Диссертация (1139554), страница 22
Текст из файла (страница 22)
Joe Trotter, США).105Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ОЦЕНКИ ДИСБАЛАНСА ПОКАЗАТЕЛЕЙИММУНИТЕТА У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ3.1. Выявление растворимых форм молекул MICA в периферическойкрови онкологических больныхПри ускользании опухолевых клеток из-под иммунного надзора они способны сбрасывать со своей поверхности стресс-индуцированные молекулыMICA, которые могут быть обнаружены в растворимой форме в сыворотке кровиу больных. С целью определения сывороточных форм молекул MICA (sMICA)первоначально мы использовали сыворотку крови 200 онкологических больных сразличными онкологическими заболеваниями из 10 нозологических групп (ракщитовидной железы, рак мочевого пузыря, рак почки, рак тела или шейки матки,рак предстательной железы, меланома, рак языка или гортани, рак молочной железы, КРР или рак желудка).
Сравнение проводили с контрольной группой из 60здоровых доноров.Предварительно нами были подобраны оптимальные условия проведенияИФА для определения уровня sMICA. Наиболее четко воспроизводимые данныебыли получены при разведении исследуемых образцов сывороток и стандартныхобразцов рекомбинантного белка MICA в 4 раза PBS, содержащем 20% ЭТС.Важным для исследования оказалось поддержание стабильной температуры(21ºС) при анализе.
Чувствительность метода составила 5 пг/мл. Был выполненсравнительный анализ содержания sMICA в группах, включающий оценкусреднего и медианы концентрации sMICA. Сравнение данных проводилось сиспользованием непараметрического метода Манна-Уитни.Было показано, что у доноров в контрольной группе молекулы sMICA обнаруживались в минимальных количествах (среднее значение 37 пг/мл). В отдельных образцах были выявлены высокие значения sMICA; максимальное значение, выявленное в контрольной группе, составило 235 пг/мл. У 26 человек(43,3%) сывороточный MICA не определялся.Средний уровень стресс-индуцированных молекул MICA, лигандов активирующего рецептора цитотоксических лимфоцитов NKG2D, в сыворотке крови106онкологических больных с различными солидными опухолями достоверно отличался от группы контроля и превышал его в 3-4 раза (р<0,002) (рис.
8).онкологические больные (n=200)316*контроль (n=60)100050 100 150 200 250 300 350содержание sMICA (%)Рисунок 8. Уровень стресс-индуцированных растворимых молекул MICA в сыворотке крови здоровых доноров и онкологических больных;*уровень значимости по сравнению с контрольной группой (р<0,05).Среди группы больных солидными опухолями по 10 нозологиям данныепо содержанию sMICA и распределению больных отражены в таблице 12.Таблица 12Концентрация молекул MICA в сыворотке крови здоровыхдобровольцев и онкологических больных солидными опухолями№12345678910ГруппыЗдоровые добровольцыРак щитовидной железыРак мочевого пузыряРак почкиРак тела или шейки маткиРак предстательной железыМеланомаРак языка или гортаниРак молочной железыКолоректальный ракРак желудкаВсего онкологическихбольныхКоличествопациентовСреднее ± SD(пг/мл)60191061216431111531936,92±9,530,67±18,344,58±35,665,2±85,691,08±56,6125,36±99,5120,88±54,8168,25±76,7168,54±76,7198,69±49,5210,7±111,1р=0,078р=0,326р=0,149р=0,002р=0,003р<0,001р=0,002р<0,001р<0,001р<0,001200126,5±12,7р=0,002107ДостоверностьРасчет средних значений и стандартного отклонения выявил, чтопоказателинесоответствуютнормальномураспределению,идлясопоставления групповых средних значений не может быть применен tкритерий Стьюдента.
Сравнительный статистический анализ был проведен покритерию U Манна-Уитни. В различных нозологических группах наименьшееколичество sMICA было выявлено при раке щитовидной железы, раке мочевогопузыря и раке почки, среднее значение sMICA в этих группах находилось впределах от 29 до 76 пг/мл.Достоверные отличия количества sMICA от контрольной группы быливыявлены в следующих нозологических подгруппах: рак тела или шейкиматки, рак предстательной железы, меланома, рак языка или гортани, рак молочной железы, КРР, рак желудка (р<0,005) (таблица 12).В данных подгруппах наблюдался значительный разброс концентрацийsMICA, максимальные значения (более 1000 пг/мл) были зарегистрированы убольных меланомой и КРР. Это две нозологические группы наиболее подходящие для дальнейшего исследования и статистического анализа, так как в нихнаибольшее количество больных и они различны по иммуногенности – собственно рак и меланома. Меланома считается иммунозависимой опухолью, таккак у некоторых больных наблюдается спонтанная регрессия новообразования.
Колоректальный рак, наоборот считается менее чувствительным к воздействию иммуноцитов и ИТ.3.2. Информативность выявления молекул sMICAВ диагностике различных заболеваний для характеристики информативности методов исследования служат объективные параметры, которые называются операционными характеристиками исследования или теста, к основным критериям относятся: чувствительность (доля действительно болеющих)и специфичность (доля больных, у которых данный тест даст положительныйрезультат). К вспомогательным критериям информативности относятся: точность и прогностичность положительного и отрицательного результата.108Как правило, пограничная точка для разделения пациентов между группами без онкологического заболевания и с патологией устанавливается произвольно.
Это связано с тем, что один и тот же исследуемый показатель можетвыявляться как среди здоровых, так и среди больных людей. В данном исследовании был выбран средний показатель содержания MICA в сыворотке кровидля группы онкологических больных, который составил 150 нг/мл.В работе показано, что среди 155 больных с солидными опухолями у которых средний уровень sMICA достоверно отличается от контрольной группычувствительность метода составила 41,3%. Среди 53 больных КРР чувствительность не отличалась от группы больных солидными опухолями и составила 41,5%, а среди 43 больных меланомой была почти в два раза ниже и составила 23,3% (рис.
9). В клинике тест с высокой чувствительностью важендля исключения диагноза, если результат отрицателен.100806040200чувствительностьспецифичностьсолидные опухолипрогностичностьположительногорезультатаКРРточностьмеланомаРисунок 9. Критерии информативности выявления заболевания при помощи оценкиуровня sMICA у онкологических больных.В работе показано, что среди всех онкологических больных по сравнениюс группой здоровых добровольцев специфичность метода была достаточно высокой и составила 96,7%.
Высокоспецифичные методы называются в диагностике дискриминаторами. Показано, что данное диагностическое исследованиеэффективно на втором этапе диагностики, когда сужен круг предполагаемых109больных и необходимо с большой уверенностью доказать наличие злокачественного новообразования.Чувствительность и специфичность диагностического метода не являются постоянными величинами для разных категорий пациентов. В данном случает определение sMICA – лигандов NKG2D, может в большей степени служить для подтверждения диагноза, а не для ранней диагностикизаболевания.В работе показано, что среди всех больных с солидными опухолями прогностичность положительного результата была высокой и составила 96,9%.Таким образом, вероятность наличия болезни при положительных результатахисследования при солидных опухолях велика. Для больных КРР прогностичность положительного результата составила 91,7%, а для больных меланомойбыла несколько ниже – 83,3% (рис.
9).Прогностичность отрицательного результата была минимальной средивсех обследованных групп пациентов и составила 38,9%. Среди больных КРРи меланомой прогностичность отрицательного результата была высокой и составила 65,2% и 63,7% соответственно. Данный критерий, показывает,насколько велика вероятность того, что пациент здоров, если результаты исследования отрицательные. Точность выявления заболевания во всех группахбольных была выше 56,7% (рис. 9).Таким образом, в результате работы показано, что выявление молекулMICA в сыворотке крови пациентов является высокоспецифичным метом диагностики и характеризуется высокой прогностичностью положительного результата.3.3.
Определение молекул MICA у больных КРР и меланомойНа наш взгляд наиболее интересными и различными по онкобиологическим свойствам, как с точки зрения развития опухоли, так и по злокачественности являются КРР и меланома, которые и были выбраны для проведения сравнительной оценка уровня молекул MICA.110Как было показано ранее до лечения у группы больных КРР средняя концентрация sMICA достигала 198,7±49,5 пг/мл, а у больных меланомой120,9±54,8 пг/мл.
Если принять контрольные значения за 100% можно определить, что у данных групп пациентов уровень sMICA повышен для больных меланомой более чем в 3 раза, а для больных КРР более чем в 5 раз (рис. 10).меланома395*колоректальный рак552*контроль1000100200 300 400 500содержание sMICA (%)600Рисунок 10. Содержание растворимых форм молекул MICA у больных меланомой иколоректальным раком по сравнению со здоровыми добровольцам (контроль 100%).*достоверно отличающиеся значения относительно группы контроля (p<0,05).При анализе показателей уровня sMICA у больных меланомой по течению основного заболевания в отдаленные сроки после первичной диагностикии оценки уровня sMICA пациенты были разделены на две группы: первая состабилизацией процесса и вторая группа с прогрессированием заболевания.Было обнаружено, что у больных с прогрессированием заболеваниясредняя концентрация sMICA при первичном обследовании была в 2,8 развыше, чем в первой группе (р=0,02) (таблица 13).Таблица 13Содержание sMICA в зависимости от исхода заболевания убольных меланомойИсход заболеванияКонцентрация sMICA (пг/мл)Стабилизация (n=19)78,6±35,4Прогрессия (n=16)217,8±134,8*111Это указывает на то, что обнаружение растворимых форм молекулMICA в высоких концентрациях служит фактором плохого прогноза и указывает на неблагоприятное течение меланомы у данных больных.
Однако, прианализе аналогичных показателей у больных КРР такой зависимости выявленоне было.Показано, что среди всех стресс-индуцированных молекул MICA существует разнообразие, которое в настоящее время определяется по аллельнымформам белка. Для того чтобы проверить наличие другой аллельной формыбелка MICA в сыворотке крови больных этих групп было проведено дополнительное исследование с использованием ИФА, основанного на конкурентномингибировании твердофазных антител к растворимым формам молекул MICAу больных этих нозологических групп (n=63): меланома (n=43) и КРР (n=20).Показано, что средние значения концентраций в исследуемых группахпрактически идентичны и более чем в 4 раза больше, чем среднее значениеуровня sMICA в контрольной группе (рис. 11).контроль100колоректальный рак496*меланома454*0100200300400500600содержание sMICA (%)Рисунок 11.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
