Диссертация (1091824), страница 25
Текст из файла (страница 25)
К взвешенному образцу волосдобавляют с помощью шприца-дозатора 10 мкл раствора внутреннегостандарта. В качестве внутреннего стандарта используют метанольныйраствор дифениламина (далее – ДФА) с концентрацией 100 мкг/мл. Кполученному образцу волос добавляют пипеточным дозатором 2 см3 1,5 Nраствора КОН и перемешивают на мешалке 1 минуту. Затем полученнуюсмесь выдерживают в сушильном шкафу при температуре 60ºС в течениечаса.
После гидролиза смесь охлаждают и пипеточным дозатором добавляют3 мл смеси растворителей гексан:этилацетат в соотношении 2:1 (v:v),приготовленную согласно п. 5.3.2. Экстракцию проводят на мешалке втечение 20 минут, после чего пробирку с образцом центрифугируют при15410 000 об/мин в течение 2 минут. Верхний слой отбирают в чистуюполимерную пробирку и упаривают досуха в токе азота в присутствии100 мкл 0,1% соляной кислоты в метаноле при температуре 40ºС. К сухомуостатку пробы добавляют 50 мкл MBTFA и выдерживают в сушильномшкафу при температуре 80°С в течение 30 минут.5.5 Подготовка ГХ-МС системыГХ-МС систему с установленной колонкой готовят к работе всоответствии с Руководством по эксплуатации.Приустановкеновойкапиллярнойколонкипроводятеекондиционирование при расходе газа-носителя (гелия) через колонку 1,0см3/мин и температуре термостата колонки программируемой от 40°С до320°С со скоростью 10 °С/мин и выдерживается затем при 320°С в течение120 минут.5.6 Условия хроматографического разделенияПараметры хроматографической системы приведены в таблице 2.Таблица 2.
Параметры и условия ГХ.Хроматографическая колонкаDB-5MSНачальная температура термостата колонки60 °С;- скорость подъема температуры термостатаколонки до промежуточной температуры50 °С/мин до 100 °С;- плато промежуточной температурытермостата0,5 мин;- скорость подъема температуры термостатаколонки после промежуточной температуры15 °С/мин до 180 °С- плато промежуточной температуры4 минтермостата- скорость подъема температуры термостата10 °С/мин до 260 °Сколонки после промежуточной температуры- плато промежуточной температуры1550,5 минтермостата- скорость подъема температуры термостата25 °С/минколонки после промежуточной температуры- конечная температура термостата колонки320 °С;- плато конечной температуры термостатаколонки6 мин.- объемная скорость гелия через колонку1,26 см3/мин;Метод ввода пробыАвтоматическийОбъем вводимой пробы1 мм3Температура испарителя270 °СРежим работы испарителяс делением потока 10:15.7 Условия масс-спектрометрического детектированияПараметры масс-спектрометрического детектирования в режиме Scanприведены в таблице 3.Таблица 3.
Условия масс-селективного детектирования в режиме ScanТемпература интерфейса270 °С;- время задержки на выход растворителя4 мин;- детектированиев режиме полногоионного сканирования- диапазон сканируемых масс43-600 а.е.м.Параметры масс-спектрометрического детектирования в режиме SIMприведены в таблице 4. Температура интерфейса и время задержки нарастворитель совпадают с аналогичными параметрами режима Scan.Таблица 4.
Параметры настройки масс-спектрометра в режиме SIM№сегмента1Время началасканирования,мин7.00Анализируемое всегменте веществоАмфетамин ТФА,МетамфетаминТФА156Сканируемыеионы139.9, 118.1, 91.0,153.9, 118.0, 109.9Для210.50Мефедрон ТФА,ДФА,МДА ТФА313.00МДМА ТФА,МДЕА ТФА4516.0019.00PCPМДПВ,Морфин 2ТФА,Метадон,Карбамазепин,Амитриптилин6721.5524.00КодеинФампрофазон,Стрихнин,Фентанилдетектированияиспользуют119.0, 77.1, 147.0,169.1, 168.0,167.0, 134.9,162.0, 274.9154.0, 162.0,134.9, 168.0,162.0, 139.9200.1, 242.1, 186.1126.0, 127.0, 96.0,364.1, 477.0,72.0, 223.0, 294.0,192.9, 236.0,164.9,58.0, 202.0, 215.0299.1, 229.1, 282.0286.1, 229.1,287.1,334.0, 335.0,162.0,245.1, 188.9, 146.0одновременнообарежимасканирования.В таблице 5 представлены времена удерживания, температура выхода сколонки и другие свойства аналитов, получаемые при проведениихроматографичекого разделения согласно п.
5.6.Таблица 5. Свойства анализируемых веществНазваниевеществаАмфетамин ТФАМетамфетаминТФАМДА ТФАМДМА ТФАМДЕА ТФАМДПВМолекулярнаямасса231.21245.24179.22289.25303.28275.15ТемператуВремяра выходавыхода*,*с колонки ,минºССтимуляторыC11H12 F3N1627,69OC12H14 F3N1809,15OC12H12 F3N22212,69O3C13H14 F3N23215,05O3C14H16 F3N23515,42O3C16H21NO326120,51Бруттоформула157Основныеионы140, 118154, 118162, 135154, 162168, 162126, 127Мефедрон ТФА273.10ФампрофазонСтрихнин377.52334.17КодеинМорфин 2ТФА299.36ФентанилМетадон336.47309.21PCP243.39АмитриптилинКарбамазепин277.40236.27477,10C13H14 F3N180O2C24H31N3O320C21H22N2O2320АнальгетикиC18H21NO3300C21H17 F6N263O5C22H28N2O320C21H27NO258ГаллюциногеныC17H25N256АнтидепрессантыC20H23N282C15H12N2O25811,16204, 11926,5424,81286, 229334, 16723,55299, 229364, 47721,1625,2020,24245, 18972, 29417,14242, 20021,1419,5858, 202193, 1655.8 Проведение скриннингового анализа5.8.1 Выполнение анализаПробу, полученную согласно п.
5.4, анализируют при условиях,описанных в п. 5.6 и 5.7.В случае идентификации одного или нескольких целевых аналитов впробе по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики, необходимодополнительно выполнить следующие процедуры:- подтверждения наличия аналитов в пробе (п. 5.8.2)- построения градуировочной кривой (п. 5.8.3)- определения количества выявленных аналитов (п. 6.2).5.8.2 Процедура подтверждения наличия аналита в пробеДля подтверждения присутствия целевого аналита, выявленного впробе образца, проводят исследование его новой аликвоты и бланковойпробы в следующей последовательности:1.
Бланковая проба волос, т.е. образец, заведомо не содержащийцелевого аналита.2. Проба анализируемого образца волос.158Пробоподготовка проб осуществляется в соответствии с п. 5.4,параметры оборудования устанавливаются в соответствии с п. 5.6, а анализпроводится в соответствии с п. 5.7 настоящей методики.В первой пробе хроматографический пик подтверждаемого аналитадолжен не определяться. Во второй – должен определяться. Аналитыидентифицируются по критериям, приведенным в п.
6.1 настоящей методики.5.8.3 Градуировка ГХ-МС системыС приготовленными по п. 5.2.3 градуировочными образцами проводятпробоподготовку согласно п. 5.4 и анализируют каждую полученную пробупри условиях, описанных в п. 5.5 – 5.7, три раза.Полученныехроматограммы обрабатывают с использованием компьютерной системыобработки данных «ChemStation». Измеряют в относительных единицахплощади пиков аналитов и внутреннего стандарта. С использованием средствпрограммного обеспечения строят градировочные зависимости отношенияплощадей пиков аналитов к площади пика внутреннего стандарта от ихконцентраций в градировочных пробах.
Правильность идентификациипроверяют по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики.Коэффициентылинейнойкорреляцииполученныхградуировочныхзависимостей должны быть не менее 0,99.При невыполнении указанных в п. 6.1 условий выясняют причины,приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Затемготовят новые градуровочные пробы и повторяют градуировку.6 Обработка результатов6.1 Критерии идентификации аналитовЦелевые аналиты считают идентифицированными в том случае, если:- абсолютное время удерживания хроматографического пика аналитаотличается от времени удерживания, приведенного в таблице 5, менее чем на10 с;- соотношение сигнал/шум (S/N) для пиков аналитов не менее 3:1;159- соотношения интенсивностей подтверждающих дочерних ионов длямасс-спектра определяемых аналитов, соответствуют данным таблицы 5.6.2 Количественный расчетХроматограммуобрабатываюсиспользованиемкомпьютернойсистемы обработки данных «ChemStation».
Измеряют в относительныхединицах отношение площади пиков аналитов к площади пика внутреннегостандарта и на основании полученных по 5.8 градуировочных зависимостейрассчитывают содержание аналитов в анализируемой пробе.7 Оформление результатов анализаРезультаты анализа оформляют записью в рабочем журнале поустановленной форме и удостоверяются лицом, проводившим исследования,утверждаются начальником лаборатории.8 Требования безопасности, охраны окружающей среды8.1 Привыполнениианализовсоблюдаюттребованиятехникибезопасности при проведении работ с реактивами по ГОСТ 12.1.007.8.2 Требования техники безопасности при работе с электроустановками- по ГОСТ 12.1.019.8.3 Требования организации обучения работающих безопасности труда- по ГОСТ 12.0.004.8.4 Помещения для выполнения работ должны быть оборудованыприточно-вытяжной вентиляцией, обеспечивающей требуемую кратностьобмена воздуха на рабочих местах по ГОСТ 12.4.021.
Содержание вредныхвеществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленныхГОСТ 12.1.005.8.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиямпожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и быть оборудованным средствамипожаротушения по ГОСТ 12.4.009.8.6 Нормирование по оценке световой среды осуществляется поотраслевомубазовомудокументуСНиПискусственное освещение».16023-05-95«Естественноеи8.7 При установке, монтаже и эксплуатации ВЭЖХ-МС/МС следуетсоблюдать ПБ 03-576-03 «Правила устройства и безопасной работы сосудов,работающих под давлением».8.8 Исполнители должны быть проинструктированы по лабораторнойинструкции о мерах техники безопасности и допущены к проведению работ сповышенной опасностью.8.9 Производственные отходы собираются в специальные емкости иуничтожаются установленным порядком.9 Требования к квалификации операторовК выполнению работ допускаются лица не моложе 21 года с высшимили средним специальным образованием, прошедшие производственноеобучение, проверку знаний, имеющие практический опыт работы вхимических лабораториях с реактивами и не имеющие медицинскихпротивопоказаний.
Оператор должен знать и соблюдать настоящую методикуи руководства по эксплуатации средств измерений.10 Требования к условиям измеренийПри подготовке к выполнению измерений и при их проведениинеобходимо соблюдатьусловияэксплуатациисредствизмеренийиоборудования, изложенные в руководствах (инструкциях) по эксплуатации.Температураокружающего воздухавпомещении,вкоторомпроводятся измерения, должна находиться в диапазоне от 15 до 25 ºС.Относительная влажность воздуха не выше 80отсутствовать пары органических растворителей.161.
В помещении должныМетодикахимическойидентификациистимуляторовигаллюциногенов в волосах методом высокоэффективной жидкостнойхроматографиисприменениемтандемногомасс-селективногодетектирования.1 Область применения и принцип методаНастоящийдокументустанавливаетметодикухимическойидентификации стимуляторов и галлюциногенов в волосах методомвысокоэффективной жидкостной хроматографии с применением тандемногомасс-селективногодетектирования.Списоканализируемыхвеществвключает: амфетамин, метамфетамин, метилендиоксиамфетамин (далее −МДА),3,4-метилендиокси-метамфетамин(далее–МДМА),3,4-метилендиоксиэтиламфетамин (далее – МДЕА) и фенциклидин (далее –РСР).Предел обнаружения в волосах не более 100 пг/мг.Метод идентификации стимуляторов и галлюциногенов в волосахоснованнасравнениисовокупностиэкспериментальнополученныххроматографических и масс-спектрометрических характеристик образцовволос табличными данными (см.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
