Диссертация (1091824), страница 32
Текст из файла (страница 32)
Испытания.ТУ 25-2021.003-88 Термометры лабораторные. Технические условия.ТУ 25-11.1513-79 Приборы гидрометеорологические. Техническиеусловия.ТУ 6-21-12-94 Аргон газообразный (сжатый). Технические условия.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы иматериалыЖидкостный хроматограф «1290 Infinity», оборудованный системойавтоматического ввода пробы фирмы «Agilent Technologies» (США),соединенный с квадрупольным масс-спектрометром «Thermo Scientific TSQQUANTUM».Весы лабораторные ABT – 5M, с пределом допускаемой абсолютнойпогрешности не более ± 0,01 мг, фирмы Kern (Чехия).Дозаторы пипеточные переменного объема (0,01 - 5 см3), фирмы«Biohit» (Финляндия), ГОСТ 28311-89.Микрошприц переменного объема (0,1 - 100 см3), фирмы «AgilentTechnologies» (США).Термометр ртутный лабораторный,с погрешностьюизмерениятемпературы 0,5°С, ТУ 25-2021.003-88.Барометр-анероид метеорологический БАММ-1, с погрешностьюизмерения давления 0,1 кРа, ТУ 25-11.1513-79.ЭВМ совместимая с программным обеспечением для управления иобработки данных «Xcalibur» фирмы «Thermo Fisher Scientific» (США) и«ChemStation» фирмы «Agilent Technologies» (США).205Минишейкер Reax control со сменными приспособлениями дляустановки емкостей различного диаметра, фирмы «Heidolph» (Германия).Центрифуга Centrifuge 5810R, фирмы «Eppendorf» (Германия).Испаритель под током азота D-33649 Bielefild, фирмы «LiebischLabortechnik» (Германия).Мешалка Reax 2, фирмы «Heidolph» (Германия).Сушильный шкаф FD 115, фирмы «BINDER» (США).Ультразвуковая баня DT 102 H, фирмы «BANDELIN electronic»(Германия).Станция водоподготовки Milli-Q Integral 3, обеспечивающая получениедеионизированной воды с остаточным сопротивлением 18 МОм/см (25 С) исодержанием общего углерода < 30 ppb (мкг/дм3), фирмы «Millipore»(Франция).Холодильник лабораторный с морозильным отделением.Пробирки центрифужные вместимостью 15 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат.
№ 078.02.001.Пробирки центрифужные вместимостью 50 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 078.02.005.Виалыстеклянныевместимостью2 см3сзавинчивающейсяполимерной крышкой, фирмы «Agilent Technologies» (США), кат. № 51902240.Вставки в виалы вместимостью 0,25 см3 с пружиной, фирмы «Restek»(США), кат. № 21776.Мерная колба вместимостью 1000 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 013.01.901.Мерная колба вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 013.01.101.Цилиндр мерный вместимостью 25 см3, фирмы «ISOLAB» (Германия),кат. № 015.01.025.206Цилиндрмерныйвместимостью500 см3,фирмы«ISOLAB»(Германия), кат.
№ 015.01.500.Универсальные индикаторные бумаги рН 0-12 фирмы «Лахема»ПНД 50-975-84.Бутыль с винтовой крышкой вместимостью 1000 см3, фирмы«ISOLAB» (Германия), кат. № 061.01.1000.Бутыль с винтовой крышкой вместимостью 100 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат. № 061.01.100.Пипетки Пастеровские вместимостью 5 см3, фирмы «ISOLAB»(Германия), кат.
№ ЕА61.1-250 ЕА.11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловаякислота–аналитическийстандарт, фирмы «Fluka» (США), кат. № 39382.Метанол для ВЭЖХ, фирмы «Sigma-Aldrich » (США), кат. № 34860.Гидроксид калия, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 484016.Гексан безводный, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 296090.Этилацетат безводный, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат.
№ 270989.Изопропанол для ВЭЖХ, фирмы Fluka» (США), кат. № 34965.Кислота муравьиная, фирмы «Fluka» (США), кат. № 56302-1L-F.Кислотахлороводородная36,5-38,0%«Sigma-Aldrich»(США),кат. № H1758-100ML.Дихромат калия, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № P5271-2КG.Серная кислота, фирмы «Sigma-Aldrich» (США), кат. № 320501.Примечания1 Средства измерений должны быть внесены в Госреестр СИ РФ и поверены вустановленные сроки, иметь клеймо и/или свидетельство о поверке.2 Реактивыиматериалыдолжныиметьпаспортаилисертификаты,подтверждающие их пригодность.3 Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств,посуды, реактивов и материалов с метрологическими и техническими характеристикамине хуже, чем у приведенных в разделе 3.2074 Отбор и хранение проб4.1 Пробы мочи объемом не менее 20 см3 отбирают в центрифужныепробирки вместимостью 50 см3.4.2 Пробы должны храниться при температуре не выше -20 ○С.4.3 Центрифужные пробирки с отобранными пробами должны бытьснабжены этикетками, содержащими информацию о пробе.5 Подготовка к выполнению измерений5.1 Подготовка лабораторной посуды5.1.1 Полимерные пробирки, предназначенные для отбора проб,полимерные наконечники для автоматических пипеток, стеклянные виалывместимостью 2 см3, используемые в хроматографическом анализе, должныбыть одноразовыми.5.1.2 Стеклянную лабораторную посуду моют с использованиеммоющего средства (п.
5.3.5), ополаскивают деионизированной водой и сушатв сушильном шкафу при температуре (100 ± 10) ○С.5.2Приготовлениеисходного,рабочихрастворовиградуированных образцовВсе растворы готовят в стеклянных виалах вместимостью 2 см3.Рабочие и исходные растворы хранят при температуре не выше 4 ○С.Срок хранения – не более 1 мес.5.2.1 Приготовление исходного раствора аналита с концентрацией1 мг/см3В стеклянной виале вместимостью 2 см3 взвешивают на лабораторныхвесах точную навеску от 0,9 до 1,1 мг аналита и добавляют пипеточнымдозаторомметанолвколичестве,достаточномдляполученияегоконцентрации 1 мг/см3.
Требуемый объем метанола рассчитывают поформуле(1)где С – концентрация исходного раствора аналита, 1 мг/см3,m – масса навески, мг.2085.2.2 Приготовление рабочих растворов аналита5.2.2.1Приготовлениерабочегораствора«A»аналитасконцентрацией 100 мкг/см3 каждого.Для приготовления 1 cм3 раствора в стеклянную виалу вместимостью2 см3 вносят микрошприцом 0,1 см3 исходного раствора аналита и 0,9 см3метанола.5.2.2.2Приготовлениерабочегораствора«B»аналитасконцентрацией 10 мкг/см3.Для приготовления 1cм3 раствора в стеклянную виалу вместимостью2 см3 вносят 0,1 см3 раствора аналита «A» и 0,9 см3 метанола.5.2.2.3Приготовлениерабочегораствора«С»аналитасконцентрацией 1 мкг/см3.Для приготовления 1cм3 раствора в стеклянную виалу вместимостью2 см3 вносят 0,1 см3 раствора аналита «B» и 0,9 см3 метанола.5.2.3 Приготовление градуировочных образцовДляприготовленияградировочныхобразцоввцентрифужныепробирки вместимостью 15 см3 вносят по 3 см3 бланковой мочи и добавляютмикрошприцом раствор «А», «В»или «С» в количестве, указанном втаблице 1 для соответствующего уровня концентрации.Таблица 1.
Количество вносимых в градуировочные образцы рабочихрастворовУровень1234567ПослеКонцентрациянг/см3500250100501051внесенияаналитаВид раствораAAABBCCкаждыйвибромиксере в течение 1 минуты.209Количество рабочегораствора, мм3157.53153153образецперемешиваютнаПримечаниеГрадуировочные растворы готовятся непосредственно перед проведением анализа.Хранению не подлежат.5.3 Подготовка реактивов и материалов5.3.1 Приготовление раствора элюента АВ мерную колбу вместимостью 1000 см3 с помощью мерного цилиндраприливают 800 см3 деионизированной воды и пипеточным дозаторомдобавляют 1 см3 муравьиной кислоты. Затем доводят объѐм до меткидеионизированнойводой,тщательноперемешиваютипереносятвстеклянную бутыль вместимостью 1000 см3.5.3.2 Приготовление раствора элюента БВ стеклянную бутыль вместимостью 1000 см3 мерным цилиндромвносят 800 см3 метанола и пипеточным дозатором добавляют 1 см3муравьиной кислоты.
Затем доводят объѐм до метки метанолом и тщательноперемешивают.5.3.3 Приготовление смеси гексан:этилацетат в соотношении 5:1В стеклянную бутыль вместимостью 1000 см3 мерным цилиндромвносят 500 см3 гексана и 100 см3 этилацетата. Затем смесь тщательноперемешивают.5.3.4 Приготовление 5 N раствора гидроксида калияВ мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 28 г гидроксидакалия и добавляют 50 см3 деионизированной воды.
Содержимое колбыперемешивают до полного растворения и доводят объем полученногораствора деионизированной водой до метки, тщательно перемешивают,фильтруют и переносят в стеклянную бутыль вместимостью 100 см3.5.3.5 Приготовление хромовой смесиВ стеклянную бутыль вместимостью 500 см3 мерным цилиндромвносят 270 см3 деионизированной воды, добавляют 60 г дихромата калия ирастворяют его при нагревании до 50210○С. Затем осторожно, приперемешивании,спомощьюмерногоцилиндрадобавляют80см3концентрированной серной кислоты.5.4 Подготовка проб мочи5.4.1 Щелочной гидролизВцентрифужнуюпробиркувместимостью15 см3пипеточнымдозатором вносят 3 см3 исследуемой мочи и 0,2 см3 5 N раствора гидроксидакалия, пробирку закрывают завинчивающейся крышкой и перемешивают еесодержимое на мешалке в течение 1 минуты.
Затем пробирку помещают всушильный шкаф и выдерживают 20 минут при температуре 60ºС.5.4.2 Жидкость-жидкостная экстракцияПолученную в п. 5.4.1 гидролизованную мочу доводят до рН 2-3 спомощью концентрированной соляной кислоты. Контроль рН растворапроводят с помощью универсальной индикаторной бумаги. После этого впробиркуспробойгексан:этилацетат,пипеточнымдозаторомприготовленнойсогласновносятп.4см35.3.3,смесизакрываютзавинчивающейся крышкой и перемешивают содержимое на мешалке втечение 20 минут. Затем пробирку центрифугируют в течение 2 минут при10000 об/мин до полного расслоения водного и органического слоев.Органический слой переносят с помощью пастеровской пипетки в чистуюпробирку вместимостью 15 см3 и упаривают досуха в токе азота притемпературе не выше 40°С. К сухому остатку добавляют 50 мм 3изопропанола и 50 мм3 гексана.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
