Отзыв официального оппонента 1 (1091815)
Текст из файла
ОТЗЫВ ОФИЦИАЛЬНОГО ОППОНЕНТА на диссертационную работу Кисляковой Яны Юрьевны «Разработка методик хроматомасс-спектрометрического определения наркотических средств, психотропных веществ и лекарственных препаратов в биообъектах» на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 02.00.02— Аналитическая химия официальный оппонент: Савельева Елена Игоревна, доктор химических наук, заведующая лабораторией аналитической токсикологии Федерального государственного унитарного предприятия «Научно-исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» Федерального медико-биологического агентства (ФГУП «НИИ ГПЭЧ» ФМБА России), 188 663, Ленинградская область, Всеволожский район, ст.
К в.«р .М9З. - а:,':..Ю .«йарцЬд,», Гф <Ни)4аа-Лп~бг4О Немедицинское применение физиологически активных веществ (ФАВ) является острой социальной проблемой. Эффективность мер парирования этой угрозы в значительной мере определяется возможностями химико-токсикологического анализа (ХТА). Расширение панели анализируемых биообразцов и определяемых в них ФАВ, а также продуктов их биотрансформации, является актуальной задачей. Совершенствование научно-методических основ ХТА в первую очередь заключается в развитии методов и средств химического анализа биологических образцов на присутствие в них ФАВ или продуктов их метаболизма. Сорбционные взаимодействия, лежащие в основе удерживания аналитов биоматрицами, а также разрабатываемых аналитиком процедур извлечения, концентрирования, очистки и хроматографического разделения аналитов, исследуются в рамках теории методов аналитической химии, таким образом, все разделы диссертации, выполненной на актуальную тему, соответствуют паспорту специальности «Аналитическая химия».
Диссертация имеет традиционную структуру: содержит введение, литературный обзор (глава 1), экспериментальную часть (глава 2), представленные в последующих главах (3, 4, 5) результаты исследований и их обсуждение, выводы, список литературы (146 источников) и приложение, представляющее собой сборник методик.
Литературный обзор содержит необходимую информацию о структурных особенностях волос как биоматрицы, механизмах проникновения и формах нахождения в них ксенобиотиков, дифференцированным подходам к оценке внешних и внутренних (инкорпорированных) концентраций ксенобиотиков в волосах, существующих способах подготовки к анализу и собственно анализа волос на содержание ФАВ. Сведения из разных литературных источников суммированы, всесторонне оценены и критически обсуждены. Представление этого материала в виде таблиц позволяет быстро ориентироваться в выборе того или иного аналитического метода в целом, а также растворителя, картриджа, дериватизирующего агента, в частности, при решении конкретной аналитической задачи.
В литературном обзоре также приводятся сведения об известных процедурах определения некоторых ФАВ (амфетамина, морфина, кодеина и ряда природных каннабиноидов) в моче и крови. Диссертация выполнена на аналитической платформе хроматомасс-спектрометрии. В экспериментальной части приведена необходимая информация о методах анализа, использованном оборудовании, расходных материалах и реагентах. Волосы как объект ХТА способны нести информацию не только о факте экспозиции человека с ксенобиотиком, но и о сценарии экспозиции. При этом волосы являются очень сложным объектом для анализа ввиду того, что характеризуются не только неоднородным, но и чрезвычайно вариативным составом.
Разработка процедур извлечения ксенобиотиков из гетерогенной биоматрицы, удерживающей их за счет разных механизмов с непрогнозируемым относительным вкладом каждого из них в процессы сорбции/десорбции, - нетривиальная задача, не имеющая очевидного решения. В этой связи следует поддержать план исследования, состоящий из двух последовательных этапов: изучение закономерностей сорбции/десорбции ФАВ матрицей волос и далее с учетом полученной информации разработка методик дифференцированного определения ФАВ, сорбированных внешней поверхностью волос и ФАВ, поступающих в волосы эндогенным путем.
Третья глава диссертации, посвященная изучению адсорбции экзогенных веществ на волосах, содержит наибольшее количество новых научных данных. Ранее исследовали адсорбцию ксенобиотиков на тонких слоях меланина, нанесенных на подложку, меланиновых гранулах, кератиновых порошках и пленках. В диссертации Я.Ю.Кисляковой в качестве сорбента (адсорбента) исследованы не модельные системы, а непосредственно измельченные волосы. Русые и темные волосы характеризовались различной пористостью и различным содержанием не только меланина (русые и темные), но и структурой и количеством кератина (волосы от разных людей). Эта модель является существенно более сложной в сравнении с известными экспериментами, в которых исследовали темные и седые волосы одного и того же человека, отличавшиеся только содержанием меланина. Несмотря на предельную сложность экспериментальной модели, удалось установить общие закономерности для сорбции )ЖН-210 из метанольных растворов на всех исследованных образцах волос, а именно: наличие трех типов адсорбционных центров на поверхности измельченных волос, характеризующихся быстрыми, средними и медленными скоростями адсорбции.
Наличие гетерогенных центров адсорбции на реальных образцах волос предполагало удовлетворительное описание процесса моделью Фрейндлиха. Предположение подтверждено экспериментально. В рамках стройной гипотезы автору удалось предположить механизм, в соответствии с которым осуществляется каждый вид сорбции. Интересно, что в области высоких концентраций скорость адсорбции на светлых волосах выше, но после установления равновесия большее количество сорбата удерживается темными волосами. В области более низких концентраций хемосорбция меланином, по-видимому,не вносит определяющего вклада в общее количество удерживаемого сорбата.
Дальнейшее развитие этих исследований, как мы надеемся, может оказаться полезным при разработке инновационных подходов не только к определению ксенобиотиков в волосах, но и к трактовке результатов этих определений. Глубокое исследование аналитических особенностей волос как биоматрицы позволило автору внести свой вклад в разработку новых процедур анализа внешней поверхности волос на наличие некоторых представителей группы синтетических каннабиноидов: предложены четыре методики отмывки внешней поверхности волос и обоснованно выбрана оптимальная.
Разработана процедура последовательного определения каннабиноидов, адсорбированных на внешней поверхности волос и инкорпорированных в матрицу волос. Разработаны оптимизированные версии определения некоторых ФАВ в моче и цельной крови, позволяющие добиться более низких, в сравнении с существующими, пределов обнаружения. Достоверность результатов работы подтверждается использованием современного сертифицированного оборудования, проведением валидационных испытаний разработанных методик и их успешной апробацией при проведении ХТА. Практические результаты работы реализованы в пакете методик, устанавливающих определение в биологических образцах различных ФАВ, актуальных для криминалистической экспертизы.
По содержанию работы соискателю может быть адресован ряд замечаний: 1. Перечень публикаций по теме диссертации (автореферат, стр.27) свидетельствует об их достаточном количестве для кандидатской диссертации, однако он не полон. На стр.б автореферата указано, что по теме работы опубликовано б научных статей в журналах, рекомендованных ВАК. 2. В таблице 1 автореферата (3.2.1 диссертации, далее для краткости приводится нумерация только из автореферата) допущена опечатка в размерности величин: повидимому, следует читать мкмоль/г вместо ммоль/г 3. Независимо от того, в ходе каких исследований и с какой целью получены экспериментальные данные, они должны быть представлены в рамках доверительного интервала.
Тогда будет понятно, какие отличия между величинами считать значимыми, а какие нет, и с какой точностью допустимо приводить экспериментальные данные. Это относится к таблицам 1, 3, 4, рисункам 8-11 (приводится нумерация для автореферата). 4. С фразой «адсорбция ЛЪ'Н-210 из раствора на реальных образцах волос, моделирующая процесс попадания экзогенных соединений в их структуру из кровотока» (автореферат, стр.13) трудно согласиться. Из кровотока экзогенные соединения попадают в клетки в результате различных процессов, в том числе и меланогенеза, но никак не вследствие сорбции. 5.
В таблице 5 приведены результаты тестов «внесено-найдено». Извлечение практически полное, в то время как степени извлечения аналитов, установленные ранее при разработке методики, достаточно низкие. Видимо, проводился пересчет с учетом коэффициентов потерь. К сожалению, этой важной информации не нашлось места не только в автореферате, но и в диссертации. б.
При извлечении щелочным гидролизом каннабимиметиков, относящихся к сложным эфирам (РВ-22, РВ-22Р, ХМ-201), должно происходить их омыление. В каком виде детектировали аналиты? В виде продуктов омыления? Об этом также в диссертации ничего не сказано. 7. В приложении к диссертации приведено 8 методик. При их изложении допущены неточности, опечатки. Например, указано, что «содержание аналитов определяют по площадям хроматографических пиков методом внешнего стандарта» (стр 148).
Далее описывается приготовление раствора внутреннего стандарта (стр.152) или в ВЭЖХ-МС методике описывается градуировка ГХ-МС системы (стр 172). Не указаны соавторы ни одной методики. Если идентификация аналитов проводится без образца сравнения, лучше ориентироваться не на абсолютное время удерживания, а на относительное к внутреннему стандарту или (еще лучше) индекс удерживания. Если образец сравнения доступен, то 3 требуется совпадение не с табличными величинами хроматографических и спектральных характеристик, а с этими характеристиками, полученными для образца сравнения в ходе анализа. Опять же, если стандартный образец доступен, то кроме бланковой и рабочей пробы на подтверждающем этапе необходимо рассмотреть масс-хроматограмму для образца сравнения (это может быть как градуировочный раствор, так и заведомо положительный образец биопробы).
8. Поскольку ключевым методом в работе является хроматомасс-спектрометрия, следует придерживаться терминологии, рекомендуемой ВМС О. В частности, не родительские и дочерние ионы, а ионы-прекурсоры и продукт-ионы, мониторинг не единичных, а выбранных реакций. Возможно, некоторые замечания обусловлены тем, что оппонент недостаточно знаком с протоколом проведения ХТА в криминалистике, который может существенно отличаться от стандартного. В любом его обличии ХТА может рассматриваться как одно из наиболее сложных приложений аналитической химии, аккумулирующее все последние достижения этой науки и, в то же время, не укладывающееся в рамки ее канонических подходов.
Определение заранее неизвестных аналитов должно проводиться в краткие сроки в сложных биологических матрицах. В рамках одной методики необходимо определять как можно больше аналитов, относящихся к различным классам химических соединений. Оптимизация условий подготовки к анализу и собственно анализа биологических образцов на присутствие непрерывно расширяющихся групп актуальных для ХТА соединений, как правило, проводится на основе нежестко регламентированного компромиссного решения. Эти соображения, как нам кажется, необходимо учитывать при оценивании данной работы, имеющей несомненные достоинства.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
