Диссертация (1139554), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Содержание растворимых аллельных форм молекул MICA у больныхмеланомой и колоректальным раком по сравнению со здоровыми добровольцами(контроль 100%).*достоверно отличающиеся значения относительно группы контроля (p<0,05).Для проверки предположения о том, что циркулирующие в периферической крови sMICA могут блокировать активирующие рецепторы NKG2D на по-112верхности NK-клеток у ряда пациентов в популяции периферических мононуклеаров была проанализирована экспрессия NKG2D (CD314) на всех лимфоцитах, Т- и NK-клетках, а также оценено относительное содержание NK-клетокв периферической крови и доля цитотоксических лимфоцитов у больных КРР(n=38) с наличием метастазов и без них (таблица 14). Контрольную группу составили 20 добровольцев.
Уровень sMICA во всех исследуемых группах был вышев 4-6 раз чем в контрольной группе (p<0,05). Однако данное явление не привелок снижению уровня экспрессии рецептора NKG2D на NK-клетках, наоборототмечено двукратное увеличение численности популяции NK-клеток у данныхонкологических больных и повышение экспрессии NKG2D на лимфоцитах иNK-клетках в да раза по сравнению с контрольной группой.Таблица 14Уровень молекул sMICA и рецепторов NKG2D на лимфоцитах и NKклетках в периферической крови здоровых добровольцев и больных КРРГруппыЗдоровые добровольцыКРРБез метастазовС метастазамиnsMICA,пг/млNK-клетки,%NKG2D+ NKклетки, %NKG2D+,%2034,4±21,511,6±2,99,5±3,144,5±6,7381919236,5±57,01246,1±81,41241,0±84,6122,9±10,4122,4±10,8123,4±10,3120,1±9,1119,7±9,4120,3±9,1153,2±10,5154,2±10,4152,4±9,21n – число пациентов,1достоверно отличающиеся значения относительно группы контроля (p<0,05).Следует отметить, что в группе больных КРР с метастазами такженаблюдалось увеличение NK-клеток и NKG2D+ NK-клеток (таблица 14).
Хотядостоверных отличий в подгруппах больных с распространенным процессоми без него получено не было. Повышение уровня sMICA у больных КРР сопровождалось ростом доли NK-клеток и увеличением поверхностной экспрессии NKG2D в популяции МНК, что несколько противоречит гипотезе ускользания опухоли из-под иммунного надзора [364]. Возможно, данный факт связан с полиморфизмом молекул MICA, обладающих широким спектром аффинности к NKG2D+NK-клеткам.113Было показано, что у больных КРР клинической стадии I (n=6) и II (n=14)достоверно снижена концентрация sMICA по сравнению с III (n=10) и IV (n=8)стадией заболевания (p=0,005) (таблица 15).
Полученные результаты подтверждают взаимосвязь концентрации sMICA с опухолевой нагрузкой (т.е. стадиейзаболевания).Таблица 15Уровень sMICA в зависимости от стадии заболевания у больныхСтадияI и IIIII и IVКонцентрация sMICA, пг/млКРРмеланома183,5±47,899,9±71,2404,8±116,1*353,5±300,3*Подобные результаты были получены у больных меланомой при анализеи сравнении данных при различной распространенности опухолевого процесса.Значимые отличия были выявлены у пациентов со стадией I (n=0) и II (n=8) посравнению с III (n=31) и IV (n=6) стадией с наличием регионарных и отдаленныхметастазов.
Данный факт свидетельствует в пользу того, что повышение концентрации sMICA в сыворотке крови может быть ассоциировано с большой опухолевой массы у первичных больных и указывать на распространенный процесс.3.4. Выявление дисбаланса лимфоцитов у больных меланомойВ данном исследовании у 35 первичных больных меланомой кожи в периферической крови определяли долю основных субпопуляций (В-, Т-, NKклеток, Тh, CTL) и дополнительно оценивали наличие NKT-клеток и Treg(CD4+25bright), а также активационный и пролиферативный потенциал лимфоцитов с помощью комбинации маркеров CD38, CD69, NKG2D, CD25, HLA-DR наCD45+ лимфоцитах, Т- и NK-клетках (таблица 16).В качестве группы сравнения использовали референсные значения, полученные в результате фенотипирования лимфоцитов большой группы практически здоровых людей, описанные в литературе [81].
Часть показателей (CD25,HLA-DR, CD314, CD95, CD38, CD69) была получена нами при фенотипировании114субпопуляций активированных лимфоцитов у 20 пациентов из контрольнойгруппы.Таблица 16Фенотипическая картина лимфоцитов и маркеров активации упервичных больных меланомой кожиФенотип лимфоцитовЛимфоциты (CD45)В-лимфоциты (CD20)Т-лимфоциты (CD3)Т хелперы (CD4+CD3+)Treg (CD4+CD25bright)CTL (CD3+CD8+)NKT-клетки(CD16+CD56+CD3+)NK-клетки (CD16+CD56+CD3-)Активированные Т-лимфоциты(CD3+HLA-DR+)Активированные лимфоциты(HLA-DR)Альфа цепь рецептора IL-2(CD25)CD314 (NKG2D)NKG2D+NK-клеткиCD38+Т-клеткиCD38CD69CD69+NK-клеткиCD95 (Fas/APO-1)CD95+Т-клетки%29,4±13,47,1±2,874,7±9,944,7±12,48,2±5,930,6±11,2*109 кл/л1,75±0,940,12±0,091,32±0,790,79±0,550,12±0,080,54±0,33Референсныезначения% (*109 кл/л)19-37/1,2-2,57-17/0,11-0,3861-85/0,95-2,0835-55/0,58-1,341,6-5,8/0,01-0,0819-35/0,37-0,973,0±2,30,05±0,040,5-6/0,01-0,1715,1±9,20,26±0,178-19/0,12-0,3711,7±7,60,19±0,127-11/0,11-0,419,5±8,20,31±0,168-18/0,12-0,510,9±6,90,16±0,102-9/0,04-0,1442,3±11,912,6±9,121,1±15,138,3±18,314,6±10,65,4±4,052,9±21,143,7±17,10,79±0,380,23±0,160,37±0,360,67±0,440,25±0,220,10±0,080,75±0,400,62±0,3231-54/0,6-1,47-12/0,11-0,459-15/0,2-0,520-50/0,5-1,310-30/0,2-0,73-10/0,1-0,223-60/0,6-1,412-50/0,3-1,3Количество клетокУ группы больных меланомой относительное содержание основных популяций В-, Т-лимфоцитов и NK-клеток находилось в пределах референсных значений.
Данный факт свидетельствует о том, что этих показателей недостаточнодля комплексной оценки противоопухолевого звена клеточного иммунитета.Хотя было несколько снижено абсолютное содержание В-лимфоцитов. Отмечено, что в среднем по группе повышено абсолютное и относительное содержание Тreg за счет 18 пациентов из 35 больных (51%) с наиболее высокими показа115телями. Доказано, что Treg могут ингибировать различные проявления функциональной активности Т- и NK-клеток [166]. Супрессивная активность Tregреализуется через прямой контакт с активированными эффекторными лимфоцитами, блокаду цитолитической активности и выработку иммуносупрессивных цитокинов, таких как TGF-b и IL-10, и ингибирование экспрессии активационных, адгезионных и хемокиновых рецепторов [33, 39].Также у 21 (60%) больного меланомой выявлено повышенное содержаниеактивированных HLA-DR+ лимфоцитов, что в среднем составило 19,5% и значимо превышало значение в контрольной группе (14,9±2,6%) (р<0,05).
У 15(43%) больных наблюдалось увеличение экспрессии α-цепи рецептора IL-2(CD25), что в среднем составило 10,4% и также значимо превышало показателив контрольной группе (5,9±1,8%), что подтверждает полученные нами ранееданные на меньшем количестве больных [9].Экспрессия активирующего рецептора NKG2D на всех лимфоцитах всреднем составила 42,3%. Также у больных меланомой отмечено повышенноесодержание NKG2D+NK-клеток до 12,6±9,1% (таблица 16). У контрольнойгруппы из здоровых добровольцев данный показатель составил 9,5±3,1%(p<0,05). Хотя доля NK-клеток, которые несут на поверхности рецепторNKG2D у больных меланомой и здоровых доноров была одинаковой и составила 82%.Показано, что у больных меланомой 21% Т-клеток экспрессируют CD38.В среднем по группе доля активированных CD38+T-клеток составила 21,1%, чтопревышало максимальное референсное значение в 15% (таблица 16).
В группедоноров доля CD3+CD38+ лимфоцитов составила 11,9±2,9%, что значимоменьше чем у больных меланомой (р<0,05). Клетки с высоким уровнем экспрессии CD38 проявляют пролиферативную активность и обладают высоким потенциалом в отношении продукции IL-2 и IFN-γ [338]. Молекула CD38 представленатакже на поверхности активированных В-, NK-клеток. В данном исследованиимы не обнаружили разницы между экспрессией CD38 на всех лимфоцитах убольных меланомой и здоровых доноров.116Значимых отличий между экспрессией CD69 на лимфоцитах и NKклетках у больных меланомой и доноров обнаружено не было. Показано, что вэтих группах пациентов около 5% NK-клеток несут рецептор CD69.
ОстальныеCD69+ лимфоциты распределены между оставшимися субпопуляциями активированных В-лимфоцитов и Т-клеток.Экспрессия рецептора CD95, отражающего степень активации лимфоцитов и запускающего апоптоз выявлена в среднем на 52,9% лимфоцитов у больных меланомой, что выше чем в контрольной группе (45,3±14,5%) (р<0,05) иговорит об активации большинства клеток и возможном окончании процессаих дифференцировки, а также о повышенной чувствительности данных лимфоцитов к FasL-индуцированному апоптозу [56].На основе полученных данных, можно сделать вывод о том, что для пациентов с меланомой характерно повышенное относительное содержаниеТreg, CD25+, CD38+ лимфоцитов и HLA-DR+ лимфоцитов, что характеризуетприсутствие хронической активации клеточного звена иммунитета и наличиесупрессивных субпопуляций лимфоцитов.3.5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
