Диссертация (1139554), страница 38
Текст из файла (страница 38)
Однако мы наблюдали изменения в киллерном звенелимфоцитов. Относительное содержание NKT-клеток после удвоения в первыймесяц АИТ сохранилось на высоком уровне на протяжении 3-х месяцев и снизилось к концу периода наблюдения (рис. 58). Количество NK-клеток планомерно уменьшалось и снизилось на 40% за 6 месяцев. Интересные изменениябыли выявлены в экспрессии маркеров активации. После снижения численности субпопуляции CD25+ лимфоцитов в первый месяц выявлено её увеличениечерез 3 месяца после АИТ.
Значимых изменений фенотипа лимфоцитов, несущих антигены HLA-DR и CD69, не было обнаружено. Хотя выявлены пациенты202с пониженным и повышенным уровнем экспрессии данных молекул на лимфоцитах. Параллельно с этим увеличилось число CD38+ лимфоцитов и CD38+ Тклеток. Молекула CD38 представлена на клеточной поверхности в период ихпролиферации и дифференцировки.
Вероятно, именно в эти сроки также увеличилась функциональная активность лимфоцитов, так как клинический ответ налечение не был отмечен в более раннем периоде через 2-3 месяца после АИТ.Значимое уменьшение NKG2D+ лимфоцитов и NKG2D +NK-клеток в циркуляции также было обнаружено в этот промежуток времени, когда наблюдалисьосновные результаты ответа на лечение.
Так как именно NK-клетки в 80% случаях экспрессируют активационный рецептор NKG2D, можно предположить,что эти эффекторные клетки в данном случае перераспределились к органаммишеням.225*количество клеток (%)200**175150*1125*1100*37550***25Т-В-кл.кл.ThTrCD eg25+CTNK LTH -клLA .CD -D3+ RN DRK +G2D+NNK KG кл2D .+NCD KCD 383+ +38CD +CD 6969 ++NCD KCD 95+95+T0до1 мес.2-3 мес.4-6 мес.Рисунок 58. Динамические изменения количества лимфоцитов периферическойкрови у больных с ОЖКТ до АИТ (100%) и через 1, 2-3 и 4-6 месяцев.* различия показателей статистически достоверны от уровня перед лечением средипациентов той же нозологической группы;1различия показателей статистически достоверны от уровня 1 месяцпосле начала АИТ;3различия показателей статистически достоверны от уровня 2-3 месяца посленачала АИТ.203Показано, что у больных с ПБ в кровяном русле резко повышено содержание NK-клеток до 38% и Treg до 18%, а экспрессия NKG2D на NK-клетках, CD38и/или CD69 снижена, что свидетельствует о неблагоприятном прогнозе.
Экспрессия CD95 оставалась высокой, но имела некоторую тенденцию к снижению. Убольных с ПБ наблюдался повышенный уровень экспрессии CD95, что отражаетусиление процесса апоптоза у лимфоцитов в процессе развития опухоли. Такжеповышенная экспрессия CD95 характеризует завершение дифференцировкилимфоцитов через активационный апоптоз [56].В работе была проанализирована динамика изменения субпопуляционного состава лимфоцитов и экспрессии маркеров активации у трех больных сдиссеминированными формами рака прямой кишки и различным исходом заболевания (СБ и ПБ) после АИТ.Клинический случай 8. Больному Г.
1970 г.р. с диагнозом рак прямойкишки T2N2M0 на фоне ХТ была проведена АИТ активированными лимфоцитами на протяжении 6 недель в количестве 35 млн. До начала АИТ наблюдалось относительное повышение содержания лимфоцитов (45%) и субпопуляции Тreg, отмечено снижение CD3+ HLA-DR+лимфоцитов до 3% и отношенияCD4/CD8. Через месяц после проведения АИТ нормализовалось содержаниелимфоцитов в крови, снизилось относительное содержание В-клеток до 2%,за счет повышения количества Т-клеток до 82% и CD3+ CD8+ до 40%. Нормализовалось количество CD3+ HLA-DR+ и увеличилось до 12% содержание антигена CD25+ на всех лимфоцитах.
Экспрессия маркеров активации CD69+на всех лимфоцитах через месяц после АИТ снизилась с 23% до 12%, а на NKклетках с 8% до 4%. Наблюдалась тенденция к увеличению CD95+ лимфоцитов с 16% до 53% и CD3+ CD95+ с 15% до 45%, экспрессия остальных изучаемых маркеров активации CD38 и NKG2D практически не изменилась. Через4 месяца после АИТ клиническая ремиссия основного заболевания сочеталасьс уменьшением в кровяном русле NK-клеток в 2 раза до 9%, CD3+ HLA-DR+ в5 раз с 16% до 3%, снижением NKG2D+ лимфоцитов в 2 раза с 51% до 23%, аNKG2D+ NK-клеток в 7 раз с 14% до 2%, CD69+ NK-клеток в 2,7 раза с 8% до2043%.
Увеличение через месяц после АИТ количества CD8+ Т-лимфоцитов до40% нормализовалось и снизилось до 29%. Данные изменения, возможно, связаны с перераспределением цитотоксических и активированных лимфоцитовв организме. Однако незначительно повысилось в кровяном русле содержаниеCD38+ лимфоцитов с 26% до 41%, за счет субпопуляции CD38+ Т-клеток с10% до 25% (в 2,5 раза), что, может быть, связано с пролиферативной активностью циркулирующих лимфоцитов в ответ на терапевтическое воздействие АЦЛ и запуск активационных каскадов за счет усиления цитокинопродукции.Клинический случай 9. Больной Ч. 1960 г.р. с диагнозом рак прямойкишки с метастазами в печень T4N2M1 после комплексного лечения между курсами ХТ была проведена АИТ АЦЛ на протяжении 3 месяцев в количестве 30млн. и бесклеточным продуктом 23 введения по 1,5 мл.
До АИТ количество В-,Т-, Тh и CTL было в пределах нормы, количество Тreg было повышено до 14%,NK-клеток до 26%, CD25+ лимфоцитов до 17%, процент HLA-DR+ Т-лимфоцитов снижен до 3%. Положительная динамика в клинической картине наблюдалась у больной через 4 месяца после начала АИТ и проявилась стабилизациейпроцесса и незначительной лимфоаденопатией, которая сохранялась на протяжении последующих 6 месяцев. В иммунограмме через 2 месяца от началаАИТ появился лимфоцитоз, который также сохранялся.
Отмечена нормализация содержания в крови Тreg, CD25+ и CD3+ HLA-DR+ лимфоцитов, повышениеэкспрессии маркеров поздней активации HLA-DR+ на лимфоцитах с 12% до26% и некоторое снижение NKG2D+ лимфоцитов с 50% до 40%. Количестволимфоцитов с фенотипом NKG2D+ CD16+, CD3+ CD38+, CD38+, CD69+ не изменилось. Доля CD69+ NK-клеток снизилась через 3 месяца после АИТ с 13% до9% и снова повысилась до 18% через 8 месяцев.
По данным УЗИ и КТ через 6месяцев от начала АИТ отмечена лимфаденопатия в подмышечных впадинахи забрюшинном пространстве, что расценено как положительная динамика,дополнительных очаговых изменений в печени не выявлено. Гистологически205подтвержден реактивный лимфаденит на фоне АИТ. На момент анализа через год после окончания АИТ наблюдалась стойкая ремиссия.Клинический случай 10. Больной Ф. 1959 г.р.
с диагнозом карциномапрямой кишки Т3N1M1. Пациенту было проведено 70 курсов ХТ. С декабря 2012года в течение 3,5 месяцев было проведено 3 курса сопроводительной терапииАЦЛ в количестве 110 млн. и клеточным продуктом внутрикожно паравертебрально в 2-4 точки.
Первый курс включал введение ЛАК-клеток в количестве 41 млн и бесклеточного продукта по 1,5 мл 2 раза в неделю 20 раз.До проведения АИТ в периферической крови пациента было сниженочисло В-клеток и повышено количество Т-лимфоцитов, за счет популяцииCTL. В связи с этим соотношение CD4/CD8 было снижено. Количество NKклеток и HLA-DR+ Т-клеток находилось на нижней границе нормы, доля лимфоцитов экспрессирующих HLA-DR также была снижена до 5% (рис. 59).10090число клеток (%)8070605040302010Ткл.ТхCTLТCD re4/ gCD8NKTNKG NK2D+N NKKCD G23+ DDH R+LA-DRCD25CDCD 3838+TCCD D69 69+NK45RO4545 RARORA0до АИТчерез 2,5 месяцаРисунок 59. График изменения показателей субпопуляционного состава лимфоцитови маркеров активации до и через 2,5 месяца от начала адоптивной иммунотерапии убольного Ф.Экспрессия активирующего рецептора NKG2D на всех лимфоцитах составила 47%, а на NK-клетках – 5%.
Поверхностная экспрессия ранних(CD38, CD69) маркеров активации на всех лимфоцитах составляла 16% и 8%соответственно, на CD38 +Т-лимфоцитах– 9%, а на CD69+ NK-клетках – 2%.Экспрессия CD25+ на всех лимфоцитах составляла 4%.206Через месяц от начала АИТ отмечено увеличение экспрессии маркеровактивации на лимфоцитах, которая повышалась на протяжении 2-х месяцев.Через 10 недель от начала проведения АИТ в периферической крови пациентанормализовалось количество Т-лимфоцитов, NKТ- и NK-клеток. Было отмечено увеличение поверхностной экспрессии ранних маркеров активации(CD38, CD69) на всех лимфоцитах до 41% и 23% соответственно, на CD38+Т-лимфоцитах до 25%, а на CD69+ NK-клетках до 12% (рис.
54). Поверхностная экспрессия поздних маркеров активации на всех лимфоцитах (HLA-DR,CD25) увеличилась до 34% и до 11% соответственно, а на HLA-DR+ Т-лимфоцитах до 24%. Почти в два раза повысилось число NK-клеток. Остальные субпопуляции лимфоцитов оставались на прежнем уровне. Несколько снизилоськоличество зрелых форм лимфоцитов (CD45+RO+) и сохранилось большоечисло юных форм (CD45+RA+). Данные изменения сохранялись в течение 4-хмесяцев. Однако проведение УЗ исследования не выявило наличия реактивноизмененных лимфоузлов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
