Диссертация (1091824), страница 31
Текст из файла (страница 31)
Параметры хроматографической системыХроматографическая колонкаZorbax Eclipse Plus C182.1 мм150 мм, 1.8 мкмТемпература колонки (○С)40Скорость потока элюента, см3/мин0,3Метод ввода пробыавтоматическийОбъем вводимой пробы, мм31198Таблица 3. Условия хроматографированияВремя, минСодержание элюента Б, %0,0703,01006,01006,17010,0705.7 Условия масс-спектрометрического детектированияПараметры масс-спектрометрического детектирования приведены втаблице 4. Время удерживания целевых аналитов, а также ихионыпрекурсоры, дочерние ионы и энергии соударения, используемые прианализе, приведены в таблице 5.Таблица 4. Условия масс-селективного детектированияСпособ ионизацииПолярность детектируемых ионовТемпература капилляраНапряжение на капилляре (Spray Voltage)Режим регистрацииТемпература испарителя (Vaporizer Temp)Давление газа-распылителя (Sheath Gas Pressure)Давление вспомогательного газа (Aux Gas Pressure)Количество микроскановРазрешение на первом квадруполе (Q1)Разрешение на втором квадруполе (Q3)Время сканирования (Scan time)199электрораспылениеположительная/отрицательная350 C4000 ВМониторинг выбранныхреакций (SRM)300 C3510100,5 а.е.м.0,5 а.е.м.0,01 с (для всех дочернихионов)Таблица 5.
Параметры детектирования аналитовИсследуемое веществоRT,мин«Прекурсорион»ТГК4,37315,2 [M+H]+КНБКНД11-нор-∆9тетрагидроканнабиноловая кислота4,85311,2 [M+H]+5,05+315,2 [M+H]4,22-Энергиясоударения, В302520Дочерние ионы,m/z123193235Соотношенияинтенсивностей, %3610025303030251952052082232314241003025201231932353010024382828107191245847100343,2 [M-H]5.8 Проведение скриннингового анализа5.8.1 Выполнение анализаПробы, полученные согласно п. 5.4, анализируют при условиях,описанных в п.
5.6 и 5.7.В случае идентификации целевых аналитов в пробах по критериям,приведенным в п. 6.1 настоящей методики, необходимо дополнительновыполнить следующие процедуры:- подтверждение наличия аналита в пробе (п. 5.8.2)- построение градуировочной кривой (п. 5.8.3)- определение количества выявленного аналита (п. 6.2).5.8.2 Процедура подтверждения наличия аналита в пробеДля подтверждения присутствия целевого аналита, выявленного впробе образца, проводят исследование его новой пробы и бланковой пробы вследующей последовательности:1. Бланковая проба волос, т.е.
образец, заведомо не содержащийцелевого аналита.2. Проба анализируемого образца волос.200Пробоподготовка проб осуществляется в соответствии с п. 5.4,параметры оборудования устанавливаются в соответствии с п. 5.6, а анализпроводится в соответствии с п. 5.7 настоящей методики.В первой пробе хроматографический пик подтверждаемого аналитадолженотсутствовать.Во второй–долженопределяться.Аналитидентифицируется по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики.5.8.3 Построение градуировочной кривойПриготовленные градуировочные образцы(см. п.
5.2.3) готовят канализу согласно п. 5.4.3 и анализируют при условиях, описанных в п. 5.5 –5.7, по три раза каждый. Полученные хроматограммы обрабатывают сиспользованием программного обеспечения «Xcalibur». Измеряют площадипиков аналита в относительных единицах. С использованием средствпрограммного обеспечения строят градуировочную зависимость площадипика аналита от его концентрации в градировочных пробах. Правильностьидентификации проверяют по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящейметодики. Коэффициент линейной корреляции полученной градуировочнойзависимости должен быть не менее 0,99.При невыполнении указанных в п. 6.1 условий выясняют причины,приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
Затемготовят новый набор градуровочных проб и повторяют градуировку.6 Обработка результатов6.1 Критерии идентификации аналитаЦелевой аналит считают идентифицированным в том случае, если:- абсолютное время удерживания хроматографического пика аналита впробе отличается от времени удерживания, приведенного в таблице 5, менеечем на 10 с;- соотношение сигнал/шум (S/N) для пика аналита не менее 3:1;- соотношения интенсивностей подтверждающих дочерних ионов длямасс-спектра определяемого аналита соответствуют данным таблицы 5.2016.2 Количественный расчетХроматограммуобрабатываютсиспользованиемпрограммногообеспечения «Xcalibur».
В относительных единицах измеряют площадь пикааналита в пробе и на основании полученной согласно п. 5.8 градуировочнойзависимости рассчитывают содержание аналита в анализируемом образце.7 Оформление результатов анализаРезультаты анализа оформляют записью в рабочем журнале поустановленной форме и удостоверяются лицом, проводившим исследования,и утверждаются начальником лаборатории.8 Требования безопасности охраны окружающей среды8.1 Привыполнениианализовсоблюдаюттребованиятехникибезопасности при проведении работ с реактивами по ГОСТ 12.1.007.8.2 Требования техники безопасности при работе с электроустановками- по ГОСТ 12.1.019.8.3 Требованияорганизацииобученияработающихправиламбезопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.8.4 Помещения для выполнения работ должны быть оборудованыприточно-вытяжной вентиляцией, обеспечивающей требуемую кратностьобмена воздуха на рабочих местах по ГОСТ 12.4.021.
Содержание вредныхвеществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленныхГОСТ 12.1.005.8.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиямпожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и быть оборудованным средствамипожаротушения по ГОСТ 12.4.009.8.6 Нормирование по оценке световой среды осуществляется поотраслевомубазовомудокументуСНиП23-05-95«Естественноеиискусственное освещение».8.7 При установке, монтаже и эксплуатации ВЭЖХ-МС/МС следуетсоблюдать ПБ 03-576-03 «Правила устройства и безопасной работы сосудов,работающих под давлением».2028.8 Исполнители должны быть проинструктированы по лабораторнойинструкции о мерах техники безопасности и допущены к проведению работ сповышенной опасностью.8.9 Производственные отходы собираются в специальные емкости иуничтожаются установленным порядком.9 Требования к квалификации операторовК выполнению работ допускаются лица не моложе 21 года с высшимили средним специальным образованием, прошедшие производственноеобучение, проверку знаний, имеющие практический опыт работы вхимических лабораториях с реактивами и не имеющие медицинскихпротивопоказаний.
Оператор должен знать и соблюдать настоящую методикуи руководства по эксплуатации средств измерений.10 Требования к условиям измеренийПри подготовке к выполнению измерений и при их проведениинеобходимо соблюдатьусловияэксплуатациисредствизмеренийиоборудования, изложенные в руководствах (инструкциях) по эксплуатации.Температураокружающего воздухавпомещении,вкоторомпроводятся измерения, должна находиться в диапазоне от 15 до 25 ºС.Относительная влажность воздуха не выше 80отсутствовать пары органических растворителей.203. В помещении должныМетодика измерения 11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловой кислоты вмоче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии сприменением тандемного масс-селективного детектирования1 Область применения и принцип методаНастоящий документ устанавливает методику выполнения измерений11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловойкислотывмочеметодомвысокоэффективной жидкостной хроматографии с применением тандемногомасс-селективного детектирования.Предел обнаружения 11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловой кислоты вмоче не более 10 нг/см3.Метод идентификации 11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловой кислоты вмоче основан на сравнении совокупности экспериментально полученныххроматографических и масс-спектрометрических характеристик образцовмочи с табличными данными.Исследуемое соединение извлекают из мочи методом жидкостьжидкостной экстракции после щелочного гидролиза и проводят измерениеего хроматографических и масс-спектрометрических характеристик.
Массспектрометрическийанализосуществляетсяврежимемониторингавыбранных реакций (SRM).Содержание аналита определяют по площади хроматографическогопика методом внешнего стандарта.Продолжительность проведения одного анализа составляет не более4 часов без учета времени на пробоотбор.При составлении настоящей методики были использованы следующиедокументы:- ГОСТ Р 8.563-2009 Методики (методы) измерений;- ГОСТ Р 1.5-2012 Общие требования к построению, изложению,оформлению, содержанию и обозначению.2042 Нормативные ссылкиВ настоящем методике использованы ссылки на следующие документы:ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинскиелабораторные. Общиетехнические требования.ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть I.Метрологические и технические требования.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
