими формами ХГНСтрелками отмечены достоверные различия между группами (р˂0,05)Особенно высоким этот показатель оказался в группе больных с НС и ПН(7,08 {4,28-8,67} нмоль/л). Именно среди больных с НС и ПН выявлены самыевысокие в нашем наблюдении индивидуальные показатели pro ANP, достигающиеуровня 9,64 нмоль/л, что отразилось на наиболее высоком в нашем исследованиисреднем показателе плазменного pro ANP в этой группе больных (табл 4).47Таблица 4.

Уровень pro ANP в плазме крови больных ХГН с НС без и с ПН.Группы больныхУровеньвкровиProплазме ДостоверностьANP,нмоль/лГруппа I с НСи ПН 7,08 {4,28-8,67}рI-II˂0,05(n=18)Группа II с НС без ПН 3,86 {1,91-4,81}(n=16)Среди больных ХГН (группы I-IV) установлена сильная обратная корреляциямежду уровнем в плазме крови рro ANP и уровнем в сыворотке альбумина (Rs= 0,46; р˂0,01) и прямая корреляция между плазменным уровнем pro ANP и величинойсуточной ПУ (Rs=0,49; р˂0,001), сывороточным уровнемкреатинина (Rs=0,28;p<0,05) (рис 4,5,6).Рисунок 4. Уровень pro ANP в плазме крови больных ХГН (группы I-IV) вальбумин, г/лзависимости от показателя альбумина в сыворотке крови (Rs= -0,46; р˂0,01).504540353025201510500246pro-ANP, нмоль/л8101248Рисунок 5. Уровень pro ANP в плазме крови больных ХГН (группы I-IV) взависимости от показателя суточной ПУ (Rs=0,49; р˂0,001).1412СПУ, г/л1086420024681012pro-ANP, нмоль/лРисунок 6.

Характеристики

Список файлов диссертации

Значение определения циркулирующего натрийуретического пропептида (pro ANP) и его локально-почечного мессенджера (cGMP) в оценке активности и прогноза хронического гломерулонефрита
Свежие статьи
Популярно сейчас
А знаете ли Вы, что из года в год задания практически не меняются? Математика, преподаваемая в учебных заведениях, никак не менялась минимум 30 лет. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6686
Авторов
на СтудИзбе
290
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее