Диссертация (1091824), страница 26
Текст из файла (страница 26)
таб. 5).Исследуемые соединения извлекают из волос методом щелочногогидролиза с последующей жидко-жидкостной экстракции и измерениемхроматографических и масс-спектрометрических характеристик аналитов.Масс-спектрометрический анализ осуществляется в режиме мониторингавыбранных реакций (SRM).Содержание аналитов определяют по площадям хроматографическихпиков методом внешнего стандарта.Продолжительность проведения одного анализа составляет не более 4часов без учета времени на пробоотбор.При составлении настоящей методики были использованы следующиедокументы:- ГОСТ Р 8.563-2009 Методики (методы) измерений;162- ГОСТ Р 1.5-2012 Общие требования к построению, изложению,оформлению, содержанию и обозначению.2 Нормативные ссылкиВ настоящем методике использованы ссылки на следующиедокументы:ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные.
Общиетехнические требования.ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть I.Метрологические и технические требования. Испытания.ТУ 25-2021.003-88 Термометры лабораторные. Технические условия.ТУ 25-11.1513-79 Приборы гидрометеорологические. Техническиеусловия.ТУ 6-21-12-94 Аргон газообразный (сжатый). Технические условия.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы иматериалыВысокоэффективный жидкостной хроматограф «Accela» с тройнымквадрупольным масс-анализатором «TSQ Quantum Access MAX» фирмы«Thermo Scientific» (США). Жидкостной хроматограф оснащен колонкойHypersil Gold C-18 длиной 50 мм, внутренним диаметром 4,6 мм и размеромчастиц сорбента 1,9 мкм.Весы лабораторные ABT – 5M, с пределом допускаемой абсолютнойпогрешности не более ± 0,01 мг, фирмы Kern (Чехия).Дозаторы пипеточные переменного объема (0,01 - 5 см3), фирмы«Biohit» (Финляндия), ГОСТ 28311-89.Микрошприц переменного объема (0,1 - 100 см3), фирмы «AgilentTechnologies» (США).Термометр ртутный лабораторный,с погрешностью измерениятемпературы 0,5°С, ТУ 25-2021.003-88.Барометр-анероид метеорологический БАММ-1, с погрешностьюизмерения давления 0,1 кРа, ТУ 25-11.1513-79.163IBM совместимая ЭВМ с программным обеспечением для управления«Xcalibur» фирмы «Thermo Fisher Scientific» (США).Минишейкер Reax control со сменными приспособлениями дляустановки емкостей различного диаметра, фирмы «Heidolph» (Германия).Центрифуга Centrifuge 5810R, фирмы «Eppendorf» (Германия).Испаритель под током азота D-33649 Bielefild, фирмы «LiebischLabortechnik» (Германия).Мешалка Reax 2, фирмы «Heidolph» (Германия).Сушильный шкаф FD 115, фирмы «BINDER» (США).Станцияводоподготовки,Milli-QIntegral3,обеспечивающаяполучение деионизированной воды с остаточным сопротивлением 18МОм/см (25 С) и содержанием общего углерода < 30 ppb (мкг/дм3), фирмы«Millipore» (Франция).Холодильник лабораторный с морозильным отделением.Пробирки центрифужные вместимостью 15 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат.
№ 078.02.001.Пробирки центрифужные вместимостью 50 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 078.02.005.Виалыстеклянныевместимостью2 см3сзавинчивающейсяполимерной крышкой, фирмы «Agilent Technologies» (США), кат. № 51902240.Вставки в виалы вместимостью 0,25 см3 с пружиной, фирмы «Restek»(США), кат. № 21776.Мерная колба вместимостью 1000 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 013.01.901.Мерная колба вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 013.01.101.Цилиндр мерный вместимостью 25 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 015.01.025.164Цилиндрмерныйвместимостью500см3,фирмы«ISOLAB»(Германия), кат. № 015.01.500.Бутыль с винтовой крышкой вместимостью 1000 см3, фирмы«ISOLAB» (Германия), кат.
№ 061.01.1000.Бутыль с винтовой крышкой вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 061.01.100.Пипетки Пастеровские вместимостью 5 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № ЕА61.1-250 ЕА.Калия гидроксид, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 656054-6x1L.МетанолдляВЭЖХ,например,фирмы«Merck»(Германия),кат. № 1.06035.2500.Кислота муравьиная 99% «Ч», ГОСТ 5848-73.Эфир метилтретбутиловый, например, фирмы «Merck» (Германия), кат.№ 1.01845.2500.Соляная кислота, например, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат.№ 84415-100ML.Примечания1 Средства измерений должны быть внесены в Госреестр СИ РФ и поверены вустановленные сроки, иметь клеймо и/или свидетельство о поверке.2 Реактивыиматериалыдолжныиметьпаспортаилисертификаты,подтверждающие их пригодность.3 Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств,посуды, реактивов и материалов с метрологическими и техническими характеристикамине хуже, чем у приведенных в разделе 3.4 Отбор и хранение проб4.1 Пробы волос массой не менее 100 мг отбирают в центрифужныепробирки вместимостью 15 см3.4.2 Пробы должны храниться при комнатной температуре в сухомместе.4.3 Центрифужные пробирки с отобранными пробами должны бытьснабжены этикетками, содержащими информацию о пробе.1655 Подготовка к выполнению измерений5.1 Подготовка лабораторной посуды5.1.1 Полимерные пробирки, предназначенные для отбора проб,полимерные наконечники для автоматических пипеток, стеклянные виалывместимостью 2,0 см3, используемые в хроматографическом анализе, должныбыть одноразовыми.5.1.2 Стеклянную лабораторную посуду моют с использованиеммоющего средства (п.
5.3.5), ополаскивают дистиллированной водой и сушатв сушильном шкафу при температуре (100 ± 10) ○С.5.2Приготовлениеисходных,рабочихиградуированныхрастворовВсе растворы готовят в стеклянных виалах вместимостью 2 см3.Рабочие и исходные растворы хранят при температуре не выше 4 ○С.Срок хранения – не более 1 мес.5.2.1 Приготовление исходных растворов аналитов и внутреннегостандарта с концентрацией 1 мг/см3Для каждого аналита и внутреннего стандарта, представляющих изсебя порошок с чистотой 99.0 %, взвешивают на лабораторных весах встеклянной виале вместимостью 2 см3 точную навеску от 0,9 до 1,1 мг идобавляют пипеточным дозатором метанол в количестве, достаточном дляполучения его концентрации 1 мг/см3 (рабочая смесь аналитов «А»).Требуемый объем метанола рассчитывают по формуле:(1)где С – концентрация исходного раствора каждого аналита, 1 мг/см3,mi – масса навески, мг.5.2.2 Приготовление рабочих растворов аналитов5.2.2.1 Приготовление рабочего раствора смеси аналитов и внутреннегостандарта «Б» с концентрацией 100 мкг/ см3 каждого аналита.166Для приготовления 1000 мм3 раствора микрошприцом в стекляннуювиалу вместимостью 2 см3 вносят по 100 мм3 исходных растворов аналитов ивнутреннего стандарта, приготовленных по 5.2.1.5.2.2.2 Приготовление рабочего раствора смеси аналитов внутреннегостандарта «В» с концентрацией 10 мкг/см3 каждого вещества.Для приготовления 1000 мм3 раствора микрошприцом в стекляннуювиалу вместимостью 2 см3 вносят:- микрошприцом 100 мм3 раствора «Б»;- пипеточным дозатором 900 мм3 метанола.5.2.3 Приготовление градуировочных образцовДляприготовленияградировочныхобразцоввцентрифужныепробирки вместимостью 15 см3 взвешивают на лабораторных весах 100±2 мгволос и добавляют микрошприцом раствор «А», «Б» или «В» в количестве,указанном в таблице 1 для соответствующего уровня концентраций.Таблица 1.
Количество вносимого в градуировочные образцы рабочегораствораУровеньСодержаниенг/мг10510,20,112345ПослевнесенияаналитовВид раствораББВВВкаждыйКоличество рабочегораствора, мм31051021образецперемешиваютнавибромиксере для гомогенизации компонентов в течение 1 минуты.ПримечаниеГрадуировочные растворы готовятся непосредственно перед проведением анализа.Хранению не подлежат.1675.3 Подготовка реактивов и материалов5.3.1 Приготовление 1,5 N раствора КОНВ стеклянную бутыльвместимостью 1000 см3взвешиваютналабораторных весах 84,0 ± 0,1 мг сухого КОН и добавляют до меткидеионизированную воду, полученный раствор перемешивают.5.3.2Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХДляпроведенияхроматографическогоанализаиспользуютдвухкомпонентную подвижную жидкую фазу.Компонент А – 0,1 %-ный (объемн.) раствор муравьиной кислоты в3метаноле.
В колбу объемом 1000 см помещают при помощи пипеточногодозатора 1 см3 муравьиной кислоты. Затем добавляют 500 см3 метанола,содержимое колбы перемешивают и доводят объем полученного раствораметанолом до метки. Раствор тщательно перемешивают и используют в качествекомпонента А.Компонент Б – 0,1 %-ный (объемн.) раствор муравьиной кислоты в воде.В колбу объемом 1000 см3 помещают при помощи пипеточногодозатора1 см3муравьинойкислоты.Затемдобавляют500см3деионизированной воды, содержимое колбы перемешивают и доводят объемполученного раствора деионизированной водой до метки.
Раствор тщательноперемешивают и используют в качестве компонента Б.5.3.3 Приготовление 0,1 % раствора соляной кислоты в метанолеВ мерную колбу на 100 см3 мерным цилиндром вносят 50 см3 метанола,затем пипеточным дозатором вносят 1 см3 концентрированной солянойкислоты (37%) и доводят метанолом объем раствора до метки колбы.5.4 Подготовка проб волос для анализаВ центрифужную пробирку вместимостью 15 см3 взвешивают налабораторных весах 100 ± 2 мг волос. К взвешенному образцу волосдобавляют пипеточным дозатором 2 см3 1,5 N раствора КОН и перемешиваютна мешалке 1 минуту. Затем полученную смесь выдерживают в сушильномшкафу при температуре 60ºС в течение часа. После гидролиза смесь168охлаждают и пипеточным дозатором добавляют 3 мл метилтретбутиловогоэфира.
Экстракцию проводят на мешалке в течение 20 минут, после чегопробирку с образцом центрифугируют при 10 000 об/мин в течение 2 минут.Верхний (эфирный) слой отбирают в чистую полимерную пробирку иупаривают досуха в токе азота в присутствии 100 мкл 0,1% соляной кислотыв метаноле при температуре 40ºС. К сухому остатку проб добавляют 50 мклметанола.5.5 Подготовка ВЭЖХ-МС/МС системыВЭЖХ-МС/МС систему с установленной колонкой готовят к работе всоответствии с Руководством по эксплуатации.5.6 Условия ввода пробы и хроматографического разделенияПараметры хроматографической системы приведены в таблице 2.Условия градиентного режима подачи элюента приведены в таблице 3.Таблица 2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
