Н.С. Зефиров - Химическая энциклопедия, том 4 (1110091), страница 411
Текст из файла (страница 411)
На этом процесс Т. завершается. ДНК можно ввести в бактерии также искусственно. Для этого, напр., бактерии кишечной группы (для них естественная Т. не характерна) охлаждают и обрабатывают растворами СаС1, или КЬС) либо подвергают замораживанию при низких т-рах с последующим оттаиванием.
Клетки при этом становятся проннцаемыми для ДНК, однако механизм Т. в этом случае совершенно иной, чем описанный выше. В бактерии посредством Т. можно ввести также ДНК ллазмид. Конечным результатом этого является вознякновение клетки, несущей чужеродаую плазмяду в автономном состоянии или включенную в состав хромосомы. Механизм проникновения в клетку плазмндной ДНК такой же, как и хромосомной. Однако возникновение однонитевой ДНК и др. процессы, сопутствующие поглощению, настолько «уродуютв плазмиды, что вероятность правильного восстановления кольцевой решгицирующейся формы низка (Т. клетки мономериыми формамн плазмид не эффективна). Поэтому употребляют мультимерные (состоящие из неск.
плазмид) формы или плазмиды с прямыми повторами нуклеотидов, отчего шансы на «сборку» полноценной плазмиды повышаются. С помощью плазмид можно также осуществить Т. прото- пластов (клетки с удаленной клеточной стенкой), к-рые затем регенерируют в полноценные клетки. ДНК, проникая в них, почти не повреждается и остается двунитевой. Плазмндная Т. во многом близка к т. наз. трансфекции, когда бактерии поглощают ДНК фага (вирус бактерий), предварительно выделенную из фаговых частиц. Эта ДНК в бактерии кодирует образование новых частиц фага, к-рые разрушают затем бактериальную клетку и выходят наружу.
Т. у дрожжей м.б. осуществлена только искусственным путем. Для этой цели используют протопласты или обрабатывают клетки солями щелочных металлов. ДНК проникает в дрожжевые протопласты также под действием электрич. разрядов (т. наз. электропорация). Т. клеток млекопитающих осуществима только искусственно в результате микроинъекций чужеродной ДНК в ядра эмбрионов, соматич. клеток нли путем поглощения ДНК клетками в культуре тканей. Чаше всего ДНК добавляют к смеси р-ра СаС1г и фосфатного буфера; образуется мелходисперсный осадок, к-рый адсорбируется и поглощается клетками. Возможно также введение ДНК в липосоме или путем использования в качестве переносчика ДНК-содержащего умеренного вируса с включением в его геном фрагментов ДНК животных. Клетки растений не способны погчощать ДНК.
При Т. клеток двудольных растений используют регенерируюшие протопласты, поглощающие своболную ДНК и ДНК, заключешгую в липосомы. Регснерирующие трансформированные протопласты образуют т. иаз. каллусную ткань, из к-рой затем формируется растение. Др. способом введения чужеродной ДНК в геном таких растит, клеток является естественное заражение их бактерией Абгобас!ейпш шше- 1243 !ас!епв, несущей Тг- или К1-плазмиды. Эта бактерия способна проникать в интакгные растит.
Клетки, и освобождающиеся затем плазмиды встраиваются в геном. У однодольных растений эти плазмиды не функционируют в клетке, для вх Т. прибегать к прямому переносу ДНК в протопласты, используя электропорацию. Т. растеинй можно осуществлять также путем «выстрелю> в клетку ускоренными частицами вольфрама или золота, на к-рые предварителъно нанесена ДНК. Т. используют в генетической инженерии для введения в клетку генов, несущих заданную информацию.
Т. впервые была открыта в 1928 бх Гриффитом. В 1944 О, Эвери с сотрудниками показал, что превращение нек-рых непатогенных бактерий в патогенные осуществляется в результате переноса в геном первых ДНК, высвобождающейся из клеток вирулевтных штаммов. Л мс Канава т. И., Загаров И. А., «Уигиаг современное бвовонгт, )9В7, г. Гсе, в. Ца), е 3-2); Прогаров А.А., трансформа«на у бжгергву, М., гмв; вуьевха у„«тьсог. Арра аевес», гдвз, . вб, нг з-а, р. ыр-«ег; Квевег)орасг К., Вхоысех) Л. Г„«СКС игаса) гег.
йасыаа», )9М, г. )В, Й 4, р. За9-79. А г[ Прогорев. ТРАССЙРА МКТОД, метод изучеяия закономерностей явлений переноса (см. Переноса нрсцессы) в хим.-технол. процессах с помощью примесей к.-л, в-в, наз. трассерами, к-рые вводят яа вход нли в рабочий объем аппаратов. Применение Т. м, при анализе процессов и разработке аппаратуры для их проведения позволяет выявить влияние ее масштабов (см. дваститебный нереход) и инженерного оформления иа макроперемешивание материальных потоков, устанавливать модели вх движения, оценивать и использовать в послед. расчетах процессов параметры этих моделей (см. также Структури потеков). Трассерами (нх наз.
также индикаторами или метками) служат жидкие либо твердые в-ва, содержащие небольшие кол-ва красителей, солей, радиоактявные препараты и дра присутствие к-рых легко определяется физ. или хим. методами анализа. Применяют также т.наз. температурные метки — нагретые газы, жидкости, твердые частицы. При иссчедовавиях движения газов к осн. потоку, напр.
воздуху, добавляют Не, Аг, СО„частицы аэрозоля (дым). Способы постановки экспериментов с применением Т. м. определяются их задачей и особешюстями исследуемого объекта (в случае проточных систем источник трассера м. б. нестационарным или стационарным, в случае непроточных— всегда несгационарным).
Нике рассмотрены найб. распространенные способы. !) В поток, поступающий в проточный аппарат, вводят (импульсами, ступенчато и др.) трассер, начальная коицеит- равжя к-рого со изменяется во времени [са(г)); регистрируют концентрации с трассера в разл, точках внутри аппарата и на выходе из него [с())1.
Зависимости с ()) часто наз. концентрационными возмущениями на входе в аппарат, а зависимости с())-кривыми отклика на эти возмущения. Примеры кривых отклика на ступенчатые изменения кояцентрации трассера на входе в аппарат (т.наз. кривые вымывания) показаны на рис. 1 (см, также Псеедеожижение). Рве. ). Кравис ог«авва в раааа«виг точках во в«сове аааарвга с веаохеввним гарт«тын слоем !гяесь в далее «амера кривых ваграсгамг ао мере увсавченвв расс«о»та ог места ввода гравера). в т С помощью кривых отклика находят ф-ции Распределения х(т) элементов потоха по временам пребывания и возрастам, используя ур-ние с(у) = ) с (у — т)х(г)с(с [пределы иатегрированиа определяются областью существования с(г)), где т-возраст, или время, прошедшее для элемента потока, к-рый находился в аппарате с момента входа в него; х(т)агт — доля элементов потока, время пребывания 1244 (возраст) к-рых находится в интервале т, т+ х(т.
Фщни распределения применяют при расчетах хим.-технол. процессов. Так, если в аппарате периодич. действия происходит р-ция первого порядка и во всех точках реакц. объема условия процесса одинаковы, то, зная зависимость когщентРации к.-л. Реагента от вРемсни (ср(1)), можно найти концентрации этого реагента в аппарате непрерывного действия: ср — — ) ср(т)х(т)х(т. о Для процессов переработки дискретных частиц (обжиг, сушка и др.) с помощъю ф-цнй распределения х(т) находят ф-ции распределения частиц по св-вам (состояннвм), При этом исходят из условия: доля элементов потока, св-во (состояние) к-рых изменилось от ио до и, равна доле элементов потока, время пребывания (возраст) к-рых равно времени, необходимому для перехода от состояния иа до и. Данный способ принято наз.
способом ф-ций отклика или способом респонстехники (в англоязычной литературе часто используют термин «ВТТ) (есйш()пе», нли нйеш'- депсе Т(ше О(в(ПЬаггоп Тес1шрйпе». 2) Трассер вводят стационарно в нек-рую точку внутри аппарата или распределяют равномерно по его сечевюо. Концентрапию трассера измеряют в разных точках по сечению и высоте аппарата. На рис. 2,а приведена зависимость с от продольной координаты ( в области аппарата, расположенной ниже источника трассе)ул (криввя продольного, или обратного, перемешивания). Рис. 2,б иллюстрирует радиальный профиль концентрации трассера при его точечном источнике (кривая радиального псремешивания).
Данным способом, наз. способом стационарного источника, изучают продольный и поперечный перенос массы Рис. 2. Кривые продовьвого (о) н радиального (6) пер мешнваник газа в псевдо. о»ил«ивом слав. в аппаратах. Напр., если устройство для ввода одного из реагентов в аппарат находится на иск-ром расстоянии от устройства, в к-рос подается др. реагент, удастся выявить, где оба реагента взаимодействуют и в каких соотношениях. При необходимости установления модели структуры потоков и определения ее параметров способ стационарного источника целесообразно сочетать со способом респонстехники.
Так, применительно к колонному аппарату правомерно выбрать двухпараметрич. диффузионную модель, если она хорошо описывает эксперим. кривые отклика, а татке кривые радиального и обратного перемешивания. 3) Если система непроточна (обычно периоднч. действия), трассер вводят импульсно, как правило, за малый промежуток времени в конкретную точку или область аппарата (радиусом Я) и регистрируют кривые отклика (рис. 2) в разл. точках по его объему. По истечении времени, к-рос паз.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
