Диссертация (1091824), страница 29
Текст из файла (страница 29)
5.4, анализируют при условиях,описанных в п. 5.6 и 5.7.В случае идентификации целевых аналитов во внутренних областяхпроб по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики, необходимодополнительно выполнить следующие процедуры:- подтверждение наличия аналита в пробе (п. 5.8.2)- построение градуировочной кривой (п.
5.8.3)- определение количества выявленного аналита (п. 6.2).5.8.2 Процедура подтверждения наличия аналита в пробеДля подтверждения присутствия целевого аналита, выявленного впробе образца, проводят исследование его новой пробы и бланковой пробы вследующей последовательности:1. Бланковая проба волос, т.е. образец, заведомо не содержащийцелевого аналита.2. Проба анализируемого образца волос.185Пробоподготовка проб осуществляется в соответствии с п. 5.4.3,параметры оборудования устанавливаются в соответствии с п.
5.6, а анализпроводится в соответствии с п. 5.7 настоящей методики.В первой пробе хроматографический пик подтверждаемого аналитадолженотсутствовать.Во второй–долженопределяться.Аналитидентифицируется по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики.5.8.3 Построение градуировочной кривойПриготовленные градуировочные образцы(см. п. 5.2.3) готовят канализу согласно п. 5.4.3 и анализируют при условиях, описанных в п.
5.5 –5.7, по три раза каждый. Полученные хроматограммы обрабатывают сиспользованиемпрограммногообеспечения«Chemstation».Измеряютплощади пиков аналита в относительных единицах. С использованиемсредств программного обеспечения строят градуировочную зависимостьплощади пика аналита от его концентрации в градировочных пробах.Правильность идентификации проверяют по критериям, приведенным вп. 6.1 настоящей методики.
Коэффициент линейной корреляции полученнойградуировочной зависимости должен быть не менее 0,99.При невыполнении указанных в п. 6.1 условий выясняют причины,приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Затемготовят новый набор градуровочных проб и повторяют градуировку.6 Обработка результатов6.1 Критерии идентификации аналитаЦелевой аналит считают идентифицированным в том случае, если:- абсолютное время удерживания хроматографического пика аналита впробе отличается от времени удерживания, приведенного в таблице 5, менеечем на 10 с;- соотношение сигнал/шум (S/N) для пика аналита не менее 3:1;- соотношения интенсивностей подтверждающих дочерних ионов длямасс-спектра определяемого аналита соответствуют данным таблицы 5.1866.2 Количественный расчетХроматограммуобрабатываютсиспользованиемпрограммногообеспечения «Chemstation».
В относительных единицах измеряют площадьпика аналита в пробе и на основании полученной согласно п. 5.8градуировочнойзависимостирассчитываютсодержаниеаналитаванализируемом образце.7 Оформление результатов анализаРезультаты анализа оформляют записью в рабочем журнале поустановленной форме и удостоверяются лицом, проводившим исследования,и утверждаются начальником лаборатории.8 Требования безопасности охраны окружающей среды8.1 Привыполнениианализовсоблюдаюттребованиятехникибезопасности при проведении работ с реактивами по ГОСТ 12.1.007.8.2 Требования техники безопасности при работе с электроустановками- по ГОСТ 12.1.019.8.3 Требованияорганизацииобученияработающихправиламбезопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.8.4 Помещения для выполнения работ должны быть оборудованыприточно-вытяжной вентиляцией, обеспечивающей требуемую кратностьобмена воздуха на рабочих местах по ГОСТ 12.4.021.
Содержание вредныхвеществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленныхГОСТ 12.1.005.8.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиямпожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и быть оборудованным средствамипожаротушения по ГОСТ 12.4.009.8.6 Нормирование по оценке световой среды осуществляется поотраслевомубазовомудокументуСНиПискусственное освещение».18723-05-95«Естественноеи8.7 При установке, монтаже и эксплуатации ВЭЖХ-МС/МС следуетсоблюдать ПБ 03-576-03 «Правила устройства и безопасной работы сосудов,работающих под давлением».8.8 Исполнители должны быть проинструктированы по лабораторнойинструкции о мерах техники безопасности и допущены к проведению работ сповышенной опасностью.8.9 Производственные отходы собираются в специальные емкости иуничтожаются установленным порядком.9 Требования к квалификации операторовК выполнению работ допускаются лица не моложе 21 года с высшимили средним специальным образованием, прошедшие производственноеобучение, проверку знаний, имеющие практический опыт работы вхимических лабораториях с реактивами и не имеющие медицинскихпротивопоказаний.
Оператор должен знать и соблюдать настоящую методикуи руководства по эксплуатации средств измерений.10 Требования к условиям измеренийПри подготовке к выполнению измерений и при их проведениинеобходимо соблюдатьусловияэксплуатациисредствизмеренийиоборудования, изложенные в руководствах (инструкциях) по эксплуатации.Температураокружающего воздухавпомещении,вкоторомпроводятся измерения, должна находиться в диапазоне от 15 до 25 ºС.Относительная влажность воздуха не выше 80отсутствовать пары органических растворителей.188.
В помещении должныМетодика химической идентификации тетрагидроканнабинола,каннабинола, каннабидиола и 11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловойкислоты в волосах методом высокоэффективной жидкостнойхроматографии с применением тандемного масс-селективногодетектирования1 Область применения и принцип методаНастоящий документ устанавливает методику выполнения химическойидентификации тетрагидроканнабинола, каннабинола, каннабидиола и 11нор-∆9-тетрагидроканнабиноловойкислотывволосахметодомвысокоэффективной жидкостной хроматографии с применением тандемногомасс-селективного детектирования.Предел обнаружения 11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловой кислоты вволосах не более 50 пг/мг.Метод идентификации тетрагидроканнабинола (ТГК), каннабинола(КНБ), каннабидиола (КНД) и 11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловой кислоты(ТГКК) в волосах основан на сравнении совокупности экспериментальнополученных хроматографических и масс-спектрометрических характеристикобразцов волос с табличными данными.Исследуемые соединения извлекают из волос методом жидкостьжидкостной экстракции после щелочного гидролиза и проводят измерение иххроматографических и масс-спектрометрических характеристик.
Массспектрометрическийанализосуществляетсяврежимемониторинга11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловойкислотывыбранных реакций (SRM).Содержаниеопределяют по площади хроматографического пика методом внешнегостандарта.Продолжительность проведения одного анализа составляет не более3 часов без учета времени на пробоотбор.189При составлении настоящей методики были использованы следующиедокументы:- ГОСТ Р 8.563-2009 Методики (методы) измерений;- ГОСТ Р 1.5-2012 Общие требования к построению, изложению,оформлению, содержанию и обозначению.2 Нормативные ссылкиВ настоящем методике использованы ссылки на следующие документы:ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинскиелабораторные.
Общиетехнические требования.ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть I.Метрологические и технические требования. Испытания.ТУ 25-2021.003-88 Термометры лабораторные. Технические условия.ТУ 25-11.1513-79 Приборы гидрометеорологические. Техническиеусловия.ТУ 6-21-12-94 Аргон газообразный (сжатый). Технические условия.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы иматериалыЖидкостный хроматограф «1290 Infinity», оборудованный системойавтоматического ввода пробы фирмы «Agilent Technologies» (США),соединенный с квадрупольным масс-спектрометром «Thermo Scientific TSQQUANTUM».Весы лабораторные ABT – 5M, с пределом допускаемой абсолютнойпогрешности не более ± 0,01 мг, фирмы Kern (Чехия).Дозаторы пипеточные переменного объема (0,01 - 5 см3), фирмы«Biohit» (Финляндия), ГОСТ 28311-89.Микрошприц переменного объема (0,1 - 100 см3), фирмы «AgilentTechnologies» (США).Термометр ртутный лабораторный,температуры 0,5°С, ТУ 25-2021.003-88.190спогрешностью измеренияБарометр-анероид метеорологический БАММ-1, с погрешностьюизмерения давления 0,1 кРа, ТУ 25-11.1513-79.ЭВМ совместимая с программным обеспечением для управления иобработки данных «Xcalibur» фирмы «Thermo Fisher Scientific» (США) и«ChemStation» фирмы «Agilent Technologies» (США).Минишейкер Reax control со сменными приспособлениями дляустановки емкостей различного диаметра, фирмы «Heidolph» (Германия).Центрифуга Centrifuge 5810R, фирмы «Eppendorf» (Германия).Испаритель под током азота D-33649 Bielefild, фирмы «LiebischLabortechnik» (Германия).Мешалка Reax 2, фирмы «Heidolph» (Германия).Сушильный шкаф FD 115, фирмы «BINDER» (США).Ультразвуковая баня DT 102 H, фирмы «BANDELIN electronic»(Германия).Станция водоподготовки Milli-Q Integral 3, обеспечивающая получениедеионизированной воды с остаточным сопротивлением 18 МОм/см (25 С) исодержанием общего углерода < 30 ppb (мкг/дм3), фирмы «Millipore»(Франция).Пробирки центрифужные вместимостью 15 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат.
№ 078.02.001.Пробирки центрифужные вместимостью 50 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 078.02.005.Полимерный контейнер вместимостью 25 см3, фирмы «Acrus»(Германия), кат. 7.077661.Виалыстеклянныевместимостью2 см3сзавинчивающейсяполимерной крышкой, фирмы «Agilent Technologies» (США), кат. № 51902240.Вставки в виалы вместимостью 0,25 см3 с пружиной, фирмы «Restek»(США), кат. № 21776.191Мерная колба вместимостью 1000 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 013.01.901.Мерная колба вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
