Диссертация (1139727), страница 31
Текст из файла (страница 31)
Таким образом, несмотря насущественное различие в профилях растворения in vitro, основные дозировкиисследуемого и референтного ЛС были эквивалентными в условиях in vivo.Данный факт можно объяснить тем, что метформин относится к 3 классуБКС, и его абсорбция лимитируется не этапом высвобождения из ЛФ, а проницаемостью АФС через стенку ЖКТ. Таким образом, «дополнительный»дизайн исследования СТКР (относительно такой же дозировки референтногоЛС) является «сверхдискриминаторным», и оптимальным дизайном для таких препаратов является именно «основной» дизайн СТКР (относительнособственной дозировки, прошедшей исследование БЭ).206Для таблеток индапамида (состав 1, 0,625 мг и 1,25 мг) в каждой изтрех сред растворения более «быстрые» профили наблюдались для младшейдозировки (0,625 мг), наиболее «медленные» - для основной дозировки (2,5мг).
Такая картина была отмечена для всех трех сред растворения: вне зависимости от значения рН скорость высвобождения индапамида была тем выше, чем ниже была дозировка ЛС. Индапамид относится к 1 классу БКС[337], имеет «высокую» рН-независимую биофармацевтическую растворимость в физиологическом диапазоне рН, поэтому изменение рН среды практически не влияло на характер профилей растворения исследуемых ЛС. В тоже время, несмотря на принадлежность к 1 классу БКС, биофармацевтическая растворимость индапамида достаточно близка ко 2 классу (D/S около 90для дозировки 2,5 мг) [337], при этом некоторые авторы даже ошибочно егоотносили ко 2 классу БКС на основании фармакопейной растворимости(практически нерастворим в воде) [413].
В связи с этим можно сделать предположение, что скорость высвобождения индапамида из ЛС частично лимитировалось растворимостью субстанции индапамида, в связи с чем полноевысвобождение достигалось быстрее для минимальных дозировок и медленнее – для максимальных, что может накладывать ограничения на «основной»дизайн при проведении СТКР для дополнительных дозировок индапамида.В связи с неэквивалентностью профилей растворения было проведеноизменение состава ВВ, что повысило скорость растворения индапамида длявсех дозировок ЛС (состав 2, 0,625, 1,25, 2,5 мг), при этом была достигнутаэквивалентность профилей растворения без математической оценки. Профили растворения таблеток индапамида (состав 1 и состав 2, дозировки 0,625,1,25, 2,5 мг) в трех средах растворения рН 1,2, 4,5, 6,8 приведены на Рисунках 4.2.5.-4.2.10.207Рисунок 4.2.5.
Профили высвобождения индапамида (состав 1) в среде растворения рН 1,2Рисунок 4.2.6. Профили высвобождения индапамида (состав 1) в среде растворения рН 4,5Рисунок 4.2.7. Профили высвобождения индапамида (состав 1) в среде растворения рН 6,8208Рисунок 4.2.8. Профили высвобождения индапамида (состав 2) в среде растворения рН 1,2Рисунок 4.2.9. Профили высвобождения индапамида (состав 2) в среде растворения рН 4,5Рисунок 4.2.10.
Профили высвобождения индапамида (состав 2) в среде растворения рН6,82094.3. Выводы к главе 4.1. Изучена сравнительная кинетика растворения ЛС немедленного высвобождения, содержащие в качестве АФС следующие вещества: индапамид,леналидомид, метформин, рисперидон, силденафил, такролимус, темозоломид, топирамат. Для всех исследуемых лекарственных средств была установлена эквивалентность профилей во всех трех средах растворения, кроме ЛСиндапамида (состав 1, среды рН 1,2, 4,5, 6,8 для обоих дополнительных дозировок) и метформина (дополнительный дизайн, среды рН 1,2, 4,5, 6,8).2.
Установлено, что скорость высвобождения индапамида из ЛС частично лимитировалось растворимостью субстанции индапамида, в связи счем полное высвобождение достигалось быстрее для минимальных дозировок и медленнее – для максимальных, что может накладывать ограничения наприменение «основного» дизайна СТКР для дополнительных дозировок.3.
Показано, что для препаратов 3 класса БКС (на примере метформина) «дополнительный» дизайн исследования СТКР (относительно такой жедозировки референтного ЛС) является «сверхдискриминаторным», и оптимальным дизайном для таких препаратов является именно «основной» дизайн СТКР (относительно собственной дозировки, прошедшей исследованиеБЭ).210ГЛАВА5.СОПОСТАВЛЕНИЕРЕЗУЛЬТАТОВИССЛЕДОВАНИЙБИОЭКВИВАЛЕНТНОСТИ И СРАВНИТЕЛЬНОГО ТЕСТА КИНЕТИКИРАСТВОРЕНИЯ ДЛЯ ВОСПРОИЗВЕДЕННЫХ ЛС.Задачами настоящего этапа диссертационного исследования было провести СТКР и БЭ для воспроизведенных ЛС в различных лекарственных формах(суппозитории мелоксикама, таблетки капецитабина), сопоставить результатыисследования и сделать в каждом случае заключение о прогностической ценности СТКР при выборе оптимального состава, технологии и серии клиническогокандидата.Исследование кинетики растворения препаратов капецитабина проводилось в рамках выбора серии-клинического кандидата для последующего исследования биоэквивалентности.Исследование кинетики растворения суппозиториев мелоксикама проводилось в рамках корректирующих действий при установлении причин получения неэквивалентных результатов в рамках пилотных исследований БЭ дляданных препаратов.5.1.
Материалы и методы5.1.1. Объекты исследованияВ качестве объектов исследования были взяты оригинальные и воспроизведенные лекарственные средства: суппозитории мелоксикама, таблетки капецитабина.Исследуемые ЛС были предоставлены компаниями-разработчиками.
Воизбежание конфликта интересов и с учетом необходимости соблюдения соглашений о конфиденциальности с производителями лекарственных средств в настоящей главе не приводятся конкретные торговые (брендовые) наименования,фирмы-производители и серии исследуемых ЛС. Все лекарственные средствана момент исследования имели действующий срок годности.Образцы плазмы крови здоровых добровольцев были предоставлены отделом внедрения новых ЛС НИИ Фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ им.И.М.
Сеченова (главный исследователь к.м.н. Смолярчук Е.А.) и Городской211клинической больницей №1 им. Н.И. Пирогова (главный исследователь к.м.н.Щукин И.А.).5.1.2. Оборудование, реактивы, программное обеспечение.Для проведения исследований СТКР применялось оборудование, реактивы, программное обеспечение, приведенное в разделе 3.1.2.Для анализа биологических образцов на биоаналитическом этапе исследования использовали жидкостной хроматограф Agilent 1290 Infinity I с диодноматричным УФ-детектором, Agilent Technologies (США) и программнымобеспечением ChemStation (ver.
А.01.04.122), а также системы ВЭЖХ-МС/МСLCMS-8040 с тандемным масс-селективным детектором (тройной квадруполь),Shimadzu Corporation, Япония с программным обеспечением LabSolutions (Ver.5.3) и Waters Acquity H-class system с масс-селективным детектором, Waters,США с программным обеспечением MassLynx.Для приготовления подвижных фаз при анализе методом ВЭЖХ-МС/МСиспользовали следующие реактивы: ацетонитрил (Sharlau, HPLC grade), метанол (Sharlau, HPLC grade), муравьиную кислоту (Extra Pure, Fluka), формиатаммония (Extra Pure, Fluka).Биологические образцы хранили при температуре от – 45 до – 50 оС (морозильник медицинский Pozis, ММ-180/20/35, Россия).Стандартные растворы хранили в фармацевтическом холодильнике Pozis,ХФ-250, Россия при температуре от 2 до 8 оС.Центрифугирование проб осуществляли на центрифуге Thermo ScientificSL16, Германия.Описательную статистику проводили при помощи пакета MS Excel.
Расчет фармакокинетических параметров и дисперсионный анализ проводили припомощи программного обеспечения R project (версия 2.6.3, лицензия GPL2/GPL-3) с расширением bear (программа полностью валидирована относительно современного коммерческого программного обеспечения – WinNonlin) ирасширения Boomer для MS Excel (разработано Joel I. Usansky, Ph.D., Atul Desai,212M.S. and Diane Tang-Liu, Ph.D.; Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism Allergan, Irvine, CA 92606, США).5.1.3. Стандартные образцы капецитабин, субстанция-порошок (годен до 05.2015, стандарт фирмы,содержание 98,6%). 5-фторурацил, субстанция-порошок (производитель: ACROS ORGANICS,CAS 51-21-8, содержание 99 %). мелоксикам,субстанция-порошок(стандартфирмы,серияCML№20120220, годен до 02.03.2016).5.1.4.
Нормативная документацияИсследование сравнительной кинетики растворения проводили в соответствии с требованиями Руководства по экспертизе лекарственных средств, том I,2013 г. и том III, 2014 г., Методических Указаний Минздравсоцразвития России«Оценка биоэквивалентности лекарственных средств», приложение 4, 2008 г.Исследования кинетики растворения, проведенные до 2014 г., выполнялись на 6повторностях, после 2014 г. – на 12 повторностях.Биоаналитический и фармакокинетический этапы исследований БЭ проводили согласно Руководству по экспертизе лекарственных средств. Под ред.проф.
А.Н. Миронова. Том I. - М.: Гриф и К, 2013. - 328 с., Методическим указаниям «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств». Под ред. В.Г.Кукеса, В.П. Фисенко. М., МЗиСР России, 2008, а также зарубежным руководствам: Guidance for Industry: Bioanalytical method validation.
U.S. Department ofHealth and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER). U.S. Government Printing Office: Washington, DC, 2001и Guideline on validation of bioanalytical methods (draft). European MedicinesAgency. Committee for medicinal products for human use: London, 2009.2135.1.5. Изучение сравнительной кинетики растворения5.1.5.1. Изучение сравнительной кинетики растворения препаратов мелоксикамаСТКР проводили согласно ОФС 42-0003-04 «Растворение» на аппарате«вращающаяся корзинка» при скорости вращения 80 об/мин при температуре37 ± 0,5 оС. Среда растворения – фосфатный буферный раствор pH 7,5. Объемсреды растворения – 500 мл. Временные точки отбора проб: 5 мин, 15 мин, 30мин, 45 мин, 60 мин, 75 мин, 90 мин, 105 мин, 120 мин.В качестве условий для изучения СТКР были выбраны базовые условия,моделирующие rectum (рН 7,5).
«Вращающаяся корзинка» была выбрана какоптимальный аппарат для суппозиториев, поскольку при использовании лопастной мешалки возможно залипание ЛФ на стенках сосуда, что может снизитьвысвобождение. Объем среды растворения (500 мл) с одной стороны, обеспечивал условия «sink conditions» (то есть полное растворение высвободившейсясубстанции в данном объеме), с другой – достаточную концентрацию пробыдля ее последующего анализа методом УФ-спектрофотометрии.Буферный раствор рH 7,5. 13,61 г калия дигидрофосфата помещали вмерную колбу вместимостью 1000 мл, содержащую 800 мл воды, обрабатывалиультразвуком до растворения, доводили значение рН раствора до 7,5±0,05 спомощью 0,5 М раствора натрия гидроксида.
Доводили объем раствора водойдо метки и перемешивали.В каждый из 6 сосудов для растворения с 500 мл среды растворения,предварительно термостатированными при 37 ± 0,5 оС, помещали по 1 суппозиторию исследуемого лекарственного средства. Спустя указанные промежуткивремени проводили отбор 5 мл среды, который незамедлительно восполнялитаким же объемом среды растворения. Отобранные пробы фильтровали черезфильтры «Agilent Captiva Premium Syringe Filter®» с диаметром пор 0,45 мкм,отбрасывая первые порции фильтрата (испытуемый раствор). Параллельно и214аналогичным образом проводили исследование референтного лекарственногосредства.Количественное определениеПриготовление стандартного раствора. Около 50 мг (точная навеска)стандартного образца мелоксикама помещали в мерную колбу вместимостью100 мл, прибавляли 50 мл метанола, перемешивали до полного растворения,доводили объем раствора тем же растворителем до метки.
Полученный растворимел концентрацию мелоксикама 0,500 мг/мл. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили до метки средой растворения. 5 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводили объем раствора до метки средой растворения, перемешивали. Полученный раствор имел концентрацию мелоксикама 0,005 мг/мл.КоличественноеопределениепроводилиметодомУФ-спектрофотометрии. Измеряли оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в кварцевой кювете с толщиной слоя 10мм в области максимального поглощения при длине волны 275 нм, используя вкачестве раствора сравнения фосфатный буферный раствор pH 7,5.Количество мелоксикама в процентах (Q%), перешедшее в раствор от заявленного количества рассчитывали по формуле:Q% =, гдеА – оптическая плотность испытуемого раствора;Ао– оптическая плотность стандартного раствора;ао– навеска стандартного образца мелоксикама, мг;L – содержание мелоксикама в одной таблетке, мг;Р – содержание мелоксикама в стандартном образце, %;500 – объем среды растворения, мл;1 и 5 – объемы фильтрата, взятые для приготовления испытуемого раствора,мл;21510, 25 и 50 – объемы мерных колб, взятых для приготовления стандартного раствора, мл.5.1.5.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
