Методы общей бактериологии (том 2) (947293), страница 32
Текст из файла (страница 32)
Аппп. Есеч. МЕсгоЬю1., 27, 437 — 470 (!973). 16. Н!г( В. Бе!есНче ех1гасИоп оЕ ро1уова РЬЕА !гоги си(ес(ес1 воияе сеП сиИигеь. Л. Мо), Вю1., 26, 365 — 369 (! 967) . 17. НитрЬгеуя О. О., ЕРсПяАасе О. А., Аадегяоп Е. Я. А в!вр1е вейод 1ог йе ргерагаИоп о1 !агре циап(И!ев о1 риге р!аввЫ РЬЕА. В!осЫпс. ВюрЬуь. Ас(а, 383, 457 — 463 (1975). 18. К!е(аьсйтсЫЕ А. К Мапо!ауег ЕесЬп(пиеа !и е1ес!гоп писгоьсору. Мейодв Епгуво!., 128, 361 — 377 (1978). 19. Киреева(осА У.
М., Не!тяМ Р. П. А са1спа1ед РЬЕА гпо1еси1е ав ап !п!епией(а(е Еп !Ье герПсаИои оЕ йе геьЬНапсе Егапь(ег Еас(ог К6К !и ЕьсАег!сЬ(а сой В!ос!сев. ВюрЬуь. !сев. Сопииип., 54, !451— 1459 (1973). 20, КирегяггосЬ-РогУаоу у. М., Еоие(г М. А., Не!сазу! Р. П. Б!саид апд ьИе врес!ПсИу о( йе ге1ахаНоп совр!ех о( йе апИЬсоНс гев(вЕапсе р)авгпЫ ЕсбК. В!осЬев!з!гу, 13, 5484 — 5490 (1974). 21.
Еедегуегу У. СеП ЗепеИсв аид Ьегей(агу вувЫоь!в. РЬуяо1. Йеч, 32, 403 — 430 (1952). 22. МаиН У. У., 97АПУ(еЫ Н. У. РЬувса! сиагасЛепгаИои оЕ а р1аьв!д со(п1еига1е соп(а!п!пи аи Р' Мя уад е1евеп1 апй йе Яа!топеПа Сур(Птигсит 172 сгурИс р1авгпЫ. Л.
Вас1епо1., 129, 1601 — 1606 (1977). 23. Муегь У. А., Баас(сег Р., Е!шеП Е. Р., Еайош Я. А в!спр1е а8агозе Зе! е!ес(горЬогеИс спейод 1ог йе Ыеп1ШсаИоп апд сЬагас(епгаИоп о! рЕавв!д деохупЬопис1е!с асЫ, Л. Вас(егю!., !27, 1529 — 1537 (1976) . 24. Ра!сАаидlшг! Я. Мо1еси1аг сЬагас(ег!гаИоп оЕ ЬудгосагЬоп деугадаИче р!азпидь сп Ряеидотоиая ри((да. ВюсЬепс. ВюрЬуь. )сея. Сопипип., 77, 5!8 — 525 (1977).
25. Пад!о(У П., Ваиег Зг., ТПиоугад У. А дуе Ьиоуаи1 депзИч псейод Еог !Ье де(ес(юп апс( сзо!аИоп оЕ с!овей с!гси1аг дир!ех РХА: йе с)овед с!гси1аг РЬЕА Еи Не1.а сеПв. Ргос. МаН, Асад. Бс!. ЕЕ.Б.А., 57, 1514 — !522 (!967). 26. ЯАагр Р.
А., Няи М. Т., ОЕПьиуо Е., Рао!дяоа Н. В!ее!гоп в!сгоьсоре Ье(егодир!ех в!ид(еь оЕ ьепиепсе ге!а1юпв авопи р1аьпс!дв о( Еьсйег(сА(а соП. 1. Б!гис(иге оЕ П-рг!гпе Еас(огь. Л. Мо). Вю!., 71, 471 — 497 (1972). 27. Явиггец с?. А., НауаНМ Н., С!ага У. Мо1есп1зг с!ои!пП о1 РЬЕА !гав Р вех Еас1ог о( ЕясуепсМа соу К-12. Ргос. ЬЕаИ. Асад. Бес. ЕЕ.Б.А., 73, 64 — 68 (1976). 28. ЯоиЬЗега Е.
М. Ре(есНои о1 врессИс вепиепсев авопд РЬЕА Егау. вепй верага1ед Ьу ие! еЕес1горЬогевсв. Л. Мо1. Вю!., 98, 503 — 517 (!975). 29. Т!сотряоа П., НиуАея Я. О, Вседа Р. Р1авв!д ЫеиНПсаИоп ивиП зпсс10с епс(опис1еавез. Мо). Осп Оспе!., 1ЗЗ, 14! — 149 (1974). 30. Зга(яои В., Сигпег Т. С, Оогдоа М. Р., СМПоп М.-Р., Неьгег Е. Зг. РЕазпид геои!гед Еог чсги1еисе о( АугоЬас(егшт сите(ассепк .!. Вас(ег!о1., 123, 255 — 264 (!975), Часть ГЧ МЕТАБОЛИЗМ ВВЕДЕНИЕ В. Вуд Метаболическая активность бактернальных клеток представляет собой организованную и регулируемую последовательность ферментативных процессов синтеза и распада, ответственных за поддержание, рост, движение и репродукцию микроорганизмов.
Этн функции осуществляются за счет источников энергии и других питательных веществ внутри- и внеклеточного происхождения. Метаболические системы, лежащие в основе указанных функций, изучают с помощью разнообразных биологических, физических, химических н ферментативных методов. Биологические методы, применяемые главным образом для изучения пищевых потребностей и генетики микроорганизмов, описаны в других разделах этого руководства. В данном разделе рассматриваются физические, химические н ферментатнвные методы, которые используются при исследовании метаболизма бактерий.
В последующих главах описаны физические методы н приборы, фракцнонированне и анализ химических компонентов, выделение и количественное определение ферментов, изучение каталнзируемгях имн реакций, а также исследование проницаемости клеток и транспортных процессов. Все этн вопросы разработаны настолько хорошо, что вполне оправданно опубликование специальных книг, посвященных нх методологии и применению.
Однако в данном случае авторы ограничились описанием только самых надежных н простых методов, которые могут использовать для достаточно основательного изучения метаболизма бактерий даже начинающие исследователи. Глава 16 ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В. Вуд Эта глава включает материал по основным физико- аналитическим методам и процедурам разделения: фотометрии, ионселектнвным электродам, хроматографии, измерению радиоактивности, гель-электрофорезу н маномстрии. Их использование в бактериологии во многих случаях сыграло важную роль и стало почти характерной чертой этой области науки. В настоящем руководстве приводится общее описание как достоинств, так и слабых сторон методов, специальных методик, прописей, а также примеров их применения в исследованиях бактерий.
В этой главе особенно необходимо ограничиться описанием простых процедур, пригодных для лабораторных занятий или представляющих ценность на начальных этапах научных исследований, поскольку более глубокое изложение каждого вопроса можно найти в книгах, специально посвященных какому-то одному методу. Некоторые методы здесь вообще не рассматриваются или упоминаются лишь кратко; среди них тонкослойная хроматография, седиментационный анализ макромолекул и различные типы элсктрофореза, В то же время в этой главе приведена информация, мало известная бактериологам.
16.1. ФОТОМЕТРИЯ В научных и практических исследованиях по бактериологии широко применяются самые разнообразные фотометрические методы, в том числе абсорбционная фотомстрия, флуориметрия и пефелометрня, а также абсорбцнонная и эмиссионная фотометрия пламени и методы ядерного магнитного н электронного парамагнитного резонанса [1, 2). Все этн методы позволяют 167 чхсть ил мвтаволнзм идентифицировать соединения, устанавливать их струК- туру, определять концентрации веществ и скорости реакций. 16.!.!.
Абсорбцнонная фотометрия С помощью спектрофотометров для измерения поглощения в ультрафиолеговой и видимой областях спектра определяют способность растворенных веществ поглощать свет при определенных длинах волн. График, на котором поглощение света отложено против длины волны (спектр поглощения), помогает идентифицировать соединения п дает информацию о структуре хромофоров. Количество света, поглощенного измеряемым веществом при той или иной длине волны, позволяет определять его концентрацию, а изменение поглощения во времени — скорости реакций. Имеющийся в приборе монохроматор выделяет из всего спектра источника света излучение в узком диапазоне длин волн н направляет его через образец к фотометру, в котором количество поступающей энергии измеряется и выражается в виде отношения интенсивности пропущенного света (1,) к интенсивности падающего света (1е).
Если 1е принять за 100, то измеренная величина является пропусканием, выраженным в процентах (%Т). Значение %Т связано с величиной малярной концентрации (С) поглощающего вещества в соответствии с законом Ламберта — Бэра: — 1я %Т = е 1 С=А", где и — малярный коэффициент поглощения образца при заданной длине волны, а 1 — длина пути света в сантиметрах, Поскольку в н 1 — постоянные величины, С пропорциональна отрицательному логарифму % Т или прямо пропорциональна поглощаемости (А)з>. Поэтому о В этой формуле допущена ошибка.
На самом деле Твыражается ве в процентах, а в долях единицы. Поэтому А — !яТ. Основной закон поглощения часто называют также законом Бугера — Ламберта — Бэра нлн просто законом Бэра. — Лрихс ред. и В отечественной литературе вместо термина «поглощаемость» (А) принят термин «оптическая нлотиость» ((З), которым мы и будем здесь пользоваться. — Приве ред.
пс эизичвскнв мвтоды более поздние модели спектрофотометров с линейной шкалой для А более приспособлены для точных измерений образцов со средними илп большвмн значениями оптической плотности. Факторы, влияющие на качественные характеристики Качество лабораторных спектрофотометров определяется следующими факторами: монохромагпчностью света, падающего на образец, интенсивностью н площадью снегового пучка (числовая апертура), точностью калибровки ло длинам воли, точностью калибровки фотометра, линейностью показаний фотометра, шумом, а также инерционностью н стабильностью нулевой линии.
Повышение качества приборов достигается иногда в результате увеличения их размеров и стоимости. Однако прц проведении биологических экспериментов предпочтительнее до предела использовать все возможности имеющегося в наличии простого прибора, а не уповать на приобретение спектрофотометра высокого класса. Влияние спектральной ширины полосы Спектральная чистота света, пропускаемого монохроматором при номинально указанной длине волны, нли, иными словами, естественная ширина полосы, — это ее ширила в нанометрах, измеренная на половине высоты максимума энергии излучения (рис. 16.1,1).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
