Диссертация (1139716), страница 41
Текст из файла (страница 41)
Через 6 часов выпавший осадок отфильтровывали, промывали нбутанолом, сушили. Перекристаллизовывали из BuOH.1,3-Диметил-1,6,8,9-тетрагидро-2Н-[1,4]оксазино[4,3-е]пурин-2,4(3Н)дион (2.319) получали аналогично соединению 2.318 из соединения 2.314. Перекристаллизовывали из BuOH.1,3-Диметил-1,6,7,8,9,10-гексагидро-2Н-азепино[1,2-е]пурин-2,4(3Н)дион (2.320) получали аналогично соединению 2.318 из соединения 2.315. Перекристаллизовывали из BuOH.1,3-Диметил-7-нитрозо-6,7,8,9-тетрагидропиразино[1,2-е]пурин2,4(1Н,3Н)-дион (2.321) получали аналогично соединению 2.318 из соединения2.317.
Перекристаллизовывали из BuOH.1,3-Диметил-6,7,8,9-тетрагидропиразино[1,2-е]пурин-2,4(1Н,3Н)-дионагидрохлорид (2.322). К 30 мл разведенной хлороводородной кислоты добавили2,64 г (10 ммоль) соединения 2.321, кипятили 30 мин. Раствор охлаждали,фильтровали, фильтрат упаривали в вакууме до объема ½ и выливали в 50 мл297ацетона.
Выпавший осадок отфильтровывали, промывали ацетоном, сушили.Перекристаллизовывали из i-PrOH.1,3-Диметил-6,7,8,9-тетрагидропиразино[1,2-е]пурин-2,4(1Н,3Н)-дион(2.323). К раствору 0,67 г (12 ммоль) гидроксида калия в 50 мл этанола добавляли 2,71 г (10 ммоль) соединения 2.322, перемешивали 30 мин при 50ºС.Охлаждали, фильтровали, растворитель из фильтрата отгоняли в вакууме досуха, приливали 50 мл ацетона. Выпавший осадок отфильтровывали, промывалиацетоном, сушили. Перекристаллизовывали из i-BuOH.298ГЛАВА 4.
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИНОВЫХ S И N ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИМИДИН-2,4(1Н,3Н)-ДИОНОВ4.1. Общие положенияЭксперименты выполнены на полученных в ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово» РАМН животных, содержавшихся в стандартных условиях вивария на сбалансированной согласно ГОСТ Р 50258-92 диете.Исследования проведены в соответствии с нормативной документацией: Приказом МЗ и СР РФ от 23.08.2010 № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики», ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторнойпрактики», а также правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей(1986).4.2.
Гипотензивная активностьАртериальная гипертензия (АГ) является одним из ведущих факторомриска развития мозгового инсульта, инфаркта миокарда, сердечной и почечнойнедостаточности, ишемической болезни сердца, ранней инвалидизации ипреждевременной смертности [286, 348]. Несмотря на то, что у современныхврачей имеется значительный арсенал антигипертензивных препаратов, постоянно увеличивается количество людей с высоким уровнем артериального давления (АД), невосприимчивых к фармакотерапии [69]. Многие антигипертензивные препараты, используемые в клинической практике, обладают медленным развитием клинически значимого снижения АД, имеют ограничения из-запобочных действий или снижения качества жизни, что в значительной мереограничивает приверженность к лечению и их клиническое применение.
Длясовременной фармакологии и фармацевтической химии остаются актуальнымипоиск и разработка новых, высокоэффективных гипотензивных лекарственныхпрепаратов длительного действия, обладающих малой токсичностью.Используя интернет - версию компьютерной системы РАSS [39, 84, 267],299мы осуществили предварительный прогноз возможных видов биологическойактивности впервые синтезированных производных пиримидин-2,4(1Н,3Н)дионов. Проведенный прогноз показал, что 3-(тиетан-3-ил)-, 3-(1-оксотиетан3-ил)-6-метилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионы и их С5-аминометилпроизводные,производные ацетогидразидов могут проявлять гипотензивное действие, являясь ингибиторами α-адренорецепторов (Ра-Рi 0,60-0,40) или блокаторами кальциевых каналов N-типа (Ра-Рi 0,32-0,21).Испытания на гипотензивную активность 19 соединений 3-(тиетан-3-ил)(2.33),3-(1-оксотиетан-3-ил)-(2.43),3-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-6-метилпиримидин-2,4(1Н,3Н)-дионов (2.45), их N1-алкил- (2.78, 2.81, 2.89) и С5аминометилпроизводных(2.49,2.62),2-[3-(тиетан-3-ил)пиримидин-1-ил]ацетогидразида (2.194) и его илиденпроизводных (2.197, 2.199-2.201, 2.2172.222) проведены совместно с сотрудниками кафедры фармакологии и биофармации ФУВ ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России под руководствомчлен-корр.
РАМН, д.м.н., проф. Тюренкова И.Н. [119, 121].Эксперименты выполнены на белых нелинейных половозрелых крысахсамках массой 280-320 г 3,5-4-месячного возраста.Оценку гипотензивного действия проводили по методике, являющейсябазисной моделью исследования веществ с гипотензивной активностью [103].Измерение систолического артериального давления (САД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС) у бодрствующих крыс осуществляли с помощью прибора для неинвазивного измерения артериального давления - IITC 29 (IITCLife Science Inc., США). Показатели САД и ЧСС автоматически фиксировались на персональном компьютере, подключенном к прибору, за исходныйуровень принимали значения, зафиксированные до введения исследуемых соединений. Статистическую обработку данных проводили в программеMicrosoft Excel 2007 с использованием парного критерия Стьюдента.В качестве препаратов сравнения использовали селективный блокаторβ1-адренорецепторов - небиволол (небилет, Berlin-Chemie AG, Германия), ингибитор АПФ - лизиноприл (диротон, «Гедеон-Рихтер», Венгрия) и ингибитор300Са2+-каналов - амлодипин (нормодипин, «Гедеон-Рихтер», Венгрия).Скрининг веществ на гипотензивную активность в ряду тиетансодержащих производных пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона проведен на 120 бодрствующих крысах-самках.
Регистрировались показатели САД и ЧСС при введенииисследуемых соединений в хвостовую вену. Было сформировано 20 групп (по6 животных в каждой): № 1 – контрольная группа интактные животные, получавшие внутривенно 50%-ный раствор диметилсульфоксида (ДМСО) в объеме0,3 мл на 100 г веса; №№ 2–20 – опытные группы животных, которым внутривенно (в/в) вводили исследуемые соединения в дозе, составляющей 1/30 от молекулярной массы исследуемых соединений. В качестве растворителя использовали 50%-ный раствор ДМСО. Показатели САД и ЧСС регистрировали через 30, 60 и 90 мин после введения соединений.В результате проведенного скрининга выявлено, что соединения 2.62,2.81, 2.199, 2.200 и 2.222 не влияют на САД; соединения 2.33, 2.78, 2.89, 2.201,2.217, 2.218, 2.219, 2.221 обладают слабо выраженным гипотензивным эффектом, снижают САД в диапазоне от 4,1 до 8,9%.
Наиболее существенно снижают САД соединения 2.43, 2.45, 2.49, 2.194, 2.197 и 2.220 максимально на 90-ймин наблюдения на 15%, 12,2%, 19%, 13,9%, 14,3% и 21,2% соответственно посравнению с исходными показателями. Изменений САД у контрольной группыживотных не наблюдалось.Далее было проведено изучение гипотензивного действия наиболее активных соединений при пероральном введении в дозе в 2 раза превышающейэффективную при в/в введении в сравнении с эталонными препаратами (табл.3.1).
Выявлено, что соединение 2.49 (20,0 мг/кг) снижает САД максимально на10,5% к 6-ому ч, ацетогидразид 2.194 (20,0 мг/кг) - на 6,9% к 8-ому ч, соединение 2.197 (24,0 мг/кг) – на 8,7% к 5-му ч наблюдения относительно исходногоуровня, а к 24 ч показатели САД возвращались к исходным значениям. Соединение 2.45 (15,4 мг/кг) при пероральном введении обладает чуть менее выраженным гипотензивным действием, чем при в/в, САД снижается максимальнона 11% относительно исходного уровня, однако эффект сохранялся продолжи-301тельно, к 24 ч САД оставалось сниженным на 10%.Наиболее выраженная и продолжительная гипотензивная активность припероральном введении отмечалась у 6-метил-3-(1-оксотиетан-3-ил)пиримидин2,4(1Н,3Н)-диона (2.43) (14,2 мг/кг), САД снижалось мягко и продолжительнои к 24 ч показатель оставался сниженным на 13,5% относительно исходныхданных. Nʹ-[1-(4-Бромфенил)этилиден]-2-[6-метил-2,4-диоксо-3-(тиетан-3-ил)1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил]ацетогидразид (2.220) (30,0 мг/кг) такжеобладает выраженным и продолжительным гипотензивным действием, снижение САД под его влиянием происходило мягко и к 8 ч было ниже исходныхзначений на 12,9% (табл.
3.1). В группе, которой вводился препарат сравнениянормодипин в дозе 1,0 мг/кг, САД максимально снижалось на 12,6% через 8 чнаблюдения, практически возвращаясь к исходному уровню через сутки послевведения. У животных, которые получали диротон в дозе 10,0 мг/кг и небилетв дозе 2,0 мг/кг снижение САД, относительно исходных показателей, составило 17,9% и 19,2% через 8 ч и 6,4% и 7,3% через 24 ч после введения соответственно (табл. 3.1).Для изучения зависимости «доза-эффект» и длительности действия соединений 2.43 и 2.220 - лидеров при пероральном введении в сравнении с эталонными препаратами было сформировано 10 групп животных по 6 в каждой:1 группа - контрольная, интактные животные, которым вводили 2% крахмальную слизь (0,2 мл на 100 г веса); 2-4 группы - опытные, получавшие соединение 2.43 в дозе 7,1 мг/кг; 14,2 мг/кг; 28,4 мг/кг соответственно; 5-7 группы опытные, получавшие соединение 2.220 в дозе 15,0 мг/кг; 30,0 мг/кг и 60,0мг/кг соответственно; 8–10 группы - опытные, которым вводили препаратысравнения небилет – 2,0 мг/кг; диротон – 10,0 мг/кг; нормодипин – 1,0 мг/кгсоответственно.
Исследуемые дозы веществ и препараты сравнения перед введением суспензировали в 2% крахмальной слизи. Регистрируемые показателификсировали с интервалом в 1 ч в течение 8 ч и через 24 ч после введения веществ с помощью прибора для неинвазивного измерения артериального давления - IITC 29.302Изучение зависимости «доза-эффект» при пероральном пути введенияпоказало, что соединение 2.43 в дозе 7,1 мг/кг оказывает слабое гипотензивноедействие, максимум которого отмечался на 5 ч наблюдения, САД снижалосьна 5,1% и через 24 ч – на 3,8% относительно исходных значений. С увеличением дозы в два раза (14,2 мг/кг) отмечалось усиление гипотензивного действиясоединения 2.43, начиная с 1 ч эксперимента САД снижалось на 3,8%, к 5 ч –на 9,8%, а к 8 ч наблюдения снижение САД составило 12%. Через 24 ч послевведения САД оставалось сниженным на 13,5%, в то время как у животныхконтрольной группы оно оставалось на исходном уровне. Дальнейшее повышение дозы до 28,4 мг/кг не приводило к увеличению гипотензивного действия исследуемого соединения 2.43, к 8 ч эксперимента САД снижалось на10,6% от исходных значений, через сутки наблюдения – на 8,3% (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
