Диссертация (1140008), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Скрининг пациентов, нуждающихся в ортодонтическом лечении. 650 пациентов- Выявление генетической предрасположенности к воспалительным заболеваниям пародонта у пациентов, нуждающихся в ортодонтическом лечении (молекулярно-генетическоеисследование) - Комплексная оценка состояния тканей пародонтаЭтап II. Оценка эффективности предложенного комплекса лечебных мероприятий у пациентов с хроническим пародонтитом, проходящих ортодонтическое лечение.200 пациентов- разделение на основнуюгруппу и группу сравненияГруппа О – 142 пациентаГруппа С – 58 пациентов- разделение на подгруппы поналичию генетической предрасположенностиОХ – 80 пациентовОY – 62 пациентаСХ – 31 пац.СY – 27 пац.- разделение на подгруппы в зависимости от лечебныхмероприятийОХН 28ОХМ 25ОХК-27ОYH 20OYM21OYK- 21Через 7 дней после фиксации ортодонтической аппаратуры:Оценка пародонтологического статуса, в т.ч. с использованием диагностической системы Florida Probe.
- Молекулярно-генетическое исследование микрофлоры. Биохимические и иммунологические исследованияГистоморфологическое исследование- проведение комплекса лечебно-профилактических мероприятий через 1, 3 и 5 месяцев после фиксации ортодонтической аппаратурыОХН -28ОYH - 20- профессиональная гигиена- НанАргол – 3 курса по 15днейОХМ OYM- 25- 21- профессиональная гигиена- аутосеротерапия – 3курса по 3инъекцииОХК-27OYK - 21- профессиональнаягигиена- НанАргол – 3 курсапо 15 дней- аутосеротерапия – 3курса по 3 инъекцииСХ – 31СY –27- профессиональная гигиена- ротовые ванночки с раствором хлоргексидина биглюконатаОценка результатов лечения через 6 месяцев после фиксации ортодонтической аппаратурыОценка пародонтологического статуса, в т.ч.
с использованием системы Floridaprobe54-Молекулярно-генетическое исследование микрофлорыБиохимические и иммунологические исследованияГистоморфологическое исследованиеРисунок 2.1 – Логико-дидактическая стркутура проведенного исследования2.3 Методы исследованияДля решения поставленных перед диссертационным исследованием задач иполучения максимально возможной репрезентативной информации мы спланировали и реализовали у обследованных больных проведение комплекса клинических,молекулярно-биологических, иммуно-биохимических и гистоморфологических исследований, среди которых постарались использовать наиболее современные и информативные методы.
Их выбор был обусловлен результатами анализа литературных источников и возможностями доступных для нас лабораторий, диагностического оборудования и специалистов.2.3.1 Клинические методы исследованияКомплекс клинических методов исследований включал в себя помимо специфических методов, используемых при планировании ортодонтического лечения,методы субъективного обследования (выяснение жалоб и сбор анамнеза), а такжеобъективных методов исследования: стоматологического осмотра, пародонтологического обследования, рентгенологических методов.Беседу с больными с целью выяснения жалоб и анамнеза проводили традиционно, обращая особое внимание на жалобы со стороны эстетики и тканей пародонта.
При оценке анамнестических данных учитывали сформулированные критерии включения и не включения больных в исследование.Стоматологический осмотр проводили традиционно с использованием основных стоматологических инструментов и аппаратов. Определяли индекс КПУ,55учитывали число отсутствующих зубов и замещенных ортопедическими конструкциями. Оценивали прикус, наличие аномалий прикуса и положения зубов.
Ортодонтический диагноз ставили исходя из анализа комплекса диагностических данных.Рисунок 2.2 – Компьютерная диагностическая система «Florida probe»Пародонтологическое обследование проводили с целью максимальной объективизации с помощью компьютерной диагностической системы «Florida probe»(рисунок 2.2), позволяющей в полуавтоматическом режиме при стандартизированной оценке глубины пародонтальных карманов получать данные сразу о нескольких показателях, характеризующих состояние тканей пародонта: индексе зубногоналета, степени кровоточивости десны, наличии рецессии десны, поражении фуркаций корней зубов, гноетечении из пародонтальных карманов, подвижности зубов, глубине пародонтальных карманов, измеряемой в 6 точках в области каждогозуба [90].Из числа перечисленных в результатах нашего исследования были использованы только несколько, наиболее информативных и позволивших нами получитьинформацию о реальной клинической картине в полости рта у обследованных пациентов.
Из числа прочих мы выбрали 3 показателя, полученных с помощью диагностической системы: индекс зубного налета, степень кровоточивости десны исредняя у больного глубина пародонтальных карманов.56Индекс зубного налета оценивали по 4-бальной системе, исходя из представленных в таблице 2.4 и на рисунке 2.3 критериев.Из числа 6 результатов измерения глубины пародонтальных карманов в области каждого зуба выбирали и учитывали наиболее большой.Таблица 2.4 – Критерии оценки налета на видимых поверхностях зубов при использовании диагностической компьютерной системы «Florida probe»Оценка (баллы)Критерии оценкиПри использованиикрасителя0Отсутствие окрашивания поверхности1Окрашено не более 1/3 поверхности2Окрашено от 1/3 до 2/3 поверхностиОкрашено более32/3 поверхностиБез красителяКончик зубоврачебного зондапри зондировании десневойборозды чистыйВсе мягкие зубные отложенияудаляются кончиком зубоврачебного зонда из зубодесневой борозды одномоментноМягкие зубные отложенияудаляются из зубодесневойборозды и пришеечной частикоронки зуба лишь при двух –трех движениях зондомОбильные мягкие зубные отложения лежат в пришеечнойчасти коронки зуба пластом,прикрывая зубодесневой желобок и край десны, либоналичие на поверхности твердых зубных отложений, неудаляемых зубоврачебнымзондом57Рисунок 2.3 – Визуальные критерии оценки зубного налета на видимыхповерхностях зубов при использовании диагностической компьютернойсистемы «Florida probe»Степень кровоточивости десны оценивали также по 4-бальной системе со-58гласно критериям, предложенным Н.
Loe и J. Silness (1963) в индексе гингивита(GI).Среднее значение глубины пародонтальных карманов у конкретного больного рассчитывали, как сумму измеренных глубин карманов в области каждогозуба, деленную на число имеющихся зубов. Из шести точек оценки глубины кармана в области каждого зуба учитывали наибольшее значение.Рентгенологические методы исследования проводили как каждому пациенту, так по показаниям и дополнительно некоторым больным. К обязательным исследованиям относились методы панорамной рентгенографии челюстей. Ортопантомограммы делали каждому пациенту для уточнения диагноза. По показаниямпроводили телерентгенографическое исследование или компьютерную томографию. В ряде случаев использовали внутриротовую рентгенографию зубов.2.3.2 Лабораторные методы исследованийСреди лабораторных методов исследования, выбранных нами для использования, были молекулярно-биологические и генетические, иммуно-биохимическиеи гистоморфологические.2.3.2.1 Молекулярно-биологическое и генетическое исследованияОпределение полиморфизма генов провоспалительных интерлейкинов IL1αи IL1β проводили с помощью ПЦР-методики в «реальном времени».
Выбор именноэтих интерлейкинов для исследования обусловлен тем, что по данным литературных источников, особенно, последних лет, именно полиморфизм генов интерлейкинов IL1α и IL1β характерен для больных пародонтитом (см. главу 1). При наличии других сопутствующих местных факторов, каковыми могут выступать неудовлетворительная гигиена полости рта, аномалии прикуса и положения зубов, илипроводимое ортодонтическое лечение, развитие пародонтита неизбежно.
Исследо-59вания последних лет показали, что за измененный характер экспрессии и продукции соответствующих белков ответственны некоторые аллельные ассоциации генов семейства IL-1. В частности, выявлен ряд точечных маркеров гена IL-1α и β: 3737, -1469, -999, -511, -31, +3953, +3962, однако наиболее изученными являютсядва полиморфизма гена IL-1β: в промоторной части в положении -511 (С-511Т) и в5-м экзоне (С3953Т), ассоциированные с измененной экспрессией.Для исследований использовали наборы праймеров и зондов «TaqMan» длядетекции однонуклеотидного полиморфизма гена IL1α генома человека (AppliedBiosystems, кат.
№ 4351379) на 300 определений и набор праймеров и зондов«TaqMan» для детекции однонуклеотидного гена IL1β генома человека (Applied Biosystems).Исследование состояло из следующих этапов:1. Пробоподготовка – выделение ДНК из цельной крови;2. ПЦР-амплификация;3. Детекция – электрофорез и гель-документирование.В качестве биологического материала для исследования использовали венозную кровь, взятую в пробирки с 0,5% раствором калиевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). Выделение ДНК проводили с использованием реагентов PROTRANS DNA Box 500.Изучение ДНК основных пародонтопатогенов в пробах из пародонтальныхкарманов осуществляли с помощью специального набора для выявления условнопатогенных микроорганизмов полости рта методом ПЦР в режиме «реального времени» «Пародонтоскрин» (ДНК-Технология, Россия).
Состав этого набора позволяет выявлять и проводить количественный анализ основных пародонтопатогенов,участвующих в развитии воспалительных заболеваний пародонта: Actinobacillusactinomycetemcomitans, Porphyromorans gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerellaforsythia, Treponema denticola и Candida albicans.Забор материала для исследований осуществляли с помощью стерильных бумажных штифтов, которые вводили в пародонтальные карманы на 20 с, затем ихпомещали в транспортные пробирки Eppendorf и переносили в лабораторию.602.3.2.2 Биохимические и иммунологические исследованияКонцентрацию эластазы нейтрофилов в ротовой жидкости определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-системы«Human PMN Elastase Platinum ELISA», производства Bender MedSystems GmbH,Австрия.Тиоловый статус сыворотки крови и ротовой жидкости определяли фотометрическим методом с использованием тест-системы «Thiol status / Sulfhydryl statusassay», производства «Immundiagnostik AG», Германия.НСТ-тест заключается в цитохимическом выявлении темно-синих гранулдиформазана, которые образуются в цитоплазме нейтрофилов в результате восстановления нитросинего тетразолия (НСТ, желтого цвета) вследствие активации кислородзависимой биоцидности фагоцитов.Спонтанный (базальный) НСТ-тест указывает на степень активации кислородзависимых механизмов фагоцитов под влиянием внутренних причин, например,инфекции.Индуцированный (стимулированный) НСТ-тест указывает на потенциальную способность нейтрофилов к активации под действием внешних факторов (бактерий Staphylococcus aureus и их продуктов (зимозана, пирогенала).Ход исследования представлен в таблице 2.5.Таблица 2.5 – Ход исследования по оценке НСТ-теста сыворотки кровиПроцессДлительность(мин.)№Название этапа1Маркировали пробирки1) спонтанный тест,2) индуцированный тест12Приготовливали суспензии микроорганизмов(Staphylococcus aureus)Культуру микроорганизмов суспензировали в 2 мл ФСБ (фосфатно-солевом буфере)5613Стандартизировали оптическую плотностьсуспензии микроорганизмовИзмеряли оптическую плотностьсуспензии микроорганизмов (Е) наполуавтоматическом биохимическоманализаторе«ScreenMaster»(Hospitex diagnostics, Италия)(=546 нм, l=1 cм) и устанавливалиеё Е = 1,054Приготовливали 0,2%раствор НСТ (нитросинего тетразолия-п (хлорид) (США)Взвешивали 10 мг НСТ на торзионных весах; растворяли навеску в 5мл ФСБ; нагревали раствор на водяной бане до полного растворения55Приготовливалиреакционные смесиВ пробирку для постановки спонтанного теста вносили 0,5 мл стабилизированной (гепарином, цитратомнатрия) крови, 0,25 мл ФСБ и 0,25раствора НСТ.5В пробирку для постановки индуцированного теста вносили 0,5 мл стабилизированной (гепарином, цитратом натрия) крови, 0,25 мл стандартизованной по Е суспензии микроорганизмов и 0,25 раствора НСТ6Инкубировали пробирки с реакционнымисмесямиОбе пробирки инкубировали в термостате при 37ºС с периодическимперемешиванием307Приготовливали мазкиИз материала каждой пробиркиПриготавливали по два мазка58Окрашивали мазки0,2 % раствором динатриевой солиэозина, приготовленным на ФСБ(фосфатно-солевом буфере) (нейтрофилы окрашивали в розово-красныйцвет)309Определяли НСТ положительных нейтрофилов в %Микроскопияровали мазки с масляной иммерсией при увеличении ×1000.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
