Диссертация (1139716), страница 45
Текст из файла (страница 45)
Фагоцитарный резервв крови животных, получавших соединения 2.35, 2.49 и оксиметилурацил,приходил к исходному уровню.Таким образом, исследованные соединения предохраняют экспериментальных животных от нарушений поведенческих реакций и процессов СРО в320крови и органах, вызванных физической нагрузкой, восстанавливая окислительные процессы фагоцитарной защиты, и предлагаются для дальнейших исследований в качестве перспективных антиоксидантных лекарственныхсредств.4.4. Противомикробная и противогрибковая активностиПроблема создания новых антибактериальных средств не теряет своейактуальности. Это связано, с появлением новых инфекций, генетическойтрансформацией известных возбудителей, приводящей к возникновению резистентных штаммов микроорганизмов, а также необходимостью уменьшенияпобочных эффектов многих известных антибактериальных препаратов.
Проведенный прогноз с помощью компьютерной системы РАSS показал, что тиетансодержащие производные пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов: гидразоны, Nацилгидразинилсукцинимиды и N,Nʹ-диацилгидразины, могут проявлять противомикробную (Ра-Рi 0,30-0,25) и противогрибковую (Ра-Рi 0,63-0,29) активности.Скрининг на противомикробную и противогрибковую активности 51синтезированного соединения проведен совместно с сотрудниками кафедрымикробиологии и вирусологии ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России под руководством д.м.н., проф. Булгакова А.К. [126].Противомикробную и противогрибковую активности тиетансодержащихпроизводных пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона определяли методами «диффузии вагар», двукратных (27 соединений) и десятикратных (24 соединения) серийныхразведений на мясопептонном бульоне (МПБ) с рН 7,2–7,4 [104]. В качестветест-культур использовали депонированные штаммы микроорганизмов вГИСК (Государственном научно-исследовательском институте стандартизациии контроля медицинских биологических препаратов им.
Тарасевича Минздрава России) музея кафедры микробиологии и вирусологии ГБОУ ВПО БГМУМинздрава России: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Proteus vulgaris,Klebsiella pneumoniae, Citrobacter diversus, Enterobacter aerogenes, Pseudomo-321nas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Serratia abosit и низших грибов Candidaalbicans. Для приготовления исходного разведения 100 мг исследуемого соединения растворяли в 1 мл ДМСО, с последующим разведением МПБ до рабочей концентрации 10 мг/мл.
Аналогично готовили рабочие растворы препаратов сравнения – стрептоцида (сульфаниламид, «Люми ООО», Россия) ипимафуцина (натамицин, «Astellas», Нидерланды). Микробная нагрузка составляла 2,0·106 микробных тел в 1 мл питательной среды. Посевы инкубировали при 37ºС в течение 72 ч и при 25ºС в течение 48 ч, после чего визуальнооценивали наличие, угнетение или отсутствие роста тест-культур.Врезультатепроведенногометилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионоксотиетан-3-ил)-(2.43)искрининга(2.1),установлено,3-(тиетан-3-ил)-3-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-что(2.33),(2.45)63-(16-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дионы, их С5-аминометилпроизводные (2.49,2.51, 2.55, 2.62, 2.64), этиловый эфир (2.104) и гидразиды (2.194, 2.196) тиетансодержащих2-[6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил]уксусных кислот, ацилгидразоны (2.219, 2.220-2.222, 2.236) в концентрации10000 мкг/мл не подавляли роста исследованных штаммов микроорганизмов.Ацилгидразон 2.201, имеющий в илиденовом фрагменте гидроксигруппу, проявлял слабую противомикробную активность (МИК 2500 мкг/мл) в отношенииграмотрицательных тест-культур, а ацилгидразон 2.223 (МИК 625 мкг/мл), содержащий арильный заместитель с двумя гидроксигруппами, оказывал какпротивомикробное действие в отношении грамположительных и грамотрицательных тест-культур, так и противогрибковую активность в отношении низших грибов (табл.
3.11).Высокая противомикробная активность наблюдалась у N-ацил-5гидроксипиразолинов,N,Nʹ-диацилгидразиновиN-ацилгидразинил-сукцинимида, что согласуется с результатами прогноза в интернет - версии системы PASS, величины МИК составили 0,1-10 мкг/мл в отношении исследованных тест-культур (табл. 3.11). N-Ацил-5-гидроксипиразолины (2.248, 2.249)и N,Nʹ-диацилгидразины (2.277, 2.279, 2.283) превосходили действие стрепто-322цидав10раз,аN,Nʹ-диацилгидразины(2.274,2.284)иN-ацилгидразинилсукцинимид 2.289 проявили сравнимую со стрептоцидом противомикробную активность в МИК 1 мкг/мл в отношении St.aureus.
По отношению к большинству грамотрицательных тест-культур наиболее активны соединения 2.249, 2.274, 2.277, 2.283 и 2.289 (МИК 0,1 мкг/мл) (табл. 3.11).N-Ацил-5-гидроксипиразолины (2.248, 2.249), N,Nʹ-диацилгидразины(2.273, 2.274), N-ацилгидразинилсукцинимид 2.289 проявили противогрибковую активность в отношении низших грибов С. аlbicans равную пимафуцину(МИК 1 мкг/мл), а N,Nʹ-диацилгидразины (2.277, 2.279) оказались активнеепимафуцина в 10 раз (МИК 0,1 мкг/мл).N1-Ацетанилидпроизводные (2.143-2.145, 2.161, 2.162, 2.166), в том числе и N1-ацетанилид 2.150, содержащий в качестве анилидсоставляющей молекулу стрептоцида, в концентрации до 10000 мкг/мл не ингибировали жизнедеятельность исследованных бактерий и низших грибов.
Однако, N1-ацетанилиды 2.149, 2.159, 2.167, содержащие в ароматическом кольце ацетогруппу,проявляли выраженную противомикробную и противогрибковую активности винтервале концентраций 0,1-10 мкг/мл в отношении St. aureus, E. coli, P. vulgaris, K. pneumoniae, C. diversus, Ent. aerogenes, Ps. aeruginosa, Ser. abosit и C.albicans (табл. 3.11).ВведениевструктуруN-(4-ацетилфенил)-2-(тиетанилпиримидин-1-ил)ацетамидов 2.149, 2.159, 2.167 гидразинных фрагментов (соединения 2.172,2.174, 2.175, 2.177-2.180, 2.183) приводит к потере как противомикробной, таки противогрибковой активностей. Исключение составил семикарбазон 2.182,который сохранил активность исходного ацетанилида 2.159.Полученные результаты показывают перспективность продолжения поиска новых противомикробных и противогрибковых лекарственных средств вряду тиетансодержащих пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов, структура которыхпринципиально отличается от известных антибактериальных препаратов.323Таблица 3.11Противомикробная и противогрибковая активность новых производных тиетанилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионовМинимальные ингибирующие концентрации (МИК), мкг/мл№ соедиSt.E.P.K.C.Ent.Ps.E.Ser.C.ненияaureuscolivulgaris pneumoniae diversus aerogenes aeruginosa cloacaeabositаlbicans12.14912.15912.16712.182>100002.2016252.2230,12.2480,12.249102.27312.2740,12.2770,12.2790,12.28312.284102.28512.289Стрептоцид1Пимафуцин0,10,10,10,1250062510,110111101100,110,110,11250062510,110,1110,10,110,110,10,10,10,1250062510,110,1110,1110110,10,110,1250062510,10,10,10,10,10,1110,110,10,10,10,1250062510,110,10,110,10,11110,111125006250,10,1110,110,10,1100,11111012500625110,11010,110,111111111>1000062511110,10,1101010000113244.5.
Психотропная активностьПсихотропные свойства 22 тиетансодержащих производных пиримидин2,4(1Н,3Н)-диона исследованы совместно с сотрудниками кафедры фармакологии № 2 ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России под руководством заведующей кафедрой, д.м.н., проф. Валеевой Л.А.Предварительно был проведен прогноз в интернет – версии компьютерной программы РАSS (табл. 3.12) и выбрано 15 соединений для исследований:N1-(аминооксоэтил)производные (2.126, 2.137), N1-ацетанилидпроизводные(2.145, 2.149, 2.159, 2.162, 2.165, 2.167) и тиосемикарбазоны (2.178-2.180), продукты реакции Ганча (2.187, 2.189), N-ацилгидразинилсукцинимиды (2.287,2.289).РядС5-аминометилпроизводныхтиетанилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов (2.49, 2.51, 2.55, 2.59, 2.62, 2.64, 2.68) выбран на основании анализа литературных данных [48, 49].Таблица 3.12Результаты прогноза психотропной активности тиетансодержащих производных пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона в программе РАSSСоединенияРа-РiАктивность/эффект2.175, 2.176, 2.181-2.183, 2.287,0,57-0,13Anticonvulsant2.2892.177, 2.187-2.1890,28-0,09MAO inhibitor2.124-2.128, 2.131, 2.133, 2.137,0,52-0,10Nootropic2.138, 2.140, 2.1412.149, 2.159, 2.172-2.1830,23-0,14Neuropeptide Y4 antagonist2.149, 2.178, 2.181-2.1830,15-0,11Neuropeptide Y2 antagonistЭксперименты выполнены на белых беспородных половозрелых мышахсамцах массой 20-24 г, из которых были сформированы группы по 6 животныхв каждой.Для скрининга психотропной активности использованы стандартныепсихофармакологические тесты: «открытое поле», «приподнятый крестообразный лабиринт», «вращающийся стержень», «вертикальный экран-сетка»,«подвешивание мышей за хвост», «принудительное плавание по Порсольту»[104].Исследуемые соединения суспендировали ex tempore в изотоническом325растворе NaCl с добавлением Твин-80.
Суспензии вводили однократно внутрибрюшинно за 30 мин до начала эксперимента в дозе равной 1/10, 1/100 и1/200 от молекулярной массы (М.м.). Животным контрольной группы вводился изотонический раствор NaCl с добавлением Твин-80.Статистическую обработку проводили с помощью программы Statistica6.1, используя непараметрический U-критерий Манна-Уитни [152].
Для описания вариационных рядов рассчитывали медиану (Ме) и интерквартильныйразмах [25%;75%]. Отличия считали достоверными при p<0,05.В тесте «открытое поле» о психостистимулирующем и психоседативномдействиисудилипоспонтаннойдвигательнойиориентировочно-исследовательской активности (ОИА), эмоциональную тревожность оценивалипо длительности груминга и количеству дефекаций (табл. 3.13, 3.14).Установлено,чтопосравнениюсконтролем,С5-аминометилпроизводные 2.49 и 2.68 статистически значимо на 42% и 65% соответственно снижали количество обследованных отверстий, на 90% и 83%увеличивали дефекации.
Соединения 2.49, 2.51, 2.62, 2.64 и 2.68 уменьшалиОИА, а соединения 2.62, 2.64 и 2.68 также двигательную активность, но статистически незначимо. Снижение количества обследованных отверстий можетбыть связано с седативным действием изучаемых С5-аминометилпроизводныхтиетанилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов.В группах животных, получавших суспензию N1-ацетанилидов 2.149 и2.167 в дозе 1/10 от М.м., наблюдалось снижение ДА на 22% и 32%, ОИА на33% и 20%, стоек с упором на 48% и 64%, количества заходов в центр на 33%и 42% соответственно по сравнению с контролем, но статистически незначимо.Под влиянием тиетансодержащего тиосемикарбазона 2.178 в дозе 1/10 отМ.м. статистически значимо в 2,2 раза уменьшалось количество обследованных отверстий, в 2,4 раза стоек с упором и в 2 раза ОИА.
Тиосемикарбазон2.180, содержащий тиетан-1,1-диоксидный цикл, в дозе 1/10 от М.м. по сравнению с контролем на 40% статистически значимо снижал количество обсле-326дованных отверстий, в 6 раз количество вертикальных стоек и количество актов груминга до 0.Таблица 3.13Влияние новых производных тиетанилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов на параметры индивидуального поведения в тесте «открытое поле»СоДАНСуВсЦАГДГДУОИАединенение,дозаСерия 1.конт1072616,53,58,50,50,50,5050роль [87;122] [22;31] [12;19] [1;7] [7;11] [0;3][0;6][0;1] [0;0] [39;55]10515*171011145*0452.491/10 [83;125] [7;16] [13;21] [3;12] [7;15] [0;2][0;7][3;7] [0;1] [27;49]9222,515,53,511002,50412.511/10 [74;129] [20;27] [10;18] [0;5] [5;13] [0;1][0;3][0;4] [0;2] [31;45]719*1512,561,54,53*0382.681/10 [63;102] [8;12] [14;19] [5;15] [4;12] [1;3][4;6][2;4] [0;0] [32;45]Серия 2.конт6781402290028роль[38;69][7;14][5;14][0;3][1;6] [1;2] [5;14] [0;2] [0;0] [13;29]5715,58,536,51610252.551/10[54;95] [12;22] [4;19][0;6][4;7] [1;3] [1;12] [1;2] [0;1] [20;42]60226350000342.591/10 [53;102] [10;25] [0;17] [1;14] [4;14] [0;1] [0;2] [0;0] [0;0] [23;41]3493,50016,50,5013,52.621/10 [17;55][5;12][2;10][0;1][0;1] [0;3] [0;14] [0;1] [0;1] [7;23]49,5129131,5800192.641/10[27;82][7;21][3;14][1;2][2;5] [1;2] [5;12] [0;0] [0;0] [14;33]Серия 3.конт71171306002032роль[66;93][9;30] [10;14] [0;1][4;7] [0;1][0;8][0;2] [0;0] [32;37]68,514,56,53,55,515,500322.1261/10[46;96] [10;20] [3;14] [0.5;6] [2;17] [1;1][3;7][0;1] [0;0] [18;35]90,519,5122101600342.1371/10 [66;118] [16;23] [7;18][0;5] [7;11] [1;2][2;8][0;1] [0;0] [28;40]811317371200332.1451/10[48;84] [12;14] [10;18] [0;6] [1;11] [1;1][2;5][0;1] [0;0] [25;37]851510150000252.1621/10[83;91] [13;18] [3;14][0;3][3;6] [0;0][0;0][0;1] [0;0] [22;36]63108153910322.1651/10[40;71][8;11][6;20][1;4][3;5] [2;3] [4;11] [1;1] [0;0] [17;34]Примечание: ДА - двигательная активность, количество пересеченных квадратов; Н - обследованные отверстия; Су - стойка с упором; Вс - вертикальная стойка; Ц - вход в центр,число пересечений животным центральной зоны; АГ - частота груминга; ДГ - длительностьгруминга; Д - число актов дефекаций; У - число актов уринаций; ОИА (ОИА=Н+Су+Вс) ориентировочно-исследовательскую активность;* - различия достоверны по сравнению с контролем (р<0,05 для U-критерия Манна-Уитни).327Таблица 3.14Влияние новых производных тиетанилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов на параметры индивидуального поведения в тесте «открытое поле»Соединение,доза1Серия 1.контроль2.1491/102.1491/1002.1491/2002.1671/102.1671/1002.1671/200Серия 2.контроль2.1591/102.1591/1002.1591/200Серия 3.контроль2.1801/102.1801/1002.1801/2002.2871/102.2871/1002.2871/200Серия 4.контрольДАНВсСуЦДУОИА234567893[2;7]2[1;3]4[2.5;9]0[0;1]1[0;4]1,5[1;9]8[6;12]19,5[15;25]10[6;13,5]19.5[13;21]11[2;18]7[3;20]19,5[17;21]20,5[17;26]6[4;9]3,5[2;4,5]5[2;9]5,5[5;7]3,5[2;7]4,5[3;6]7,5[7;10]0[0;0]0[0;0]0[0;1]0[0;0]0[0;0]0[0;1]0[0;1]0[0;0]0[0;0]0[0;0]0[0;0]0[0;0]0[0;0]0[0;0]39,5[24;44]26,5[16;31]45,5[27;55]30[25;37]31,5[18;48]37,5[31;48]47,5[41;59]82,516,5[61;100,5] [13;17]82,514,5[62;106] [8,5;16]94,516,5[56;106] [11;24.5]72,522,5[56;79][16;25]7121,5[53;87][16;24]8017[77;90][12;19]9617[75;108][11;28]68[41;95]92,5[76;101]61[52;72]77[60;91]16[7;23]18[11;19]15[14;23]16,5[8;21]3[1;8]15[13;28]9,5[4;11]10,5[7;15]6,5[2;22]22,5[15;24]18[14;19]15[13;33]2,5[0;4]8*[6;9]4[4;9]7*[5;12]0[0;2]0[0;2]0[0;1]0[0;1]0[0;0]0[0;0]0[0;0]0[0;0]26,5[10;60]55,5[45;63]42,5[39;49]41[34;64]73[61;81]66,5[50;105]70[64;102]104[77;113]104,5[88;118]85[79;118]97,5*[92;117]22,5[16;34]13,5*[7;17]17,5[16;34]9,5*[8;14]20,5[19;23]24[14;28]20,5[14;29]3[1;8]0,5*[0;2]1[1;2]1,5[0;5]1,5[0;3]0*[0;0]4[3;6]12[9;13]6,5[3;27]10[6;16]14[6;18]17,5[4;26]16[6;22]23,5*[22;25]6[4;8]2,5[0;7]5[1;8]3[1;10]7[4;9]6,5[4;7]7[6;14]0,5[0;2]0[0;1]0[0;0]1,5[0;3]1[0;2]1,5[0;2]0,5[0;2]0[0;0]0[0;0]0[0;1]0[0;0]0[0;1]0[0;0]0[0;0]42[32;54]19,5[15;46]32[23;39]27,5[15;42]45,5[24;50]45[20;51]48,5[39;58]71[60;87]18[18;34]3,5[0;6]18[14;18]4,5[3;7]0[0;1]0[0;0]38,5[38;56]32812345678960,58*07,5*2,50017*2.1781/10[47;100][5;13][0;0][4;11][1;4][0;1][0;0][8;25]80245,52170,50472.1781/100[77;92][19;27][3;10][11;22][6;8][0;2][0;0][38;57]80182,517,55,500362.1781/200[71;89][11;21][2;5][7;22][2;6][0;0][0;0][25;45]95170152,50033,52.2891/10[42;112][13;21][0;3][4;24][2;6][0;0][0;0][17;50]65,5224125,50,5024,52.2891/100[58;115][15;27][1;9][4;18][2;8][0;1][0;0][19;53]8019,55,5234,50,5037,52.2891/200[70;105][11;24][3;7][17;24][2;5][0;1][0;0][25;55]Серия 5.кон822461693048троль[70;99][20;34][2;12][8;22][4;13][0;4][0;0][44;62]56,519,538,560031,52.1791/10[32;72][15;25][0;4][4;16][3;9][0;1][0;1][26;39]7124,5613,55,51040,52.1791/100[64;81][17;31][4;8][10;21][4;10][1;2][0;0][34;60]8218*22*211010582.1791/200[82;115][14;19] [16;24][20;25][9;11][1;2][0;0][55;67]Серия 6.кон7914318,56,51038,5троль[57;106][9;15][0;6][14;20][1;12][0;2][0;0][21;43]108,513,56,516,540036,52.1871/10[68;149][12;15][6;7][14;19][2;6][0;0][0;0][32;41]869,5619,541037,52.1871/100[68;97][6;14][4;12][3;25][3;6][0;1][0;1][25;45]767*5,517,5400302.1871/200[69;80][4;7][2;8][16;21][0;4][0;1][0;0][27;51]Серия 7.кон692041850138троль[45;104][12;24][1;10][16;29][2;11][0;0][0;1][37;60]10619219600*422.1891/10[76;113][14;25][0;2][17;20][5;7][0;0][0;0][36;54]97,525316,5800*49,5*2.1891/100[87;110][18;31][2;11][15;29][4;8][0;1][0;0][42;52]104283,520500*562.1891/200[75;122][26;31][1;5][14;28][3;8][0;1][0;0][49;61]Примечание: ДА - двигательная активность, количество пересеченных квадратов; Н - обследованные отверстия; Вс - вертикальная стойка; Су - стойка с упором; Ц - вход в центр,число пересечений животным центральной зоны; Д - число актов дефекаций; У - число актов уринаций; ОИА (ОИА=Н+Су+Вс) - ориентировочно-исследовательскую активность;* - различия достоверны по сравнению с контролем (р<0,05 для U-критерия Манна-Уитни).В опытной группе, получавших продукт реакции Ганча 2.187 в дозе 1/200 отМ.м.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
