Диссертация (1091824), страница 30
Текст из файла (страница 30)
№ 013.01.101.Цилиндр мерный вместимостью 25 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 015.01.025.Цилиндрмерныйвместимостью500 см3,фирмы«ISOLAB»(Германия), кат. № 015.01.500.Универсальная индикаторная бумага рН 0-12 фирмы «Лахема»ПНД 50-975-84.Бутыль с винтовой крышкой вместимостью 1000 см3, фирмы«ISOLAB» (Германия), кат. № 061.01.1000.Бутыль с винтовой крышкой вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 061.01.100.Пипетки Пастеровские вместимостью 5 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № ЕА61.1-250 ЕА.11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловаякислота–аналитическийстандарт, фирмы «Fluka» (США), кат. № 39382.Метанол для ВЭЖХ, фирмы «Sigma-Aldrich » (США), кат.
№ 34860.Гидроксид калия, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 484016.Гексан безводный, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 296090.Этилацетат безводный, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 270989.Изопропанол для ВЭЖХ, фирмы Fluka» (США), кат. № 34965.Кислота муравьиная, фирмы «Fluka» (США), кат. № 56302-1L-F.Кислотахлороводородная36,5-38,0%«Sigma-Aldrich»(США),кат.
№ H1758-100ML.Дихромат калия, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № P5271-2КG.Серная кислота, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 320501.Додецилсульфатнатрия,фирмы№ 8.22050.0100.192«Merck»(Германия),кат.Примечания1 Средства измерений должны быть внесены в Госреестр СИ РФ и поверены вустановленные сроки, иметь клеймо и/или свидетельство о поверке.2 Реактивыиматериалыдолжныиметьпаспортаилисертификаты,подтверждающие их пригодность.3 Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств,посуды, реактивов и материалов с метрологическими и техническими характеристикамине хуже, чем у приведенных в разделе 3.4 Отбор и хранение проб4.1 Пробы волос массой не менее 100 мг отбирают в полимерныеконтейнеры.4.2 Пробы должны храниться при комнатной температуре.4.3 Контейнеры с отобранными пробами должны быть снабженыэтикетками, содержащими информацию о пробе.5 Подготовка к выполнению измерений5.1 Подготовка лабораторной посуды5.1.1 Полимерные контейнеры, предназначенные для отбора проб,полимерные наконечники для автоматических пипеток, стеклянные виалывместимостью 2 см3, используемые в хроматографическом анализе, должныбыть одноразовыми.5.1.2 Стеклянную лабораторную посуду моют с использованиеммоющего средства (п.
5.3.5), ополаскивают деионизированной водой и сушатв сушильном шкафу при температуре (100 ± 10) ○С.5.2Приготовлениеисходного,рабочихрастворовиградуировочных образцовВсе растворы готовят в стеклянных виалах вместимостью 2 см3.Рабочие и исходные растворы хранят при температуре не выше 4 ○С.Срок хранения – не более 1 мес.1935.2.1 Приготовление исходного раствора аналита с концентрацией1 мг/см3В стеклянной виале вместимостью 2 см3 взвешивают на лабораторныхвесах точную навеску от 0,9 до 1,1 мг аналита и добавляют пипеточнымдозаторомметанолвколичестве,достаточномдляполученияегоконцентрации 1 мг/см3. Требуемый объем метанола рассчитывают поформуле:(1)где С – концентрация исходного раствора аналита, 1 мг/см3,m – масса навески, мг.5.2.2 Приготовление рабочих растворов аналита5.2.2.1Приготовлениерабочегораствора«A»аналитасконцентрацией 100 мкг/см3.Для приготовления 1 cм3 раствора в стеклянную виалу вместимостью2 см3 вносят микрошприцом 0,1 см3 исходного раствора аналита и 0,9 см3метанола.5.2.2.2Приготовлениерабочегораствора«B»аналитасконцентрацией 10 мкг/см3.Для приготовления 1cм3 раствора в стеклянную виалу вместимостью2 см3 вносят 0,1 см3 раствора аналита «A» и 0,9 см3 метанола.5.2.2.3Приготовлениерабочегораствора«С»аналитасконцентрацией 1 мкг/см3.Для приготовления 1cм3 раствора в стеклянную виалу вместимостью2 см3 вносят 0,1 см3 раствора аналита «B» и 0,9 см3 метанола.5.2.3 Приготовление градуировочных образцовДляприготовленияградировочныхобразцоввцентрифужныепробирки вместимостью 15 см3 взвешивают 100 мг бланковых волос идобавляют микрошприцом раствор «А», «В»или «С» в количестве,указанном в таблице 1 для соответствующего уровня концентрации.194Таблица 1.
Количество вносимых в градуировочные образцы рабочихрастворовУровеньСодержание, нг/мг12345ПримечаниеВид раствораВВВСС52,510,50,1Количество рабочегораствора, мм352,5151Градуировочные образцы готовятся непосредственно перед проведением анализа.Хранению не подлежат.5.3 Подготовка реактивов и материалов5.3.1 Приготовление раствора элюента АВ мерную колбу вместимостью 1000 см3 с помощью мерного цилиндраприливают 800 см3 деионизированной воды и пипеточным дозаторомдобавляют 1 см3 муравьиной кислоты.
Затем доводят объѐм до меткидеионизированнойводой,тщательноперемешиваютипереносятвстеклянную бутыль вместимостью 1000 см3.5.3.2 Приготовление раствора элюента БВ стеклянную бутыль вместимостью 1000 см3 мерным цилиндромвносят 800 см3 метанола и пипеточным дозатором добавляют 1 см3муравьиной кислоты. Затем доводят объѐм до метки метанолом и тщательноперемешивают.5.3.3 Приготовление смеси гексан:этилацетат в соотношении 5:1В стеклянную бутыль вместимостью 1000 см3 мерным цилиндромвносят 500 см3 гексана и 100 см3 этилацетата. Затем смесь тщательноперемешивают.5.3.4 Приготовление 1 N раствора гидроксида калияВ мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 5,6 г гидроксидакалия и добавляют 50 см3 деионизированной воды.
Содержимое колбыперемешивают до полного растворения и доводят объем полученного195раствора деионизированной водой до метки, тщательно перемешивают ипереносят в стеклянную бутыль вместимостью 100 см3.5.3.5 Приготовление хромовой смесиВ стеклянную бутыль вместимостью 500 см3 мерным цилиндромвносят 270 см3 деионизированной воды, добавляют 60 г дихромата калия ирастворяют его при нагревании до 50перемешивании,спомощьюмерного○С. Затем осторожно, прицилиндрадобавляют80см3концентрированной серной кислоты.5.4 Подготовка проб волос5.4.1 Проведение внешнего смываВ центрифужную пробирку вместимостью 15 см3 взвешивают 100 мгволос и пипеточным дозатором добавляют 5 см3 метанола.
Пробиркузакрывают завинчивающейся крышкой и помещают в ультразвуковую банюна 30 минут. Затем метанольный смыв с помощью пастеровской пипеткипереносят в чистую пробирку вместимостью 15 см3 и упаривают досуха втоке азота при температуре не выше 40°С. Сухой остаток перерастворяют всмеси 50 мм3 изопропанола и 50 мм3 гексана и анализируют на наличие ТГК,КНБ и КНД согласно пп. 5.6-5.7.5.4.2 Отмывка волос от внешних загрязнений и потожировыхвыделенийВ пробирку с волосами пипеточным дозатором вносят 5 см3деионизированной воды и 5 мг додецилсульфата натрия, закрываютзавинчивающейся крышкой и выдерживают в ультразвуковой бане в течение30 минут. Затем с помощью пастеровской пипетки водный раствор отбираютв слив, добавляют к волосам 5 см3 деионизированной воды, перемешивают итакже сливают.
Далее в пробирку с волосами пипеточным дозатором вносят5 см3 метанола, выдерживают ее в ультразвуковой бане в течение 30 минут иотбирают метанол с помощью пастеровской пипетки в органический слив.После метанола в пробирку к волосам добавляют 5 см3 хлороформа,выдерживают в ультразвуковой бане в течение 30 минут и отбирают196хлороформ с помощью пастеровской пипетки в органический слив. Затем кволосам добавляют 5 см3 смеси гексан:этилацетат (5:1, см. п. 5.3.3) ивыдерживают в ультразвуковой бане в течение 30 минут.
Полученный смывпереносят в чистую полимерную пробирку вместимостью 15 см3, упариваютупаривают досуха в токе азота при температуре не выше 40°С, затем сухойостаток перерастворяют в смеси 50 мм3 изопропанола и 50 мм3 гексана ианализируют на наличие ТГК, КНБ и КНД согласно пп. 5.6-5.7.5.4.3 Извлечение аналитов из внутренней области волос5.4.3.1 Щелочной гидролизВ центрифужную пробирку с волосами, отмытыми от постороннихпримесей согласно п. 5.4.2, пипеточным дозатором вносят 3 см3 1 N растворагидроксида калия, пробирку закрывают завинчивающейся крышкой иперемешивают ее содержимое на мешалке в течение 1 минуты. Затемпробирку помещают в сушильный шкаф и выдерживают 15 минут притемпературе 95ºС.5.4.3.2 Жидкость-жидкостная экстракцияВ пробирку с полученным в п.
5.4.3.1 гидролизатом, охлажденному докомнатнойтемпературы,добавляют4см3смесигексан:этилацетат,приготовленной согласно п. 5.3.3, закрывают ее завинчивающейся крышкойи перемешивают содержимое на мешалке в течение 20 минут. Затемпробирку центрифугируют в течение 2 минут при 10000 об/мин до полногорасслоения водного и органического слоев. Органический слой переносят спомощью пастеровской пипетки в чистую пробирку вместимостью 15 см3 иупаривают досуха в токе азота при температуре не выше 40°С. К сухомуостатку добавляют смесь 50 мм3 изопропанола и 50 мм3 гексана. Содержимоепробиркиперемешивают на шейкере в течение 1 минуты и переносятпипеточным дозатором в виалу вместимостью 2 см3, содержащуюстеклянную вставку вместимостью 0,2 см3 и анализируют на ТГК согласнопп.
5.6-5.7. Оставшийся после экстракции гидролизат волос доводят до рН 23 с помощью концентрированной соляной кислоты. Контроль рН раствора197проводят с помощью универсальной индикаторной бумаги. После этого впробиркуспробойгексан:этилацетат,пипеточнымприготовленнойдозаторомсогласновносятп.4 см35.3.3,смесизакрываютзавинчивающейся крышкой и перемешивают содержимое на мешалке втечение 20 минут. Затем пробирку центрифугируют в течение 2 минут при10000 об/мин до полного расслоения водного и органического слоев.Органический слой переносят с помощью пастеровской пипетки в чистуюпробирку вместимостью 15 см3 и упаривают досуха в токе азота притемпературе не выше 40°С.
К сухому остатку добавляют смесь 50 мм3изопропанола и 50 мм3 гексана. Содержимое пробирки перемешивают нашейкере в течение 1 минуты и переносят пипеточным дозатором в виалувместимостью 2 см3, содержащую стеклянную вставку вместимостью 0,2 см3и анализируют на наличие ТГКК согласно пп. 5.6-5.7.5.5 Подготовка ВЭЖХ-МС/МС системыВЭЖХ-МС/МС систему с установленной колонкой готовят к работе всоответствии с Руководством по эксплуатации.5.6 Условия хроматографического разделенияПараметры хроматографической системы приведены в таблице 2.Условия хроматографического разделения приведены в таблице 3.Таблица 2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
