Диссертация (1091824), страница 27
Текст из файла (страница 27)
Параметры и условия ВЭЖХ.Хроматографическая колонкаHypersil Gold C18,50 мм4,6 мм, 1.9 мкмТемпература колонки (○С)40Скорость потока элюента, см3/мин0,15Метод ввода пробыавтоматическийОбъем вводимой пробы, мм310Таблица 3. Условия градиентного режима подачи элюента.Время, минСодержание элюента Б, %0,009518,00523,00523,019525,00951695.7 Условия масс-спектрометрического детектированияПараметры масс-спектрометрического детектирования приведены втаблице 4. Времена удерживания исследуемых веществ, а также их ионыпрекурсоры, дочерние ионы и энергии соударения, используемые прианализе, приведены в таблице 5.Таблица 4. Условия масс-селективного детектированияСпособ ионизацииэлектрораспылениеПолярность детектируемых ионовположительнаяТемпература капилляра270 CНапряжение на капилляре (Spray Voltage)3500 ВРежим регистрацииМониторингвыбранных реакций(SRM)Температура испарителя (Vaporizer Temp)300 CДавление газа-распылителя (Sheath Gas Pressure)30Давление вспомогательного газа (Aux Gas5Pressure)Количество микросканов15Разрешение на первом квадруполе (Q1)0,7 а.е.м.Разрешение на втором квадруполе (Q3)0,7 а.е.м.Время сканирования (Scan time)0,01 с (для всехдочерних ионов)Диапазон сканирования (Scan Width)1701 m/zТаблица 5.
Времена удерживания, ионы прекурсоры, дочерние ионы иэнергии соударенияИсследуемоевеществоRT, Мол. Молекулярный Дочерниемин массаионионы,m/zАмфетамин6,58135,2136,2 [M-H]+Метамфетамин6,91149,2150,2[M-H]+МДА6,90179,2180,3 [M+H]+МДМА7,13193,2194,3 [M-H]+МДЕА7,52207,3208,4 [M-H]+РСР9,45243,4244,3 [M-H]+119,2991,2865,35119,2391,1565,38163,56135,53105,3979,52163,20133,22105,2577,23163,50135,22133,30159,2186,1291,09Энергиясоударения,В1015301520401520203010203030520201515355.8 Проведение скриннингового анализа5.8.1 Выполнение анализаПробу, полученную согласно п. 5.4, анализируют при условиях,описанных в п. 5.6 и 5.7.В случае идентификации одного или нескольких целевых аналитов впробе по критериям, приведенным в п.
6.1 настоящей методики, необходимодополнительно выполнить следующие процедуры:- подтверждения наличия аналитов в пробе (п. 5.8.2)- построения градуировочной кривой (п. 5.8.3)171- определения количества выявленных аналитов (п. 6.2).5.8.2 Процедура подтверждения наличия аналита в пробеДля подтверждения присутствия целевого аналита, выявленного впробе образца, проводят исследование его новой аликвоты и бланковойпробы в следующей последовательности:1.
Бланковая проба волос, т.е. образец, заведомо не содержащийцелевого аналита.2. Проба анализируемого образца волос.Пробоподготовка проб осуществляется в соответствии с п. 5.4,параметры оборудования устанавливаются в соответствии с п. 5.6, а анализпроводится в соответствии с п. 5.7 настоящей методики.В первой пробе хроматографический пик подтверждаемого аналитадолжен не определяться. Во второй – должен определяться. Аналитыидентифицируются по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики.5.8.3 Градуировка ГХ-МС системыС приготовленными по п.
5.2.3 градуировочными образцами проводятпробоподготовку согласно п. 5.4 и анализируют каждую полученную пробупри условиях, описанных в п. 5.5 – 5.7, три раза.Полученныехроматограммы обрабатывают с использованием компьютерной системыобработки данных «Xcalibur». Измеряют в относительных единицах площадипиков аналитов. С использованием средств программного обеспечениястроят градировочные зависимости площадей пиков аналитов от ихконцентраций в градировочных пробах.
Правильность идентификациипроверяют по критериям, приведенным в п. 6.1 настоящей методики.Коэффициентылинейнойкорреляцииполученныхградуировочныхзависимостей должны быть не менее 0,98.При невыполнении указанных в п. 6.1 условий выясняют причины,приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Затемготовят новые градуровочные пробы и повторяют градуировку.1726 Обработка результатов6.1 Критерии идентификации аналитовЦелевые аналиты считают идентифицированными в том случае, если:- абсолютное время удерживания хроматографического пика аналитаотличается от времени удерживания, приведенного в таблице 5, менее чем на10 с;- соотношение сигнал/шум (S/N) для пиков аналитов не менее 3:1;- соотношения интенсивностей подтверждающих дочерних ионов длямасс-спектра определяемых аналитов, соответствуют данным таблицы 5.6.2 Количественный расчетХроматограммуобрабатываюсиспользованиемкомпьютернойсистемы обработки данных «Xcalibur».
Измеряют в относительных единицахплощади пиков аналитов и на основании полученных по 5.8 градуировочныхзависимостей рассчитывают содержание аналитов в анализируемой пробе.7 Оформление результатов анализаРезультаты анализа оформляют записью в рабочем журнале поустановленной форме и удостоверяются лицом, проводившим исследования,утверждаются начальником лаборатории.8 Требования безопасности, охраны окружающей среды8.1 Привыполнениианализовсоблюдаюттребованиятехникибезопасности при проведении работ с реактивами по ГОСТ 12.1.007.8.2 Требования техники безопасности при работе с электроустановками- по ГОСТ 12.1.019.8.3 Требования организации обучения работающих безопасности труда- по ГОСТ 12.0.004.8.4 Помещения для выполнения работ должны быть оборудованыприточно-вытяжной вентиляцией, обеспечивающей требуемую кратностьобмена воздуха на рабочих местах по ГОСТ 12.4.021.
Содержание вредныхвеществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленныхГОСТ 12.1.005.1738.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиямпожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и быть оборудованным средствамипожаротушения по ГОСТ 12.4.009.8.6 Нормирование по оценке световой среды осуществляется поотраслевомубазовомудокументуСНиП23-05-95«Естественноеиискусственное освещение».8.7 При установке, монтаже и эксплуатации ВЭЖХ-МС/МС следуетсоблюдать ПБ 03-576-03 «Правила устройства и безопасной работы сосудов,работающих под давлением».8.8 Исполнители должны быть проинструктированы по лабораторнойинструкции о мерах техники безопасности и допущены к проведению работ сповышенной опасностью.8.9 Производственные отходы собираются в специальные емкости иуничтожаются установленным порядком.9 Требования к квалификации операторовК выполнению работ допускаются лица не моложе 21 года с высшимили средним специальным образованием, прошедшие производственноеобучение, проверку знаний, имеющие практический опыт работы вхимических лабораториях с реактивами и не имеющие медицинскихпротивопоказаний.
Оператор должен знать и соблюдать настоящую методикуи руководства по эксплуатации средств измерений.10 Требования к условиям измеренийПри подготовке к выполнению измерений и при их проведениинеобходимо соблюдатьусловияэксплуатациисредствизмеренийиоборудования, изложенные в руководствах (инструкциях) по эксплуатации.Температураокружающего воздухавпомещении,вкоторомпроводятся измерения, должна находиться в диапазоне от 15 до 25 ºС.Относительная влажность воздуха не выше 80отсутствовать пары органических растворителей.174. В помещении должныМетодика химической идентификации синтетических каннабиноидовклассов 3-нафтоилиндолы (АМ-2201, JWH-210), нафталин-3карбонилиндазолы (THJ-2201, AM-1220), индазол-3-карбоксамиды (ABPinaca, AB-Pinaca-F, AB-Chminaca, AB-Fubinaca) и индол-3карбоксилаты (PB-22, PB-22F, NM-2201, QCBL-BZ-F) в волосах методомГХ-МС/МС1 Область применения и принцип методаНастоящийдокументустанавливаетметодикухимическойидентификации синтетических каннабиноидов классов 3-нафтоилиндолы(АМ-2201, JWH-210), нафталин-3-карбонилиндазолы (THJ-2201, AM-1220),индазол-3-карбоксамиды(AB-Pinaca,AB-Pinaca-F,AB-Chminaca,AB-Fubinaca) и индол-3-карбоксилаты (PB-22, PB-22F, NM-2201, QCBL-BZ-F) вволосах методом газовой хроматографии с применением тандемного массселективного детектирования.Предел обнаружения целевых аналитов в волосах не более 500 нг/г.Методидентификации3-нафтоилиндолысинтетических(АМ-2201,JWH-210),каннабиноидовклассовнафталин-3-карбонилиндазолы(THJ-2201, AM-1220), индазол-3-карбоксамиды (AB-Pinaca, AB-Pinaca-F,AB-Chminaca, AB-Fubinaca) и индол-3-карбоксилаты (PB-22, PB-22F,NM-2201, QCBL-BZ-F) в волосах основан на сравнении совокупностиэкспериментальнополученныххроматографическихимасс-спектрометрических характеристик образцов волос с табличными данными.Исследуемые соединения извлекают из волос методом жидкостьжидкостной экстракции после щелочного гидролиза и проводят измерение иххроматографических и масс-спектрометрических характеристик.
Массспектрометрическийанализосуществляетсяврежимемониторингамножественных реакций (MRM).Содержаниецелевыханалитовопределяютхроматографического пика методом внешнего стандарта.175поплощадиПродолжительность проведения одного анализа составляет не более6 часов без учета времени на пробоотбор.При составлении настоящей методики были использованы следующиедокументы:- ГОСТ Р 8.563-2009 Методики (методы) измерений;- ГОСТ Р 1.5-2012 Общие требования к построению, изложению,оформлению, содержанию и обозначению.2 Нормативные ссылкиВ настоящем методике использованы ссылки на следующие документы:ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинскиелабораторные.
Общиетехнические требования.ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть I.Метрологические и технические требования. Испытания.ТУ 25-2021.003-88 Термометры лабораторные. Технические условия.ТУ 25-11.1513-79 Приборы гидрометеорологические. Техническиеусловия.ТУ 6-21-12-94 Аргон газообразный (сжатый). Технические условия.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы иматериалыГазовый хроматограф модели «7890», оборудованный системойавтоматического ввода пробы, соединенный с квадрупольным массспектрометром модели «7000А» фирмы «Agilent Technologies» (США).Весы лабораторные ABT – 5M, с пределом допускаемой абсолютнойпогрешности не более ± 0,01 мг, фирмы Kern (Чехия).Дозаторы пипеточные переменного объема (0,01 - 5 см3), фирмы«Biohit» (Финляндия), ГОСТ 28311-89.Микрошприц переменного объема (0,1 - 100 см3), фирмы «AgilentTechnologies» (США).176Термометрртутный лабораторный,с погрешностью измерениятемпературы 0,5°С, ТУ 25-2021.003-88.Барометр-анероид метеорологический БАММ-1, с погрешностьюизмерения давления 0,1 кРа, ТУ 25-11.1513-79.ЭВМ совместимая с программным обеспечением для управления иобработки данных «ChemStation» фирмы «Agilent Technologies» (США).Минишейкер Reax control со сменными приспособлениями дляустановки емкостей различного диаметра, фирмы «Heidolph» (Германия).Центрифуга Centrifuge 5810R, фирмы «Eppendorf» (Германия).Испаритель под током азота D-33649 Bielefild, фирмы «LiebischLabortechnik» (Германия).Мешалка Reax 2, фирмы «Heidolph» (Германия).Сушильный шкаф FD 115, фирмы «BINDER» (США).Ультразвуковая баня DT 102 H, фирмы «BANDELIN electronic»(Германия).Станция водоподготовки Milli-Q Integral 3, обеспечивающая получениедеионизированной воды с остаточным сопротивлением 18 МОм/см (25 С) исодержанием общего углерода < 30 ppb (мкг/дм3), фирмы «Millipore»(Франция).Пробирки центрифужные вместимостью 15 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат.
№ 078.02.001.Пробирки центрифужные вместимостью 50 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 078.02.005.Полимерный контейнер вместимостью 25 см3, фирмы «Acrus»(Германия), кат. 7.077661.Виалыстеклянныевместимостью2 см3сзавинчивающейсяполимерной крышкой, фирмы «Agilent Technologies» (США), кат. № 51902240.Вставки в виалы вместимостью 0,25 см3 с пружиной, фирмы «Restek»(США), кат. № 21776.177Мерная колба вместимостью 1000 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 013.01.901.Мерная колба вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
