А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 28
Текст из файла (страница 28)
Слелует иметь в видо чта электианьге ушгавия далеко нс всспш оптимальны длл роста вьщеляем ых мнкрооршнихчов, оливка они переносятся ими лу гше, чем сопутствующими формами. О развитии накопи галькой культуры судн по появлению характерных признаков роста выделяемых микрааршнизмов —. помутнению среды, иногда сопровожлаемому пигментацией. появлению оленки, асадмй выделению газов. Пам наго визуальною наблюдения накапнтюшпую культуру ми крсскапируюг и выявляют прпсугагыте желаемых фарм Нншда необходима определить прелую ьг метаболизма, образование котарьгх свойственно выдетше мы м микроорганизмамам. Например, о развитии нитрифвпирующих бактерий свидетельствусг появление в среде интриг- и нитрат-ионов и уменьшение или даже полное исчезновение нона аммония. Оснавныс условна элекпгвностн, пазводяющне асшучить накопительные культуры микргюргвнизьгов с различным типом обмена аещест», см.
на рис. 6.1. 0.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ После того как получена накопительная к)счыура, приступают к выделенша чистой культуры. Она может быть получена яз отдельной колонии или однои клетки. 6.2уК Выделение чистой культуры из отдельнои колонии Основным методом выделения шстьгх культур микроорганизмов является иеюд, преллаженный Р. Кохом. При нпип его заютючается в получении чистой кулшуры из оглельной колонии.
Однако этст метод неприменим длх выделе° .ия микроорганизмов, которые не расгуг или плахо растут на плотных срелах К числу таких микрооршнизмав относятся некоторые баюерин, ьгногие вадаржли и пращсйшис. 96 ~2 ООО Рнс.62. Рассевк>тыурыми«тхкрга измов на поверхность платной срезы шпаге.мм — и дряг ты«ег,  — О'. а~ Высевы лелавтг, как правгщо, из трехчвгырех п складник раз еепсн ий. Етя этогоо в пробирку с расплагщенной и сстюкенной до 40 — 50 С срслой вносят 0„5 — 1,0 мл одного нт ратвелсний накопительной культ>ры. Посевной мв.
тсрнал тщатсдьно псремегчивпст, вращая пробирл> между лалонями. Заюм около пламени горелки вынимакгг из Г 2 / 1 3 Рис. 6 3 Сына псе» ловшмшщщ» 17- -й вассещ х>с««туры иихыюрган«зиов на поесрмгссгь пло он сведи всоюв 97 При вылеленип чистой культуры азробных мвкрооршнизиов накопиюльную кулщуру высевают на поверхносп |ттстноуг срезы. Порядок работм слепу. юшин Расплавленную иа кипящей водяной бане сюрильнуго и охлаждены>ю ла 50'С пггтательн>ю среду, содержащую агар изи же>гаги>ту, развиванп в сюргщьные чашкгг Петри. После того как среда застынсг, на ее лонер«восо, из пипетки наносят каплю накопительной культуры изи ее развеления в стерильной воде и сгсргщьнь~ьг стеклянным шпателем Дришльокого рвсн репеляют каплю по поверхности плотной орели в чашке Петри.
Далее этим жс шпателем протирают поверхность среды послеловательно ео второй, третьей п четвертой чашках. Обычна в первых двух чашках после инк> банни наблюдается сплошнойй рост ьшкроорганизиов, тогда как в поспел>юшнх — рост изолирсшнных колоний Грие. 6.2). Рассещп ь ггггкоггггыльную куты«ру можно бактернолопогеской петлей методом истощающего штриха.
В этом слу гас накопительную к>щь туру нли ее развсасние отбирают петлей и на поверхности плотной среды проводят пи ряхк в порялке, указанном на рис. 6.3 Перел юп«лыы новым штрихом пеглю стерилизуют в пламени горелки. После посева чашки Петрл помещают в термостат крышками вниз, чтобы конленсапионная вола, образовавшався на крышке чашюг при застывании агара, не помешала подрыть изояированные кещении. Чашки вылсрживают втсрмостате в течение 1 — 7 суг в зависимости гп скорости роста микроорганизмов.
Вырослше изолированные колонии отссвают петлей на поверхность скошенной плотной срелы в пробирке или в жилкуго среду. Метод глубинного посева. Изслированнмс ко>гонии «ги«роазрофггггьных микроорганизмов и факультативных анаэробов чаше получают меюдом глуби нного посева. Для этою плопгую питательную среду пред«яр«дельно разлива>от в прсбирки по 15 . -20 мл и стерилизуют. Непосредственно перел посевом пробирки помещагст в кшмшую валяную баню, чтобы среда расвлашпмсь. Вмсев проаопят из развеленпй накопителыюй культуры в кирил«ной водопроводной воле.
Развсденгщ готовят с таким >жсчетом, чтобы прп высеве 0,5 — 1,О мл рази:лени» случи ьизслиров нпыс «ог . С разьеп«ни определяатс» плотностью накопительной культуры. пробирки пробку, обжнпш крал пробирки в пламени горелки, и быстро вылишют солержимое пробирки в стерильную чашку Петри. После того как аптризошиная срсла застынет, чашки Петри помет!!мог в термссшт. Колонии, выросшие и толгце среды, вырсшиж стерильным скальпелем, извлекают сшрильныьш капиллярныма тр)бками или просто петлей и псрсягюят ц жидкую срелу, благоприятную дз» развития вылсляемых микроорганизмов.
Особые трулности аозниклют при пьщелснии чистых «улыур облцгатиых анаэробов. Если контакт с молекулярным кисчсродом не вызывает сразу жс гибели клеток, то посс» проподят на поверхность грслы в чашки Петри, на после посева чашки тшчас помещают в а»аэростат. Однако чаще пслшуютск методом раз»еде»ин. Сущность его эаюпочакгся а том, что рмледення накопительной «ультуры угро»одгн а раси!шмен»ой и охлалшенной ло 45 50 С агар»то»анной пит»тельной прела. Делают б .10 послспоаагсггьных разведений.
Затем среду а пробирках быстро охлаждагот и зал»»ают по»ерхносп слоем стерильной смеси парафина и лаэелино»ого маса» (» соотношении 3: 1), что препятсгиуег проникноаеншо ыжцуха н толщу агарлзованной среды. Иногда а ариэошнпук иго«тельную аралу пссае пот»па и пцатеяьиагт перез«щи»алия переяоса а с срюьиьс р бкц Буррц.
Можно нспсльюяагь капввярние и»- легки ! !астсрг, а кшорые набирают гсопктш»ующее !итшде лис накои пыл мгой «уль«рн а расгюаезешюй агаризшюннсй пптю елькой среде Конец «апюцыра заланаакл. При удачно выбранном раяюьснгтк на«о~ ~к!ать»ай культуры а одной из пгюбирок (нице ск Пас~ ра, трубок Бурри) ырастакт »зол«равааные кояонн . '!тоб з «с об разоааашие я колонюц пссгулакт следующим образом.
Улллякт стерильной иглой слой парафина, а столбик агар«зола ой срецы ссторсжно пыдуаа»и нз пробирки а стсрьз~ывго чашку Пс ри, прзпусшя газ, не солержац! К кислород, иерю капилляр гаги иглу, поиск!еннме мезшу стенкой орзбкрки и ашрпза»анной средой. Агари«»жилую среду из трубки Бурри ьыу акл, щоцуская газ ю!жз ы!гиую орсбтку. В некглорыь случаях плотную среду цз пр бирки иэалекак г иначе Прюнрю сле~ ка нагреююг, асс яре в быстро «раша» ее ию гаям«цеь~ !о!', "л«и, 1(р» этом агар, непосед т нно прилегающий к сть кг, ила«шея и содсржпьюе прсбирк» а агы агаро огаспыбиьаге с с р ч шку Петри. Степняк агара разриааж стертц~ьиьгьг »видена г. ьз . е«л ,за аг с ери ьным т иаляриыци труб«лагг~ или пел!сй.
Можно т кже и гркшгь «сгернаьныьг анштоы. Изяле еп ые кот опии переносят а жгльую с!жлу, благоприятную для раз»ною аыаююемнх миькрооргапнзлахс Если изслкроаанинс »алонии получены ° капглггярс, ш посяе платель ной лез ифс ш и поверхности его Рашамыаают стернльнни пипцетоьг и уга тки капилля!ж, солержаши зо. «ро а аы колонии, и Реаоегп а стсрш ную срею Для получения гтзсвироишг!ых колоний методом глубинного посева и методом разы:лений рекомснлуетса испсльэоаать осяглывшыг лшаошелмые среды (см.
пг. 3) Мюъд ращаюшнхся пр бирок. Котла хотя пслу"ги ь изолирааанные ксаонцн сыггь гап ых а оэрсбггых бактерий, характернзуюгц»кок особенно пысокой чуас а т лы ог. ью к кис ороду (экс Рсьяыь ыс гоыэробы), используют ьгсгол »раша»!шахе» проб«- Рок Р.ха!эгей«а. Спцносп сю эаюгю истек а с, елуюц,си. Расгваелелную агар»хозяину!о сргду вассал»~т бактеряями цри осспж пном токе через пробирку мерил ыгшо инертногоо гаш, ссагботшгиного от приими ю сзгоропк Затеьг гзхгбнрку закрышют Резь!на»ой пробкой и цолешаю юризонгаяьис а эажи, арацлюший пробирку, Лгарюашнпая срела при т оы рэаноисрг!а расцрслсаяется но щенкам пробирки н эашыааст топким слоем Уонк»й ююй ашриэоаашюй среды а пробирке, запплненнай газоеой Рис.
бд. Н зов нрованны» колонии сел н! ю и ых апаэрсбов в пробирках, заношенных пном )па Р. Хангекту): Рис. С 5. Пасса кулылзы строга а ээробиьв и краорганизмов с вспальзава ие сдиф анин ме- ода ран«юи.,ю с» иб рох Р.Хаигскта: сыссью, позвал сг пол н ь «зал ра и и с колонии, харашо виаимыс нсаооружснны !лазом (см. Рис. б.4). Применяют также ! ф . л эггл!ада Р.деагейва. Прн этом расплавлентбю агаризаванвую ореху приносны»о оке стерильною инертно га газа разлнмвм по пробиркам Затем прав!Рьу эакры ак !«!кнопок прабкод и по э!ел«юг гаризоишль о а важи, врацаюлвтп пробирку. После того юк среда иа стенках прюиркь застынет, произ алга засев среди в этой пробирке в юке с*ерш о а шэа с помощью бактерлсюпоб пег!!и, п)юшюл штрих еа вращающейся пробирке в нмзраелсоии аг ес дна к горлышку )рцо.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
