Диссертация (1139554), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Возможно с этими методологическими подходами и особенностями используемых анти-MICA антител, обусловленными одно- или мультиэпитопным связыванием были выявлены различия в концентрации белка MICA. Однако при использовании обоихнаборах показатели в контрольной группе были в несколько раз ниже, чем вгруппе сравнения, что подтверждает правильность полученных результатов.Следует отметить, что бесспорным преимуществом является использованиеготового набора реагентов, где все компоненты изготовлены одной фирмойпроизводителем Abcam.
Также более высокие значения показателей удобнеепри оценке динамических изменений концентрации sMICA. Возможно, выявленные различия также связаны с использованием различных рекомбинантных форм белков MICA, о которых не говорят фирмы производители, а такжеобнаружением различных аллельных форм стресс-индуцированных молекул,которых к настоящему времени определено около 80 разновидностей.В зависимости от уровня sMICA все больные меланомой, а также КРРбыли поделены на 3 подгруппы каждая: I группа с низким уровнем sMICA (<1500122пг/мл) ниже двух средних контрольных значений, II группа со средним sMICA(от 1500-4000 пг/мл) равным 2-4 контрольным значениям и III группа с высокимсодержанием sMICA >4000 пг/мл выше 4-х контрольных значений. У больныхмеланомой I и II группу составили по 15 (34,9%) пациентов, а III группу 12(30,2%) больных (таблица 18).
Было выявлено, что у больных меланомой IIIгруппы повышено количество NK-клеток и экспрессия рецептора NKG2D наNK-клетках (таблица 18), по сравнению с контрольной группой (11,6±2,9% и9,5±3,1%, соответственно) (р<0,05), что подтверждает ранее полученные данныеи связано с активацией NK-клеток у больных с высоким уровнем sMICA. Однакообратная тенденция наблюдается с экспрессией NKG2D на всех лимфоцитах упациентов III группы. Снижение происходит за счет популяции Т-лимфоцитов.Именно в этой группе больных прослеживалось наибольшее число случаев (75%)прогрессирования основного заболевания по сравнению с I группой (33,3%) и IIгруппой (40%).
Таким образом, повышенный уровень молекул sMICA можетсвидетельствовать о распространенности заболевания, что было выявлено ранее.Таблица 18Субпопуляционный состав лимфоцитов в зависимости от уровня MICAв сыворотке крови больных меланомойПоказатели, %NK-клеткиNKG2D+NK-клеткиNKG2D+лимфоцитыTregCD95+лимфоцитыCD38+лимфоцитыCD25+лимфоцитыГруппы больных меланомой по уровню sMICAI группаII группаIII группаn=15n=15n=1217,6±5,515,8±8,419,2±11,312,5±4,913,0±9,114,7±11,440,7±11,745,3±12,938,6±12,72-39,9±7,09,5±7,412,4±5,354,6±28,047,3±12,762,4±20,62-338,4±13,644,7±18,043,9±19,012,4±9,513,1±9,415,7±7,2– цифрами отмечены статистически достоверные различия показателей между соответствующими группами больных (р<0,05).Также отмечено, что у большинства больных меланомой повышено содержание Treg в периферической крови (таблица 18).
Наименьшее число Treg выяв-123лено у II группы больных меланомой с промежуточным уровнем sMICA, у которых также определялось минимальное количество IL-10, что, возможно, связанос ограничением его продукции Тreg. Следует отметить, что у больных меланомойс увеличением в сыворотке крови MICA несколько снижается концентрацияTNF-a и IFN-a.
Хотя различия не были значимыми. Также при увеличенииуровня sMICA отмечается повышение экспрессии Fas на лимфоцитах, что свидетельствует о их готовности к апоптозу.У больных с КРР меньшая часть пациентов составила I (с низкой концентрацией MICA) группу – 15 человек (28,8%). Больных с промежуточнымуровнем sMICA было 21 (40,4%), а III (с высокой концентрацией) группу составили оставшиеся 16 пациентов (30,8%).Значимых изменений экспрессии NKG2D на NK-клетках в разных группах больных с КРР выявлено не было (таблица 19).Таблица 19Субпопуляционный состав лимфоцитов в зависимости от уровня MICAв сыворотке крови больных КРРПоказатели, %NK-клеткиNKG2D +NK-клеткиNKG2D +лимфоцитыTregCD95+лимфоцитыCD38+лимфоцитыCD25+лимфоцитыГруппы больных КРР по уровню sMICAI группаII группаIII группаn=15n=21n=1625,2±12,8*22,4±7,4*21,7±9,521,9±10,9*19,1±6,5*19,6±8,935,3±15,545,5±12,648,0±10,8*,1-310,7±1,57,9±3,412,7±2,835,3±11,8*,1-336,2±14,5*63,0±11,42-321,0±2,8*,1-324,4±9,5*41,7±11,02-312,0±2,01-311,1±6,417,2±4,12-3* различия показателей статистически достоверны относительно группы больных меланомой (р<0,05).– цифрами отмечены статистически достоверные различия показателей между соответствующими группами больных.Однако показано, что в I и II группе пациентов этот показатель почти в1,5 раза выше, чем у больных меланомой (р<0,05).
Значимые различия былинайдены в увеличении экспрессии NKG2D на всех лимфоцитах у пациентов с124высоким уровнем sMICA, что в большей степени связано с активацией Т-клеточного звена, чем NK-клеток у больных с КРР. Также в группе больных с КРРс максимальным уровнем sMICA значимо повышено содержание NKG2D+лимфоцитов до 48,0±10,8% по сравнению с группой с минимальным уровнемsMICA (35,3±15,5%) и c больными меланомой 38,6±12,7% (р<0,05).Обнаружено, что во всех группах больных с КРР повышено относительноеколичество NK-клеток по сравнению с группой контроля, как было показано ранее. Хотя есть некоторая тенденция к снижению их количества с увеличениемконцентрации sMICA (таблица 19).
Возможно с этим связано уменьшение концентрации IFN-g у пациентов III группы с наименьшим количеством NK-клеток.Показано, что у больных с КРР с высоким уровнем sMICA снижена концентрация TNF-a до 4,6±1,7 пг/мл, по сравнению с 12,0±10,6 пг/мл в первой группе и20,8±11,3 пг/мл во второй группе (р=0,04).
С увеличением sMICA несколько снижается концентрация IFN-g. Хотя различия не отличались значимо.Выявлена взаимосвязь между уровнем sMICA и субпопуляционным составом лимфоцитов. Обнаружено, что у больных с КРР из III группы также,как и у больных меланомой повышено содержание Treg и CD95. Хотя в I и IIгруппах этот показатель не превышал референсные значения.Однако у больных КРР обнаружен дополнительный дисбаланс в субпопуляциях лимфоцитов. При высоком содержания sMICA отмечено снижение количества NKT-клеток до 1,5±0,4% против 2,3±0,9% в I группе и Th до 31,6±10% посравнению с 48±6% в I группе больных, и повышение доли CTL до 29,8±9% против 18±4,2% в I группе. Вследствие чего снижен индекс иммунорегуляции до1,06.
Также выявлены значимые различия в увеличении экспрессии маркеровранней CD38 и более поздней CD25 активации лимфоцитов у больных с КРР IIIгруппы (р<0,05). Экспрессия HLA-DR на лимфоцитах увеличена до 22,9±6,7%,что превышает референсные значения. Данный факт указывает на хроническуюактивацию лимфоцитов у больных КРР с высоким уровнем sMICA.Оценивая клиническую картину и отдаленные последствия развития заболевания было выявлено, что 87,5% больных КРР с максимальными sMICA имели125III-IV стадию заболевания. В I и II группе таких больных было 66,7% и 57,1%,соответственно. У 56% больных из III группы были обнаружены отдаленные метастазы. Данные факты свидетельствуют о длительной, но неэффективной активации противоопухолевого иммунитета, в результате с супрессивным влияниемопухоли и ингибированием рецептора NKG2D растворимыми формами молекулMICA, что вносит определенный вклад в развитие толерантности по отношениюк опухоли и подтверждает данные литературы о реализации одного из механизмов ускользания опухоли из-под иммунного надзора [251].3.7.
Оценка уровня цитокинов в сыворотке крови онкологическихбольныхВ дополнение к оценке субпопуляционного состава лимфоцитов, для характеристики нарушений в гуморальном звене иммунитета, в работе исследован уровень цитокинов (TNF-α, IFN-α, IFN-γ, IL-2, IL-10) у 45 больных меланомой и у 38 первичных больных с КРР. Содержание цитокинов в сывороткекрови определяли с помощью ИФА (таблица 20).Таблица 20Средняя концентрация цитокинов в сыворотке крови здоровых добровольцев и онкологических больных (пг/мл)ГруппыЗдоровые добровольцы (n=60)КРР (n=38)Меланома (n=45)TNF-α0,5±0,19,3±5,9*3,2±1,1*IFN-α0,9±0,23,3±1,0*4,6±1,7*IFN-γ2,4±0,914,9±3,6*н/оIL-101,4±0,21,2±0,21,1±0,2* различия показателей статистически достоверны относительно группы контроля (p<0,05);n – количество пациентов.Так среднее количество сывороточного TNF-α в контрольной группе составило 0,54±0,1 пг/мл.
При КРР концентрация возрастала в среднем в 17,2раза, что достоверно отличалось от контрольной группы. Также выявлено, чтосодержание TNF-α превышало контрольные значения у 72% больных КРР,среди которых доля пациентов с наличием регионарных и отдаленных метастазов составляла 36% и 39%, соответственно. У 11 больных (28,9%) показатели были в пределах референсных значений.126В группе больных меланомой среднее содержание TNF-α было выше контрольных значений в 6 раз и только у 7 (15,6%) больных выше референсных значений, но достоверно превышало их.
С другой стороны, уровень TNF-α у больныхмеланомой был в 3 и 4 раза ниже средних значений, чем в группе больных КРР.Средний уровень IFN-α в обеих группах больных был в 3,3-5,1 раз выше,чем в контрольной группе. В группе больных меланомой уровень IFN-α был несколько выше чем в группе больных с КРР (4,6 пг/мл против 3,2 пг/мл и достоверно превышал контрольные значения (p=0,01) (таблица 20). Высокий уровеньIFN-α наблюдался у 15 из 45 больных (32,6%) меланомой. Все больные были сметастатической меланомой III-IV стадии. У одной больной концентрация IFN-αпревышала контрольные значения в 26 раз, а ведь именно меланома представляетнаибольший интерес в плане использования биотерапии.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
