Диссертация (1139719), страница 34
Текст из файла (страница 34)
Arg – аргинин; Gly – глицин; Gly – глутаминовая кислота; Met –метионин; Pro – пролин; Phe – фенилаланин; Leu – лейцин; Val – валин.На хроматограммах извлечения из ЛРС крапивы двудомной обнаружено девять зон АК схарактерными значениями величин Rf, среди которых идентифицированы заменимые АК0,07±0,01 (аргинин); 0,32±0,02 (пролин); 0,35±0,01 (глицин); 0,46±0,005 (глутаминовая кислота);и незаменимые АК 0,52±0,01 (валин); 0,58±0,005 (лейцин) и 0,64±0,02 (фенилаланин).
Метионин среди суммы свободных АК, выделяемых из сырья крапивы двудомной, не обнаружен. Нахроматограммах извлечений из высушенного ЛРС облепихи крушиновидной обнаружено двенадцать зон (рис. 60) АК с характерными значениями величин Rf (таблица 102), среди которыхидентифицированы заменимые АК 0,06±0,02 (аргинин), 0,32±0,02 (пролин), 0,35±0,01 (глицин);0,46±0,005 (глутаминовая кислота); и незаменимые АК 0,58±0,005 (лейцин) и 0,64±0,02 (фенилаланин).Треки извлечений из свежих плодов имели семь зон с характерными значениями величин Rf (таблица 102), среди которых идентифицированы заменимые АК 0,32±0,02 (пролин),0,35±0,01 (глицин); 0,46±0,005 (глутаминовая кислота); и незаменимая АК 0,58±0,005 (лейцин).Установлено, что состав АК в извлечениях из высушенных и свежих плодов облепихи крушиновидной несколько отличен.
Свежие плоды содержат АК как в свободном, так и в связанномвиде (белковые соединения, пептиды). Во время высушивания при температуре 600 С в клеточном соке ЛРС, богатом ОК [185], протекают процессы кислотного гидролиза, что может сопровождается изменением состава свободных АК в сырье. Кроме того, в свежих плодах содержатсятрудноизмельчаемые косточки, свободные АК которых не извлекаются при экстракции водой.166Метионин среди суммы свободных АК извлечений, как из свежих, так и из высушенных плодовоблепихи, не обнаружен.На экспериментально определяемые значения Rf заметно влияют условия хроматографирования. Для надежной идентификации АК исследуемых извлечений необходимо проводитьсравнение величин R f со стандартными образцами, что не всегда возможно ввиду недоступности последних. Более точной оценкой хроматографической подвижности, мало чувствительнойк влиянию случайных отклонений в условиях проведения эксперимента, является величина Rs,представляющая собой отношение величины R f одного вещества к величине Rf другого вещества, принятого за стандарт [92].
В качестве стандарта выбрана глутаминовая кислота, котораябыла обнаружена во всех исследуемых объектах, а также имела оптимальное значение величины Rf в выбранных условиях хроматографирования (таблица 103).Таблица 103Величины Rs АК на хроматограммах извлечений из исследуемого ЛРС [169]№ трекаВеличины Rs (стандарт – глутаминовая кислота)п/пЛистья крапивыПлоды облепихи крушино- Плоды облепихи крушинодвудомнойвидной высушенныевидной свежиеRfRsRfRsRfRs10,0470,10220,0700,15230,1500,32640,1700,37050,2600,5650,2600,56560,2900,63070,3200,7000,3200,7000,3200,70080,3500,7610,3500,7610,3500,76190,3700,804100,4200,9130,4200,913110,4601,0000,4601,0000,4601,000120,5201,130130,5801,2610,5801,261140,6401,3910,6401,3910,5801,391150,6801,4780,6801,4780,6801,478«-» зона на треке отсутствуетВ таблице 103 представлены значения величин Rs для АК, выявленных на хроматограммах изучаемых извлечений. Данные таблицы 103 показывают, что кроме общих зон АК, длякаждого вида ЛРС характерны собственные уникальные зоны.Для трека извлечения из листьев крапивы двудомной характеристической зоной являетсязона с величиной Rf 0,52±0,01 (валин).
Для трека извлечения из высушенных плодов облепихикрушиновидной - зоны с величинами Rf 0,26±0,02; 0,29±0,02; 0,37±0,02; 0,42±0,02, а также зонаАК 0,64±0,02 (фенилаланин), которая отсутствует на хроматограммах извлечения из свежихплодов. Величина Rs, определенная экспериментально, позволит решать одну из важнейших за-167дач фармацевтического анализа – идентифицировать АК в различных объектах при отсутствиистандартных образцов.4.4.2.3. Определение полного состава АК в изучаемых растительных объектахДля подтверждения правильности полученных результатов, а также исследования полного аминокислотного состава (свободные и связанные АК), на втором этапе работы изучаемыеобъекты анализировали методом КЭ (глава 2, п.
2.2.7). Электрофореграмма АК, полученная насистеме для КЭ «Капель-105/105М», представлена на рис. 61. Результаты представлены в таблицах 104 и 105.Согласно данным таблицы 104, преобладающими АК в косточке плодов облепихи крушиновидной являются аспарагиновая и глутаминовая кислоты.
Суммарное содержание АКплодов облепихи крушиновидной высушенных (с косточкой) составляет 11,83%% (в пересчетена абсолютно сухое сырье), из которых только 23,25% приходится на незаменимые АК. Плодыбез косточки (кожица и мякоть) в большом количестве содержат аргинин и пролин. Суммарноесодержание АК плодов облепихи крушиновидной свежих (без косточки) составляет около4,99%. Данный результат свидетельствует о преимущественном содержании АК в белках семени.Рис. 61. Электрофореграмма АК, полученная на системе для КЭ «Капель-105/105М»В исследуемом ЛРС крапивы двудомной преобладают аспарагиновая, глутаминовая кислоты, аргинин, лейцин, аланин, серин и треонин.Для исследования зависимости состава АК плодов облепихи крушиновидной от местпроизрастания (таблица 104) использовали многочисленные литературные данные [112,128,392,398].
Анализ результатов (таблица 104), свидетельствует о значительной зависимости данногопоказателя от места произрастания растения.168Таблица 104Аминокислотный состав исследуемых объектов (в пересчете на абсолютно сухое сырье)[119,120,169]№АКСодержание АК, %п/пПлоды облепи- Плоды облепи- Плоды облепихи Свежие плодыхи крушинохи крушинокрушиновидной облепихи крувидной (subsp. видной (subsp.высушенные (сшиновиднойturkestanica) chinensis) [392]косточкой)(без косточки)[398]Экспериментальные данные1Аrg0,04Не обнаружен1,170,802Lys*0,060,00050,490,143Тyr0,060,0060,350,364Phe*0,070,0020,350,435Gys0,020,0050,290,226Leu*0,060,0020,600,437Isoleu*0,050,0020,410,228Меt*0,030,050,060,079Vаl*0,070,080,430,2210ProНе обн.0,030,490,7211Тrn*0,040,0010,410,2912Ser0,050,010,600,3613Ala0,030,090,460,1414Gly0,040,0090,440,2215Cys0,35Менее 0,00716Glu0,120,0021,600,0717Asp0,170,033,330,29Здесь и далее: *- незаменимая АК.
Arg – аргинин; Gly – глицин; Gly – глутаминовая кислота;Met – метионин; Pro – пролин; Phe – фенилаланин; Leu – лейцин; Val – валин; Lys – лизин; Тrn– треонин; Gys - гистидин; Isoleu – изолейцин; Тyr – тиозин; Ser – серин; Ala – аланин; Cys –цистин; Asp - спарагиновая кислота.Представляет также интерес провести сравнительную характеристику содержания АК влистьях и других частях (стебли, цветки и трава) различных видов растения рода Urtica L.
(таблица 105). Для этого полученные результаты были сравнены с литературными данными [20,99,100,141,206,218,252, 264].Анализ результатов (таблица 105), в очередной раз подтверждает систематическую и генетическую близость этих двух видов. Однако, листья крапивы двудомной, по сравнению с листьями крапивы коноплевой, характеризуются большим содержанием АК. В траве крапивыдвудомной, по сравнению с листьями, такие АК, как аргинин, гистидин, треонин и серин, представлены в большем количестве, что может свидетельствовать об их преимущественном накоплении в том или ином органе растения.В целом, листья крапивы двудомной являются более богатым источником АК по сравнению с плодами облепихи крушиновидной (рис. 62 и 63).
Содержание АК в листьях крапивы169двудомной составляет 20,21% (в пересчете на абсолютно сухое сырье), из которых 35,63% приходится на незаменимые АК.Таблица 105Содержание АК (%) в листьях и других частях различных видов растения рода Urtica L.АКЭкспериментальные данныеТрава крапивы двуЛистья крапивы коно(листья крапивы двудомной)домной [264]плевой [206]Аrg1,232,51Lys*1,070,97Тyr0,780,230,50Phe*1,010,520,90Gys0,462,33Leu*1,590,460,73Isoleu*0,900,50Меt*0,300,19Vаl*1,110,230,82Pro1,03Тrn*1,224,520,88Ser1,270,84Ala1,471,710,71Gly1,190,350,75Cys0,630,33Glu1,961,661,75Asp2,993,761,62«-» нет данных2,757,213,019,08Доля незаменимых АК в комплексеАК плодов ОК высушенных, %Доля незаменимых АК в комплексе АКлистьев КД, %абРис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
