Диссертация (1139716), страница 43
Текст из файла (страница 43)
Данные соединенияудлиняют латентный период, коррелирующий с антиокислительной активностью крови, и уменьшают светосумму свечения. Соединения 2.33, 2.35, 2.49,2.60, 2.64, 2.139, 2.142, 2.144, 2.160, 2.162, 2.198, 2.235 также значительноуменьшают интенсивность медленной вспышки в тест-системе генерацииАФК.Необходимоотметить,чтобольшинствотиетанилпиримидин-3082,4(1H,3H)-дионов уменьшают и амплитуду быстрой вспышки, которая зависит от скорости окисления ионов Fe+2 и образования в среде АФК. Анализ зависимости «доза-эффект» показал, что данные соединения вызывали дозозависимое угнетение ХЛ.Соединения 2.202, 2.237 не оказывали влияние на процессы СРО, а соединения 2.81, 2.104, 2.134, 2.163 увеличивали ХЛ в модельной системе, отражающей генерацию АФК, проявляя проокислительное действие.Многие антиоксиданты, в том и числе и мексидол, подавляют ХЛ кровии одновременно снижают фагоцитарную активность клеток [146].
Экспрессметод оценки функционального состояния фагоцитарного звена иммунитета(модель фагоцитоза) показал, что добавление соединений 2.49, 2.51, 2.65 вызывало увеличение светосуммы люминол-зависимой ХЛ (ЛЗХЛ) и интенсивности максимальной вспышки по сравнению с уровнем обозначенных параметров интактных клеток крови. Усиление ЛЗХЛ фагоцитирующих клетоксвидетельствует о наличии стимулирующего влияния данных тиетанилпиримидин-2,4(1H,3H)-дионов на выработку фагоцитами АФК, с которыми связанамикробицидность клеток крови.Проведенный анализ зависимости «структура-антиокислительная активность» среди новых производных пиримидин-2,4(1H,3H)-дионов показал, чтотиетанилпиримидин-2,4(1H,3H)-дионы, содержащие метильную (соединение2.33) или аминогруппы (соединение 2.38) в положении 6 пиримидиндионовогоцикла, проявляют примерно одинаковую активность, тогда как наличие в положении 5 гидроксигруппы приводит к значительному увеличению антиокислительных свойств.
Введение алкильных радикалов в положение 1, как и окисление тиетанового цикла до тиетан-1-оксидного, приводит к снижению (соединения 2.77, 2.43) и фактической потере антиокислительной активности (соединение 2.81).В ряду С5-аминометилпроизводных выявлены следующие закономерности: соединения 2.49, 2.55, 2.60, содержащие морфолиновый цикл, активнееаналогов 2.51, 2.57, 2.62, содержащих пиперидиновый цикл; а тиетаны 2.49,3092.51 и тиетан-1,1-диоксиды 2.60, 2.62 активнее тиетан-1-оксидов 2.55, 2.57.Среди тиетан-1,1-диоксидов наибольшую активность проявляет соединение2.64, содержащее N-метилпиперазиновый фрагмент.В ряду N1-ацетилпроизводных тиетанилпиримидин-2,4(1H,3H)-дионовпроанализирована зависимость от строения фрагментов в ацетильной группе истепениокисленияатомасерытиетановогоцикла.N1-(Амино-оксоэтил)производные 2.123, 2.132, 2.139, содержащие в структуре вторичныеамины, проявляют антиокислительную активность, которая наиболее выражена у тиетан-1,1-диоксида 2.139, содержащего пиперидиновый цикл.
Соединение 2.134 с ацетамидным радикалом обладает проокислительным действием.Сравнение эффекта в ряду N1-ацетанилидзамещенных показало, что введение метильной группы в орто- или мета-положения фенильного кольцаприводит к увеличению антиокислительных свойств (соединения 2.144, 2.161,2.162) по сравнению с аналогичными N-фенилацетамидпроизводными, тогдакак наличие метильной группы в пара-положении (соединение 2.163) приводит к появлению проокислительных свойств.Антиокислительная активность N-фенилацетамидпроизводных, содержащих тиетановый (соединение 2.142) и тиетан-1,1-диоксидный циклы (соединение 2.160), на порядок выше аналога, содержащего тиетан-1-оксидныйфрагмент (соединение 2.152).
Аналогичная тенденция проявляется и в ряду Nтолилацетамидпроизводных.Этилацетат 2.104, содержащий фрагмент 6-метил-3-(1,1-диоксотиетан-3ил)пиримидин-1-ила, проявил выраженное проокислительное действие. Замена этоксигруппы в молекуле соединения 2.104 на гидразонный фрагмент приводит к появлению антиокислительной активности, степень выраженности которой определяется структурой илиденсоставляющей. Соединение 2.235, содержащее 4-нитрофенилэтилиденовый фрагмент, активнее аналогов, содержащих3-нитрофенилметилиденовый(соединение2.215),фуран-2-илметилиденовый (соединение 2.216) и фенилэтилиденовый (соединение2.230) фрагменты.310По результатам скринингового изучения антиокислительных свойств новых тиетанпроизводных пиримидин-2,4(1H,3H)-диона в диапазоне концентраций от 5 до 0,05 мг выявлены соединения для углубленного изучения антиокислительной активности: 5-гидрокси-6-метил-3-(тиетан-3-ил)пиримидин2,4(1H,3H)-дион(2.35),6-метил-5-(морфолин-4-илметил)-3-(тиетан-3-ил)пиримидин-2,4(1H,3H)-дион (2.49) (рис.
3.1-3.3) [22, 57].Рисунок 3.1. Запись ХЛ в модельной системе генерации АФК при добавлении0,5 мг соединений 2.35, 2.49.Рисунок 3.2. Запись ХЛ в модельной системе желточных липопротеидов придобавлении 0,5 мг соединений 2.35, 2.49.311Рисунок 3.3. Запись ХЛ в модельной системе фагоцитоза при добавлении 0,5мг соединений 2.35, 2.49.Влияниесоединений5-гидрокси-6-метил-3-(тиетан-3-ил)пиримидин-(2.35),6-метил-5-(морфолин-4-илметил)-3-(тиетан-3-2,4(1H,3H)-дионаил)пиримидин-2,4(1H,3H)-диона (2.49) на процессы СРО in vivo при моделирοвании оксидативного стресса в эксперименте на животных.Изучено влияние соединений 2.35 и 2.49 на поведенческие реакции, показатели функционально-метаболической активности фагоцитов крови, процессы СРО в мозге, печени и плазме крови экспериментальных животных нафоне дозированной физической нагрузки в виде плавательного теста, сопровождающегося оксидативным стрессом [83].Эксперименты выполнены на 50 белых неинбредных крысах массой 200220 г.
Было сформировано 5 групп (по 10 животных в каждой): 1 – контрольная группа интактные животные без физической нагрузки (бФН); 2 - группаживотных получала ежедневно в течение 21 дня дозированную физическуюнагрузку (ФН) в виде плавательного теста по методике [109, 191]; 3-5 - опытные группы животных, которые получали дозированную физическую нагрузкуна фоне введения исследуемых соединений и препарата сравнения оксиметилурацила.
Соединения вводили внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг, сопостави-312мой с терапевтической дозой оксиметилурацила, в виде суспензии в 1 мл 2%ной крахмальной слизи. Контрольные группы животных получали эквиобъемное количество 2%-ной крахмальной слизи. В конце эксперимента животныхдекапитировали с соблюдением правил эвтаназии согласно Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным и правилами проведения работ сэкспериментальными животными и методическими рекомендациями по их выведению из эксперимента и эвтаназии [33]. Статистическую обработку проводили с помощью пакета компьютерных программ "Statistica for Windows(release 5.0)", а оценку достоверности - Statistica v.6.0 (StatSoft), используя tкритерий Стьюдента и непараметрический U-критерий Манна-Уитни [152].Рассчитывали среднее значение 10 измерений (М), ошибку средних величин(±m). Минимальный уровень достоверности верифицировали при р<0,05.Индивидуальные поведенческие реакции животных оценивались в стандартном психофармакологическом тесте «открытое поле» по рассчитанныминтегральным критериями: коэффициенту подвижности (КП), ориентировочно-исследовательской активности (ОИА), эмоциональной тревожности (ЭТ)[83, 104].
Результаты исследования представлены в табл. 3.3.Таблица 3.3Критерии поведенческих реакций на фоне ФН и введения исследуемых соединений на 21-й день эксперимента, (% к контролю)ГруппыКПОИАЭТживотных(М±m)(М±m)(М±m)Контроль (бФН)100,0±7,8100,0±10,8100,0±12,1ФН77,8±12,8*75,6±21,1*138,5±10,9*##ФН+2.35182,0±3,9*153,3±7,1*96,8±2,8*#ФН+2.49189,7±3,5*#139,4±10,2*#94,2±2,7*#ФН+оксиметилурацил128,2±2,8*#111,9±7,882,7±2,7Примечание: * - данные достоверны относительно группы контроля (р<0,05), # - данные достоверны относительно группы животных «ФН» (р<0,05).В группе животных, не получавших исследуемые соединения, послеплавательной физической нагрузки ограничивался «норковый» рефлекс, горизонтальные и вертикальные компоненты спонтанно-двигательной активности,нарушалась ОИА, заметно снижался КП и увеличивалась ЭТ.
В группах жи-313вотных, получавших соединения 2.35 и 2.49, возрастала ОИА, увеличивалисьподвижность и количество заглядываний в норки выше показателей группыживотных, получавших оксиметилурацил, и незначительно снижалась ЭТ.Таким образом, исследуемые соединения, как и препарат сравнения,предохраняют животных от нейроэтологических реакций, вызванных физической нагрузкой.Далее исследовано влияние изучаемых соединений на изменения Fe+2индуцированной ХЛ в гомогенатах мозга и печени экспериментальных животных с использованием экспресс-метода регистрации ХЛ [146].Приготовление гомогенатов органов: навеску ткани отмывали охлажденным фосфатным буфером, измельчали и заливали фосфатным буфером всоотношении 1:5, гомогенизировали в течение 5 мин при 4ºС.
Полученный гомогенат фильтровали через капроновый фильтр, определяли содержание белкапо Лоури и доводили концентрацию до 20 мг/мл. Для регистрации ХЛ отбирали 1 мл полученного гомогената, добавляли 20 мл фосфатного буфера (рН7,45) и 1 мл 50 мМ раствора FeSO4.Исследование ХЛ гомогенатов органов показало, что физическая нагрузка у экспериментальных животных вызывала увеличение интенсивности ХЛ втканях мозга и печени, а введение исследуемых соединений приводило к снижению интенсивности ХЛ по сравнению с интактной группой, но в меньшейстепени, чем при введении оксиметилурацила (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
