Диссертация (1139554), страница 37
Текст из файла (страница 37)
Дополнительное образование конвекса правой теменной доли без очаговой гиперактивности РФП. Верхне-шейная лимфаденопатия с диффузно повышенной активностью РФП - реактивного характера. Возможно связанная с влияниемАИТ. Диффузная активность РФП в кардио-фундальном отделе желудка –неспецифическая. Диффузные изменения паренхимы печени.Четвертый курс АИТ был проведен через 2 недели после третьего с января 2017 г. (18 введений), пятый курс следовал сразу за четвертым с июня2017 г. и проводился непрерывно в режиме один раз в неделю.По данным МРТ брюшной полости в октябре 2017 г.
– гепатомегалия,диффузные изменения паренхимы печени и поджелудочной железы, парапельвикальные кисты почек. Пациент наблюдается в Центре на протяжении 24 мес.Проведение 5 курсов как в монорежиме, так и сопроводительной АИТ АЦЛ ибесклеточным продуктом позволил достичь регресса метастатических образований и стабилизации болезни.196Лучевые методы диагностики позволили зафиксировать результатыАИТ больных меланомой с распространёнными стадиями, ранее подвергавшихся иммуносупрессивной противоопухолевой терапии, что являетсянаглядным доказательством эффективности метода АИТ.Можно заключить, что АИТ активированными аутологичными лимфоцитами является безопасным методом лечения, который позволяет уменьшитьколичество побочных эффектов ХТ. Одним из факторов, который характеризует ответ на лечение с помощью АИТ является наличие местной кожной реакции на введение биопродукта.
Наличие кожной реакции может явиться одним из критериев отбора пациентов в исследование.Оценка статуса ECOG у больных показала уменьшение средних показателей у всех пациентов, которые значимо снизились после лечения, что объективно характеризует улучшение качества жизни больных. Данные результатыи отдельные случаи объективного ответа на включение АИТ в схему леченияонкологических больных позволяют обосновать дальнейшие исследование пооценке эффективности данного вида клеточной иммунотерапии в прямом контролируемом исследовании.197Глава VI. МОНИТОРИНГ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУНИТЕТА УОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ НА ЭТАПАХ АДОПТИВНОЙИММУНОТЕРАПИИНа данном этапе работы нами была предпринята попытка охарактеризовать взаимосвязь между исходным состоянием клеточного и гуморального звеньев иммунитета у онкологических больных различных нозологических группдо начала и в процессе проводимой АИТ.
Для этого мы объединили больных сопухолями ЖКТ в одну группу (n=21) (13 больных КРР, 4 больных раком поджелудочной железы (РПЖ), 2 больных раком желудка (РЖ) и 2 больных ракомпищевода (РП)) так как данные нозологии имеют сходные изменения в иммунологических показателях, как нами было показано ранее [2, 7]. Вторую группу составили больные меланомой (n=51).
Данные нозологии интересны с точки зренияиммунного ответа и чувствительности к АИТ.Осуществлен мониторинг субпопуляционного состава лимфоцитов крови,уровня цитокинов и стресс-индуцированных молекул MICA в сыворотке кровина этапах лечения. Данные исследования проведены в сроки через 1 месяц отначала АИТ, 2-3 месяца и 4-6 месяцев. Для больных, у которых период наблюдения превышал 6 месяцев, дополнительные иммунологические обследованиябыли проведены через 9-12 месяцев от начала АИТ.6.1.
Изменение фенотипа лимфоцитов у больных после первогокурса АИТПервоначально был проведен анализ фенотипической картины В-, Т-, NKTи NK-лимфоцитов и оценены маркеры активации (HLA-DR, CD38, CD69,NKG2D, CD25, CD95) у больных двух основных групп через месяц от началаАИТ. Было показано, что у всех больных с ОЖКТ не изменилось абсолютное иотносительное содержание основных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, которыенаходились в пределах референсных значений (рис. 56). Хотя наблюдалось некоторое снижение соотношения CD4/CD8. Данный факт указывает на то, что198оценки фенотипа основных популяций лимфоцитов недостаточно для мониторинга состояния клеточного звена иммунитета у онкологических больных на эта-9080706050403020100****Вкл.Ткл.ThTreCD g25+CTNK LH T-кLA л.CD DR3+ +DN R+KG2D+NNKG K-к2D л.+NCD K3CD 8+38+CD C T69 D69+N +K-кCD л.9CD 5+95+Тколичество клеток (%)пах лечения.дочерез 1 мес.Рисунок 56.
Фенотипическая картина лимфоцитов и маркеров активации у больныхс ОЖКТ до и через месяц после АИТ.*достоверно значимые отличия показателей до и через 1 месяц после АИТ (p<0,05).Доля NK-клеток снизилась в среднем с 23,8% до 16,6% (p<0,05). Данныйфакт возможно связан с перераспределением NK-клеток в организме больногои выходом из кровотока в органы-мишени [79]. Причем у пациентов со сниженным содержанием NK-клеток наблюдалась тенденция к повышению их количества, а у пациентов с высоким уровнем NK-клеток к снижению. Было замечено, что на фоне АИТ в первый месяц в два раза возросло число NKTклеток (p<0,001).
При оценке экспрессии маркеров активации на лимфоцитахбыла выявлена тенденция к увеличению доли активированных Т-лимфоцитовпо средству экспрессии HLA-DR, CD38 и CD95 антигенов. Количество CD95+лимфоцитов в среднем увеличилось на 14,2%, а CD95+CD3+ на 11,8%(p<0,005). С другой стороны, после АИТ наблюдалось незначительное снижение содержания в кровяном русле CD25+ лимфоцитов c 13% до 10,6% и активированных NК-клеток (NKG2D+CD16+) с 19,8% до 13,6% (рис.
56).Таким образом, у больных с ОЖКТ после одного курса АИТ основныеизменения обнаружены в численности субпопуляций клеток киллеров. Наблюдается нормализация содержания NK-клеток и снижение их активированной199субпопуляции, а также увеличение NKT-клеток и активированных Т-клеток.Это явление, возможно, связано с более ранней миграцией активированных NKклеток из циркуляции и появлением в кровяном русле активированных Т-лимфоцитов. Учитывая тот факт, что большинство больных из данной группыимеют неблагоприятный прогноз и III-IV стадию заболевания с наличием метастазов у 15 (71%) человек из 21, данные изменения в клеточном звене иммунитета указывают на системный эффект АИТ.У всех больных меланомой АИТ проводилась после основного лечения.Первый курс АИТ проходил как сопроводительный совместно с дистанционнойЛТ у 12 пациентов, а с ХТ у 30 человек.
В результате этого у большинства больных исходно наблюдалась лимфопения, за счет миелотоксического воздействияхимиопрепаратов, что привело к снижению абсолютного содержания лимфоцитов крови, В- и Т-лимфоцитов, Тh, NKT-клеток, NKG2D+- и CD38+-лимфоцитов(р<0,05). Появилась некоторая тенденция в уменьшении доли NK-клеток иNKG2D+лимфоцитов, CD69+ и CD95+ лимфоцитов, но различия не были значи-доCD95+ТCD95+CD69+NKCD69+CD3+38+CD38+NKG2D+NKNK-кл.*NKG2D+HLA-DrNKT-кл.CTLCD25+TregThТ-кл.*CD3+DR9080706050403020100В-кл.количество клеток (%)мыми (рис. 57).через 1 мес.Рисунок 57. Фенотипическая картина лимфоцитов и маркеров активации у больныхмеланомой до и через месяц после АИТ.* достоверно значимые изменения показателей через месяц после АИТ (p<0,05).Положительная динамика наблюдалась в увеличении относительногосодержания CD25+лимфоцитов с 13,6% до 16,4%, возможно за счет Treg, и значимое увеличение экспрессии маркера поздней активации HLA-DR на всех200лимфоцитах и на Т-клетках (р<0,05).
Таким образом, даже один курс АИТ приводит к незначительному изменению иммунофенотипа лимфоцитов и отражается в основном на активации Т-лимфоцитов.При сравнительном анализе результатов фенотипирования МНК у больных с ОЖКТ и меланомой после первого курса АИТ выявлены отличительныеособенности в субпопуляционном составе лимфоцитов (таблица 25). Послепервого курса АИТ у больных меланомой по сравнению с больными ОЖКТповышено содержание Th и Treg (p<0,05).Таблица 25Фенотип лимфоцитов у больных меланомой и ОЖКТ через месяцпосле АИТКоличество клеток ± SD, %Фенотип лимфоцитовмеланома,ОЖКТ, n=21n=51Лимфоциты (CD45)33,4±12,331,0±9,4В-лимфоциты (CD20)7,1±4,27,5±5,4Т-лимфоциты (CD3)72,7±9,770,5±11,9++аТ хелперы (CD4 CD3 )45,2±8,639,2±9,9+brightаTreg (CD4 CD25)12,6±7,67,8±3,9++CTL (CD3 CD8 )28,5±8,129,2±9,6+++NKT-клетки (CD16 CD56 CD3 )3,8±3,84,3±2,5*++NK-клетки (CD16 CD56 CD3 )15,6±8,116,6±9,5*Активированные лимфоциты (HLA-DR)22,2±6,7*19,5±9,4+HLA-DR Т-лимфоциты11,9±5,3*12,9±7,7аАльфа цепь рецептора IL-2 (CD25)16,4±9,910,6±6,1CD314 (NKG2D)40,5±10,747,2±8,4аNKG2D+NK-клетки13,5±9,413,6±10,5CD3839,2±16,034,0±12,8+аCD38 Т-клетки20,4±11,114,0±5,2CD6915,7±9,320,4±10,9+CD69 NK-клетки6,6±4,19,8±7,4аCD95 (Fas/APO-1)48,7±12,860,0±20,8*,аCD95+Т-клетки40,1±7,948,3±14,4*,а* различия показателей статистически достоверны относительно значения перед лечениемсреди пациентов той же нозологической группы (р<0,05);азначимое увеличение показателя по сравнению с другой нозологической группой (р<0,05).Лимфоциты экспрессирующие маркеры активации CD25 и CD38 преобладают в группе больных меланомой, а NKG2D+, CD69+ и CD95+ лимфоциты201преобладают у больных с ОЖКТ.
Интересно, что экспрессия активирующегорецептора NKG2D на NK-клетках не отличалась у больных двух групп, хотявыявлено значимое увеличение экспрессии NKG2D на всех лимфоцитах убольных с ОЖКТ, что связано с преимущественной активацией Т-клеток(p<0,05).Полученные результаты поддерживают мнение о том, что один курс сопроводительной АИТ обладает незначительным иммуномодулирующим эффектом. Введение относительно небольшого числа аутологичных, активированных in vitro лимфоцитов, в нашем исследовании, выявило положительнуюдинамику в изменениях показателей экспрессии антигенов HLA-DR у больныхмеланомой и CD95 у больных с ОЖКТ (p<0,05). Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что один курс АИТ влияет на разные группы клетоку пациентов двух различных нозологий.6.2. Мониторинг субпопуляционного состава лимфоцитов у больных с ОЖКТ на этапах АИТПосле оценки изменений в субпопуляционном составе лимфоцитов убольных с ОЖКТ после первого курса АИТ был проведен анализ результатовфенотипирования лимфоцитов в динамике на протяжении 6 месяцев.У обследованных пациентов на протяжении всего периода наблюденияабсолютное содержание основных популяций лимфоцитов находилось практически на одном уровне.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
