Диссертация (1139719), страница 39
Текст из файла (страница 39)
Исследование комплекса гидрофильных групп БАВ плодовПолученные данные по определению экстрактивных веществ (Глава 4, п. 4.1) показали,что кроме липофильных групп БАВ в плодах независимо от способа консервации, достаточнобольшое содержание БАВ гидрофильной природы, извлекаемой водно-спиртовыми смесями ссодержанием этанола 50-70%. Следовательно, данное ЛРС может использоваться не толькотрадиционно для получения облепихового масла и ЛП на его основе, но и новых лекарственныхформ, содержащих комплекс водорастворимые БАВ. При чем, использование свежего и замороженного сырья для создания ЛРП в гомеопатии и аллопатии, согласно данным многих исследований [250], может являться более перспективным, чем из высушенного, ввиду большего содержания БАВ.5.3.1. Разработка методик идентификации и количественного определения антоциановыхсоединений в плодах облепихи крушиновиднойАЦ - гликозилированные производные 2-фенилбензопирилия известны различной фармакологической активностью, в частности выраженными антиоксидантными, вазопротективными, антикоагулянтными и противоопухолевыми свойствами [223].
В силькислой среде(рН<3) они присутствуют в растворе в виде бензопирилиевых солей красного цвета. При повышении pH до 4-5 происходит присоединение во 2-м положении гидроксильной группы с образованием бесцветного псевдооснования. При pH 6-7 образуются феноляты синего цвета. Подщелачивание раствора до pH более 8,0 приводит к размыканию хроменового цикла с образованием соответствующего халкона [223]. На способности АЦ существовать в виде различноокрашенных производных, разработан наиболее известный рН-дифференциальный метод количественного определения [82]. Фармакопейным методом анализа АЦ, в соответствии с ЕФ и ГФСССР XI издания является прямая спектрофотометрия [91,400-403]. Учеными Самары (КуркинВ.А.
и др.) разработана методика определения АЦ, предусматривающая измерение оптическойплотности испытуемого раствора в спирте, содержащем 0,5% аммиака, на фоне раствора сравнения [223].5.3.1.1. Исследование спектральных характеристик антоциановых соединений плодовоблепихи крушиновиднойСодержание АЦ в плодах облепихи крушиновидной не нормируется. Кроме того, в научной литературе не обнаружено исследований по влиянию различных способов хранения плодовна стабильность данных БАВ.
Поэтому исследования по разработке методик для стандартиза-197ции и оценки качества плодов облепихи различных способов консервации по содержанию АЦдля более рационального использования растительных ресурсов является весьма актуальными.Экстрагенты, рекомендованые в литературе для извлечения АЦ из ЛРС, представлены втаблице 124. Извлечения из плодов готовили путем нагревания сырья с экстрагентами (таблица124) на кипящей водяной бане с обратным холодильником в соотношении 1:20 в течение 30минут. Полученные вытяжки отделяли с остатка сырья путем фильтрования через бумажныйфильтр, отбрасывая первые порции фильтрата. Оптическую плотность извлечений в диапазонедлин волн 400-600 нм измеряли на спектрофотометре Hitachi U1900 (Япония) относительноэкстрагента.Таблица 124Экстрагенты, рекомендованые в литературе, для извлечения АЦ из ЛРС [1,108,121,151,155,209]№Экстрагентп/п1Вода очищенная210% водный раствор кислоты муравьиной3Водные растворы кислоты хлороводородной: 1%; 8,3% 0,1 М4Спирто-водные растворы различной концентрации5Подкисленные спирто-водные растворы различной концентрацииУстановлено, что при экстракции сырья водой очищенной, спирто-водными растворамиразличных концентраций, 10% водным раствором кислоты муравьиной и 0,1 М водным раствором кислоты хлористоводородной вид спектра свидетельствовал об отсутствии в извлечениях из плодов облепихи соединений группы АЦ с характерным максимумом поглощения в диапазоне 510-550 нм (рис.
80).Использование экстрагентов, подкисленных кислотой хлористоводородной, дает положительный эффект: в видимой области спектра появлялся специфический максимум, свидетельствующий о присутствии в плодах восстановленных форм АЦ – лейкоантоцианов. Видспектров поглощения извлечений из плодов облепихи, полученных с применением подкисленных экстрагентов, представлен на рис. 81. Это неокрашенные предшественники АЦ, присутствующие во многих растениях, переходящие при воздействии соляной кислоты в АЦ даже вотсутствии кислорода. Их рассматривают в качестве гликозидов лейкооснований соответствующих антоцианидинов. Максимум в диапазоне длин волн 510 - 550 нм традиционно используется для качественного и количественного определения АЦ в плодах – источниках даннойгруппы БАВ, и может быть применен для стандартизации плодов облепихи крушиновидной.Спектральные характеристики исследуемых извлечений представлены в таблице 125.198оптическая плотность4123453210200300400500600700длина волны, нмРис.
80. Вид спектров поглощения извлечений из плодов, полученных с применением неподкисленных экстрагентов (1 – вода очищенная; 2 – 0,1 М водный раствор кислоты хлороводородной; 3 – 95% этанол; 4 - 70% этанол; 5 - 40% этанол)оптическая плотность0,610,520,4340,350,260,1708450500550600длина волны, нмРис. 81. Вид спектров поглощения извлечений из плодов, полученных с применением подкисленных экстрагентов (1 - разведенная кислота хлористоводородная; 2 - 1% водный раствор кислоты хлористоводородной; 3 – 70% подкисленный этанол; 4 - 40% подкисленный этанол; 5 50% подкисленный этанол; 6 - 60% подкисленный этанол; 7 - 95% подкисленный этанол; 8 90% подкисленный этанол; 9 - 80% подкисленный этанол)Полярность экстрагента существенным образом влияет на спектральные характеристикиизвлечений из анализируемого сырья, а именно, на интенсивность и положение максимума поглощения на спектрах АЦ (рис.
82 и таблица 125). С увеличением полярности экстрагента былозамечено гипсохромное смещение основного максимума поглощения АЦ (таблица 125).Смещение максимумов связано с разницей в растворимости отдельных индивидуальныхпредставителей АЦ смеси в данных экстрагентах, что приводит к изменению качественного состава смеси и преобладанию определенных соединений со своими специфическими спектральными характеристиками [33]. Данные изменения также могут быть вызваны переходом приувеличении pH растворов окрашенной в красный цвет протонированной формы антоцианиди-199нов в равновесные с ними формы халкона желтых оттенков, а так же нарастанием содержанияравновесной с этими формами неокрашеной карбинольной структуры [33].Таблица 125Результаты определения АЦ в извлечениях из плодов, полученных с применением различныхэкстрагентов [296,316]№Р поМаксимум поглощения, ±2 нм Оптическая плотность Содержаниеп/пАЦ, %Снайдеру40% водно-спиртовый раствор*7,515350,230,31650% водно-спиртовый раствор7,125390,150,21860% спирто-водный раствор6,735440,240,33770% спирто-водный раствор6,445470,310,42480% спирто-водный раствор6,055460,571,76590% спирто-водный раствор5,665480,410,57195% спирто-водный раствор5,275460,330,489Вода очищенная89,0Разведенная кислота хлороводородная95200,130,1 М водный раствор кислоты хлороводородной101% водный раствор кислоты хлороводородной11Плечо 510-5250,1610% водный раствор кислоты муравьиной12* - экстрагенты 1-7 подкислены кислотой хлористоводородной до концентрации 1%Оптическая плотность0,60,50,40,30,20,1056789Полярность (Р) экстрагента10Рис.
82. Вариабельность величины светопоглощения извлечения из плодов в максимуме в зависимости от полярности экстрагентаДанные таблицы 125 демонстрируют, что оптимальным экстрагентом для выделения суммы АЦ из плодов является 80% подкисленный этанол.200Полноту экстракции АЦ из плодов облепихи крушиновидной изучали по влиянию соотношения сырья и экстрагента (таблица 126), температуры и кратности экстракции (рис.
83), атакже оптимального времени экстракции (рис. 84). Показано, что максимальный выход АЦ достигается при экстракции в соотношении сырье-экстрагент 1:100 (таблица 126).Таблица 126Результаты количественного определения суммы АЦ в плодах при варьировании соотношениемЛРС - экстрагент [316]№ п/пЛРС:экстрагентСодержание суммы АЦ, %11:100,2708±0,027121:300,6349±0,063531:501,0805±0,108141:1001,7090±0,171051:1251,5820±0,158261:1501,5667±0,1567Рис.
83. Влияние кратности экстракции на выход АЦ в извлечениеРис. 84. Влияние времени экстракции на содержание АЦ в извлечении [316]Оценка влияния кратности экстракции на выход АЦ в извлечение из сырья показала, чтоповышение кратности сопровождается снижением данного показателя по сравнению с однократной экстракцией (рис.
83). По-видимому, это связано со снижением времени контакта сы-201рья с растворителем. Экстракцию следует проводить при температуре кипения водяной бани,что сопровождается полным переходом лейкоантоцианов в АЦ. Экстракция при температурныхрежимах 20±2 и 8±2 °С приводила к получению извлечений, не имеющих максимума в интервале 500-600 нм. Оптимальное время экстракции, согласно экспериментальным данным, составило 180 минут (рис. 84).С целью исследования стабильности АЦ в плодах облепихи и обоснования выбора оптимальных условий хранения, количественное определение проводили в свежих и высушенныхплодах. Установлено, что содержание АЦ при высушивании значительно снижается, что связано с окислительными процессами при длительном контакте сырья с кислородом воздуха привоздействии повышенных температур (рис.
85). Остаточное количество АЦ в высушенных плодах составляет менее 30% от свежего сырья.Рис. 85. Влияние способа консервации плодов на содержание АЦСогласно НД, хранение свежих плодов облепихи крушиновидной осуществляется в замороженном виде в бочках до 6 месяцев. Однако, продолжительность хранения, в соответствиис современными требованиями, предъявляемыми к стандартизации ЛРС и ФП, должно определяться с учетом стабильности БАВ в сырье.
Вопросы стабильности суммы АЦ при храненииплодов облепихи крушиновидной в условиях заморозки в режиме реального времени ранее влитературе не рассматривались.При хранении отмечается постепенное снижение содержания данных БАВ, что можетбыть связано с процессами окисления первичных форм АЦ – лейкоантоцианидинов, относящихся к лабильным полифенольным соединениям (рис. 86). Полученные результаты свидетельствуют о постепенном снижении содержания АЦ при хранении в режиме реального времени вусловиях морозильной камеры [324].202Рис. 86.
Содержание суммы АЦ в плодах облепихи крушиновидной при храненииКоличественное определение суммы АЦ в свежих плодах. Около 1,0 г измельченных плодов (т.н.) переносили в коническую колбу объемом 250 мл, добавляли 100 мл 80% подкисленного спирта. Колбу нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 3часов, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Извлечение после искуственного охлаждения колбы процеживали через бумажный фильтр, в мерную колбу объемом 100 мл. Если требовалось, добавляли экстрагент до метки и перемешивали.Количественное определение суммы АЦ в высушенных плодах.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
