Диссертация (1139658), страница 31
Текст из файла (страница 31)
ИФН-, будучипродуктом Тh1-лимфоцитов, ингибирует пролиферацию Тh2-лимфоцитов ииндуцированное IL4 переключение синтеза Ig на IgЕ [34; 51; 165]. Такие182изменения содержания IgЕ мы выявили при ЛТИ. Однако при развитии ТБ мыотметилиповышениесвидетельствующийуровняосинтезанедостаточнойIgE,ипродукцииэтоещеИФН-,одинчтофакт,ведеткформированию хронического воспаления (заболевания). Рядом исследователейустановленапрямаясвязьмеждувозникновениемочаговхроническойбактериальной или грибковой инфекции и гиперпродукцией IgE [14; 115].
Нашиисследования также подтвердили связь между активацией гуморального звенаиммунитета (р≤0,05) и прогрессированием туберкулезной инфекции [36; 38].ИФН-такжерассматриваетсякакважнейшийфакторактивациимакрофагов [46; 142; 213]. Макрофаги вносят существенный вклад в реализациюврожденного иммунитета и в формирование адаптивного иммунитета [144; 446],обеспечивая антимикобактериальную защиту, в том числе через регуляциюсинтеза про- и противовоспалительных цитокинов [205; 321; 328].
Цитокиныпривлекают главным образом нейтрофилы из кровотока и инициируютпровоспалительный ответ, приводящий к поглощению и разрушению МБТ [391].В нашем исследовании отмечено снижение фагоцитарной активности клеток приразвитии ТБ, что косвенно может свидетельствовать о недостаточной продукцииИФН-.Таким образом, в период ЛТИ нами установлена некоторая активацияклеточного ответа, что согласуется с исследованиями последних лет по ЛТИ[276]. При развитии ТБ не было установлено изменений, указывающих наформирование иммунодефицита, хотя многими исследователями отмеченовозникновение заболевания на фоне вторичного иммунодефицита [18; 56; 91; 194,460].Понашемумнению,измененияпоказателейиммуннойзащитыхарктеризовали особенности течения воспалительного процесса при ТБ у детей, втом числе его хронизацию, где ключевым механизмом являлось снижениефункциональной активности клеток, а, в частности, недостаточная выработкаИФН-.183ЕщевработахМ.
М. Авербаха(1973)высказываласьгипотезаосуществовании в лимфоцитах генов, контролирующих активацию иммунныхклеток, синтезирующих медиаторы и влияющих на развитие специфическогопроцесса [38]. В настоящее время исследователи также пытаются установитьгены, вызывающие нарушения на уровне врожденного и адаптивного иммунитета[72; 211; 249; 278; 430; 461], в том числе определить генетические факторы рискаТБ [278]. В числе данных генов активно изучают ген IFNG, который связан спродукцией цитокина ИФН- [9; 92; 97; 369; 385; 430].
Идентификациягенетических факторов риска ТБ [249; 430] позволит ближе подойти красшифровке основ патогенеза данного инфекционного заболевания и объяснить,почему при наличии одних и тех же факторах риска ТБ у одних детей развиваетсязаболевание, а у других нет.Поэтому следующей задачей нашей работы явилась оценка значимостигенетических факторов при развитии туберкулезной инфекции у детей. Учитывая,что по результатам нашего исследования ИФН- является одним из ключевыхцитокинов иммунного ответа, связанного с развитием туберкулезной инфекции,мы также посчитали необходимым обратить внимание на ген, регулирующий этотцитокин.
В настоящее время известно несколько полиморфных вариантов генаIFNG, связанных с ТБ [9; 92; 97; 369; 385]. Одним из перспективных для изученияпри развитии ТБ рассматривался полиморфный вариант гена IFNG (T-1488C), таккак наличие данной мутации (однонуклеотидной замене цитозина на тимин)может сказываться на экспрессии гена IFNG [72] и синтезе белка.
Необходимоподчеркнуть, что публикаций по исследованию данного полиморфизма у детей сТБ или ЛТИ в доступных источниках не найдено. Оценивая функциональнуюзначимость полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) в механизмахиммунологической защиты против микобактерий и для определения связи с ТБ удетей, нами впервые было установлено, что маркером высокого риска развитияТБ (ОШ=4,667, 95% ДИ 1,236-17,62; р=0,008), как при первичном (47,5%), так ивторичном (65%) по генезу варианту заболевания и его неблагоприятного теченияявлялся гетерозиготный генотип полиморфизма T-1488C.
Вероятный риск184прогрессирования заболевания при данном варианте генотипа установлен науровне 74,07% (95% ДИ от 63,54 до 82,43%).Нами была установлена ассоциация значимого для ТБ гетерозиготногогенотипа полиморфного варианта T-1488C гена IFNG с особенностями теченияспецифического процесса, преимущественно правостороннего (ОШ 2,294)поражения легких, с объемом от двух (ОШ 1,424) и более (ОШ 1,211) сегментов, сформированием инфильтратов (ОШ 1,737), с признаками деструкции (ОШ 1,458)легочной ткани и диссеминации (ОШ 1,75), а также плеврита (ОШ 1,9) ибактериовыделением МБТ (ОШ 1,458).
Установлена связь гетерозиготногогенотипа полиморфного варианта T-1488C гена IFNG с такими клиническимипроявлениямиТБкакпараспецифическиереакции(ОШ2,059)спреимущественным развитием периферической лимфаденопатии (ОШ 2,4),гепатоспленомегалия (ОШ 5,5), дефицит массы тела (ОШ 1,429), анемия (ОШ2,059) и повышение уровня СОЭ (ОШ 3,4).На разных стадиях туберкулезной инфекции выявлено преобладаниегетерозиготного генотипа изучаемого полиморфного варианта гена IFNG средидетей, имеющих различные факторы риска: отягощенный анамнез по ТБ (F30,865;р=0,000), низкую массу тела при рождении (до 2500 г) (F92,515; р=0,000),искусственное вскармливание (F8,31; р=0,000001).
Мы также определиливысокую вероятность (59,38%; 95% ДИ от 42,23 до 74,62%) формирования низкойрезультативности вакцинации БЦЖ (БЦЖ-М) (F4,946; р=0,004) у детей сгетерозиготным генотипом изучаемого полиморфизма. В свою очередь низкаярезультативность вакцинации у детей может быть косвенным признаком,свидетельствующим о гетерозиготном генотипе полиморфного варианта T-1488Cгена IFNG.При развитии ТБ ведущими факторами в реализации высокого риска пригетерозиготном генотипе полиморфного варианта T-1488C гена IFNG являлисьнизкий достаток (F31,994; р=0,0000), курение в семье (F5,193; р=0,003) иотсутствие грудного вскармливания (F6,965; р=0,0004).
Данные факторы рискаможноотнестиквнешнимфакторам,влияющимнаэпигенетические185модификации генома. В настоящее время эпигенетическим процессам придаютбольшое значение [224; 310], так как, не затрагивая содержание наследственнойинформации, они играют большую роль в экспрессии генов [224; 265; 310].Считается, что генетические и эпигенетические модификации, в том числе приразвитии ТБ, могут зависеть от экологических и диетических факторов [333; 364].В частности, факторы питания (дефицит метилата фолиевой кислоты, холина иметионина) [193; 209; 242; 333; 374; 378], химические вещества, в том числетабачный дым [155; 232; 293; 377; 420; 425; 444], неорганические загрязнениямогут изменить эпигеном и способствовать развитию патологии [139; 265; 294;305; 334; 364; 370; 374; 413; 414; 450].
В настоящее время именноэпигенетическиепроцессыопределяюткомплексныеотношениямеждугенетикой, окружающей средой, образом жизни и заболеваниями [223].Полученные нами результаты по оценке значимости полиморфизма гена IFNGдля туберкулезной инфекции позволили установить, что гетерозиготный генотипполиморфного варианта T-1488C гена IFNG определялся и у части детей с ЛТИ(40,3%), поэтому отсутствие факторов риска заболевания, влияющих наэпигенетические процессы, могут объяснить факт отсутствия ТБ у данной группыпациентов.Учитывая, что в наших исследованиях был установлен недостаточныйзащитный уровень ИФН- при развитии ТБ у детей, мы предположиливозможный вклад в патогенез заболевания однонуклеотидной замены гена IFNG.Тем более, что ранее было установлено [72] влияние полиморфизма T-1488C генаIFNG на уровень экспрессии гена IFNG, но не было изучено влияние на уровеньпродукции соответствующего цитокина (при индукции антигенами МБТ).
Сцелью выявления связи генотипов полиморфного варианта Т-1488C гена IFNG суровнем продукции ИФН- после стимуляции специфическими антигенами(CFP32B, Rv2660c, ESAT6, 85a, ESAT6-CFP10) было проведено дополнительноеисследование. В результате нами впервые было определено, что полиморфизмгена IFNG (Т-1488C) ассоциирован с различной выраженностью иммунногоответа против отдельных МБТ-антигенов. Так, при формировании заболевания у186детей гетерозиготный генотип был связан с низким уровнем индуцированногоИФН-, что обусловливало неблагоприятное течение ТБ. Наличие гомозиготногогенотипапоаллелюТполиморфноговариантагенаIFNG(T-1488C)ассоциировался с высоким уровнем продукции ИФН- после специфическойстимуляции, что подтверждало протективную роль генотипа ТТ.Таким образом, можно утверждать, что выделен еще один генетическиймаркер (фактор риска – полиморфизм -1488C/T гена IFNG) развития ипрогрессирования ТБ у детей с ЛТИ, реализующийся при наличии социальных имедико-биологических факторов риска, в первую очередь таких как курение всемье, низкий достаток в семье и отсутствие грудного вскармливания.Учитывая роль хемотаксического для макрофагов белка 1 (МСР1) [152; 405]вразвитиивоспаления,втомчислевформированиихронического(гранулематозного) воспаления [148; 211] и иммунного ответа, опосредованногоTh2 типа [133; 296; 327; 339; 395; 398], мы посчитали необходимым оценить рольгенаМСР1вдополнительногопрогрессированиигенетическоготуберкулезногофакторариска.процессаДля этоговкачествебылвыбранполиморфный вариант С-2508Т гена МСР1, с учетом того, что ранее былипопытки оценить роль гена МСР1 и его полиморфизм в восприимчивости к ТБ[72; 461].
Так, мы установили, что гетерозиготный генотип изучаемогополиморфизма гена МСР1 связан с прогрессированием заболевания, при этомвероятность его прогрессирования составила 76,54% (95% ДИ от 66,17 до84,51%).Полученные нами результаты позволили говорить о ТБ как о гетерогенномхроническом заболевании, тем самым подчеркивая участие многих, в том числегенетических факторов в его развитии (рисунок 8.1).187Полиморфизм гена гамма-интерферона (IFNG T-1488C)Гомозиготный генотип (ТТ)Гетерозиготный генотип (ТС)M.
tuberculosisМедико-биологическиефакторы рискаСоциальные факторырискаАктивация клеточногоиммунитетаДисбаланс клеточногоиммунитетаВысокий уровеньиндуцированного ИФН-γ (наантигены ранней стадиитуберкулезной инфекции)Снижение уровняиндуцированного ИФН-γ (наантигены ранней стадиитуберкулезной инфекции)положительная реакцияна ЕSAT6-CFP10ЛТИТБРисунок 8.1 – Схема патогенеза прогрессирования туберкулезной инфекцииИзвестно,чтодовозникновениязаболеваниядлительноевремятуберкулезная инфекция протекает бессимптомно и ее можно выявить только спомощью иммунологического анализа [279; 349; 430]. При этом в раннихисследованияхинфекции,указывалоськотороепростирающийсяотможетнаклиническоерассматриватьсястерилизацииразнообразиекакиммунитета,туберкулезнойнепрерывныйсубклиническогопроцесс,течения188заболевания, до активного процесса [254; 291; 380; 440].
Основным недостатком внастоящее время является отсутствие золотого стандарта диагностики и прогнозатечения туберкулезной инфекции [179], т.к. ни один из иммунологическихдиагностических тестов не обладает достаточной чувствительностью илиспецифичностью для определения "места на спектре" туберкулезной инфекции[315]. Поэтому приоритетной задачей исследований последнего времени являетсяпоиск специфических биомаркеров для оценки всех этапов развития ТБ ивозможности их использования в диагностических тестах [254; 316; 355; 467; 477;484]. Мы оценили значимость туберкулезных антигенов (как хорошо изученных,так и недавно идентифицированных) на разных стадиях развития туберкулезнойинфекции у детей.Среди ранее изученных специфических белков МБТ в настоящее время длядальнейшего исследования представляет интерес ESAT6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
