Диссертация (1139727), страница 34
Текст из файла (страница 34)
Валидация биоаналитических методикВалидацию биоаналитических методик проводили по следующим валидационным характеристикам: селективность, линейность, правильность (науровнях inter-run, intra-run), прецизионность (на уровнях inter-run, intra-run),предел количественного определения, перенос пробы, стабильность растворов.Для определения селективности методик проводили анализ 6 образцовинтактной плазмы, а также образцы интактной плазмы с прибавлением аналитов.
Оценивали наличие пиков со временами удерживания аналитов.Для оценки линейности методик готовили 6-10 калибровочных растворованализируемых веществ в интактной плазме и проводили их анализы. По полученным значениям были построены калибровочные графики, установлены величины коэффициентов линейной детерминации (r2), а также произведен обратный расчет концентраций калибровочных растворов.Для установления правильности и прецизионности методик готовилирастворы анализируемых веществ на 3-4 уровнях концентраций (нПКО, нижний образец КК, средний образец КК, вПКО) и проводили их анализ в 3-5 повторностях. Для каждого из уровней концентраций определяли величины относительной погрешности и относительного стандартного отклонения. Для уровня intra-run анализ проводили в течение одного аналитического цикла, дляуровня inter-run – двух-трех аналитических циклов.За нПКО методик принимали минимальную концентрацию аналита вплазме крови, для которой величины относительной погрешности и относительного стандартного отклонения не превышали 20 %, а отношение сигналшум для которой было не ниже 10.226Для оценки эффекта переноса пробы проводили последовательный анализкалибровочной пробы на уровне вПКО и интактной плазмы, оценивали наличиепиков аналита в интактной пробе.СтабильностьБыли проведены следующие исследования стабильности:- стабильность исходного и рабочих растворов аналита;- стабильность замороженного и размороженного аналита, перемещенного изусловий заморозки в комнатную температуру;- краткосрочная стабильность аналита в матрице при комнатной температуре;- долгосрочная стабильность аналита при низкотемпературной заморозке.Стабильность аналита в матрице изучалась на двух уровнях концентраций: нижний образец КК и вПКО.
Для каждого уровня концентраций было исследовано по 3 образца.Детальные результаты валидации биоаналитических методик приведеныв разделе 5.2. «Результаты и обсуждение».5.1.8. Оценка фармакокинетики и биоэквивалентностиИндивидуальные профили изменения значений концентраций для исследуемого и референтного ЛС хаpактеpизовались максимальной концентрациейлекарственного вещества (Cmax, наибольшее из измеренных значений) и временем ее достижения (Tmax), площадью под кривой «концентрация – время» в пределах от нуля до момента отбора последней пробы крови (AUC0-t), рассчитанной методом трапеций, общей AUC0-∞ и соотношением Cmax/AUC0-t. Дополнительно определяли следующие фармакокинетические параметры lambda_z –константа элиминации, T1/2 – период полувыведения, MRT – среднее времяудерживания, AUC0-t / AUC0-, Cl/F – клиренс, Vd/F – объем распределения.Статистический анализ результатов определения концентраций 5фторурацила в плазме крови и фармакокинетических параметров заключался врасчете среднеарифметических (Mean) и среднегеометрических (GMean) значе-227ний, стандартного отклонения (SD), коэффициента вариации (CV, %), медианы(Median) и их интервальной оценки (Доверит, L-90%, U-90%).Для основных и дополнительных фармакокинетических параметров рассчитаны их логарифмированные значения, а также проведен расчет соотношений для исследуемого и референтного препаратов.
Дисперсионный анализ(ANOVA) проводился по следующим факторам – препарат, последовательность, доброволец, период. Для оценки достаточности длительности наблюдений проводили сопоставление значений AUC0-t с общим AUC0-∞.Для оценки биоэквивалентности рассчитывали 90% доверительные интервалы основных фармакокинетических параметров: AUC0-t и Cmax.2285.2. Результаты и обсуждение5.2.1. Результаты исследования сравнительной кинетики растворения5.2.1.1.
Результаты СТКР для препаратов мелоксикамаБыла изучена кинетика растворения для 5 серий исследуемого препарата. Серии (составы) различались между собой технологией производства исоставами вспомогательных веществ, поэтому исследования СТКР было необходимо для выбора оптимального состава, наиболее близкого по профилюрастворения к референтному препарату. Результаты приведены в Таблицах5.2.1-5.2.6 и Рисунке 5.2.1.Таблица 5.2.1Индивидуальные и усредненные значения мелоксикама,высвободившегося в раствор из исследуемого лекарственного средства(состав 1), %№ пробы515304560759010512010,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,0020,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,0030,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,0040,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,0050,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,0060,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,00Среднее, % 0,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,00RSD, %0,00 0,000,000,000,000,00 0,00 0,00 0,00Таблица 5.2.3Индивидуальные и усредненные значения мелоксикама,высвободившегося в раствор из исследуемого лекарственного средства(состав 2) , %№ пробы515304560759010512012,50 1,281,343,796,298,60 10,40 12,02 13,5220,12 0,021,642,914,736,91 8,10 9,55 10,5530,96 0,961,172,504,566,02 7,34 10,23 10,2843,82 3,844,044,555,277,98 10,48 14,20 14,3551,59 1,613,636,968,81 10,62 16,09 14,98 16,0961,08 0,782,113,945,978,35 11,41 12,32 13,05Среднее, % 1,68 1,412,324,115,948,08 10,64 12,22 12,97RSD, %77,99 92,11 52,73 38,50 26,23 19,49 29,07 17,43 17,26229Таблица 5.2.2Индивидуальные и усредненные значения мелоксикама,высвободившегося в раствор из исследуемого лекарственного средства(состав 3) , %№ пробы515304560759010512012,55 12,20 21,10 28,67 33,64 38,00 40,70 39,20 44,6424,33 12,78 21,40 28,40 28,67 28,53 33,64 34,64 44,6138,62 14,08 22,63 22,96 24,16 25,14 38,86 39,40 39,0348,57 20,23 28,75 35,31 36,46 36,19 34,33 37,17 36,8055,95 14,88 33,27 30,87 32,73 33,30 35,60 39,62 38,3463,31 19,84 19,24 30,70 33,03 39,10 40,75 34,84 37,02Среднее, % 5,56 15,67 24,40 29,48 31,45 33,38 37,31 37,48 40,07RSD, %47,07 22,43 22,24 13,72 13,86 16,60 8,57 6,139,04Таблица 5.2.4Индивидуальные и усредненные значения мелоксикама,высвободившегося в раствор из исследуемого лекарственного средства(состав 4) , %№ пробы515304560759010512012,86 5,78 19,27 34,04 46,72 58,64 68,90 78,18 85,7026,63 7,56 22,28 35,53 49,83 62,36 74,04 84,23 92,6034,55 7,12 23,01 39,61 54,21 66,80 78,65 88,63 96,3744,55 5,14 19,35 33,79 47,43 59,43 71,33 80,98 88,3954,33 5,73 19,90 35,50 49,85 63,51 75,12 86,21 93,5864,73 4,80 21,30 38,24 52,49 65,82 76,98 87,07 94,63Среднее, % 4,61 6,02 20,85 36,12 50,09 62,76 74,17 84,22 91,88RSD, %26,13 18,14 7,596,455,735,26 4,85 4,704,39Таблица 5.2.5Индивидуальные и усредненные значения мелоксикама, высвободившегосяв раствор из исследуемого лекарственного средства(состав 5) , %№ пробы 5153045607590105120112,78 16,28 33,91 50,85 68,90 87,70 100,29 107,57 112,54213,18 17,02 34,09 56,88 69,47 85,19 96,76 107,98 113,69311,19 20,37 42,48 55,87 71,16 84,57 103,03 108,98 115,23410,55 16,92 36,85 53,82 72,30 89,25 97,87 107,76 116,03510,58 17,33 32,25 52,69 68,87 86,80 95,96 105,11 113,25616,11 21,35 32,89 50,20 66,36 89,10 96,03 106,19 114,54Среднее, % 12,40 18,21 35,41 53,38 69,51 87,10 98,32 107,26 114,21RSD, %17,19 11,55 10,745,002,962,242,861,291,14230Таблица 5.2.6.Индивидуальные и усредненные значения мелоксикама,высвободившегося в раствор из референтного лекарственного средства, %№ пробы 515304560759010512019,18 20,62 39,72 54,09 66,94 79,11 97,87 97,36 101,2527,71 20,28 41,24 52,23 67,61 81,31 99,39 98,72 111,2338,28 20,96 40,06 52,57 65,92 80,29 97,87 97,53 107,3448,79 21,13 41,08 52,74 71,16 80,80 98,55 98,55 108,6958,45 20,28 41,41 54,94 69,81 80,97 98,89 100,41 104,9767,61 21,30 40,23 56,12 70,15 78,60 97,87 100,24 105,31Среднее, % 8,34 20,76 40,62 53,78 68,60 80,18 98,41 98,80 106,46RSD, %7,31 2,091,742,863,011,36 0,661,313,23Рисунок 5.2.1.
Усредненные профили растворения суппозиториевмелоксикамаДля различных составов исследуемого препарата мелоксикама наблюдались существенные различия в профилях растворения. Так, для состава 1наблюдалось отсутствие высвобождения в среду растворения в течение 2 чпроведения исследования. Помимо отсутствия высвобождения для состава 1не наблюдалось также и распадения суппозитория, в то время как для референтного препарата наблюдалось полное распадения ЛФ (Рисунок 5.2.2).Данный факт свидетельствует о том, что различие в профилях растворениядляисследуемыхЛСмелоксикаматехнологическими факторами.связанноименносфармако-231Рисунок 5.2.2. Исследуемый препарат (состав 1, слева) и референтный препарат (справа) спустя 2 ч после проведения исследования.Для составов 2 и 3 наблюдалось только лишь частичное высвобождение мелоксикама из лекарственной формы (около 13 % и около 40 %, соответственно, к последней временной точке отбора проб).
Полное высвобождение (более 85 %) наблюдалось только у составов 4 и 5, а также референтногопрепарата мелоксикама. При этом профиль растворения был эквивалентенреферентному препарату только для состава 5 (f2 = 64). Для составов 2, 3 и 4величины фактора сходимости составили 10, 19 и 39, соответственно. Длясоставов 2 и 3 отмечалась высокая вариабельность высвобождения (более 10%) для большинства временных точек, в то время как для референтного препарата удовлетворительные (менее 10 %) значения RSD наблюдались длявсех временных точек, кроме первой. Для состава 5 низкая (менее 10 %) вариабельность результатов высвобождения наблюдалась для всех точек отбора, начиная с 30 минуты. Таким образом, принимая во внимание вышесказанное, именно состав 5 был рекомендован для проведения исследования БЭотносительно референтного препарата.2325.2.1.1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
