Главная » Просмотр файлов » Методы общей бактериологии (том 2)

Методы общей бактериологии (том 2) (947293), страница 10

Файл №947293 Методы общей бактериологии (том 2) (Методы общей бактериологии в трех томах (ред. Герхардт)) 10 страницаМетоды общей бактериологии (том 2) (947293) страница 102013-09-15СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 10)

Через 2 дня инкубацни отмечают колонии гистидиновых ревертаитов и убеждаются в наличии слабого фонового роста бактерий в агаре благодаря небольшому количеству гистидина, добавленного к среде. Чтобы выяснить, нуждается ли то или иное вещество в предварительной активации, имеет смысл проводить испытания как в присутствии, так и в отсутствие смеси 5-9.

Помимо опытных чашек должны быть и контрольные, содержащие: 1) только культуру бактерий, 2) бактерии с известными мутагенами (включая такой, который заведомо требует активации), 3) бактерии со смесью 5-9 (без мутагена). Если мутагены нужно проверить нанесением на диски, их не включают в состав смеси верхнего слоя агара, а наносят позже по нескольку кристаллов, растворенных в воде, спирте или диметилсульфоксиде, на поверхность стерильных бумажных дисков диаметром 5 мм. Для некоторых веществ этот метод мало эффективен, вероятно, из-за их адсорбции на фильтре. В некоторых случаях мутагены наносят непосредственно на поверхность ага- ра, правда, для получения положительного результата с плохо растворимыми веществами требуются довольно большие концентрации. Возможные трудности Предупреждение.

Используемая в экспериментах $. 1урйптиг(ит относится к микроорганизмам, патогенным для человека (класс П). Эта бактерия является одним из главных возбудителей пищевых отравлений и в случае попадания внутрь может вызывать тяжелые формы поноса, рвоты, гастроэптерита. Несмотря на слабую вирулентность лабораторных штаммов, особенно тех, которые лишены липополисахаридной капсулы, обращаться с ними следует очень осторожно. Все пипетки должны быть снабжены ватными пробками, а материал, содержащий эту бактерию, нельзя насасывать в пипетку ртом.

Перед удалением культуры должны автоклавироваться. Сотрудники лаборатории, принимающие антибиотики, должны быть особенно осторожны при работе со штаммами, плазмиды которых детерминируют К-фактор. Большая осторожность необходима и в обращении с высокотоксичными мутагенами, обладающими канцерогенными свойствами. Исследования этих веществ лучше всего проводить в специально отгороженном от остальной лаборатории помещении. Взвешивание опасных материалов и разлив по чашкам агара верхнего слоя, содержащего мутагены, нужно проводить под тягой. Инкубируют пробы также под хорошей тягой, причем вытягиваемый воздух должен поступать в канал, не сообщающийся с общим каналом тяги лаборатории.

Сотрудники должны проводить эксперименты в лабораторных халатах и перчатках, а при работе с летучими препаратами использовать респираторы. При интерпретации результатов нужно учитывать, что метод нанесения исследуемого вещества на поверхность агара (спот-тест), будучи полезным при обследовании большого числа изучаемых мутагенов, дает только качественные данные. Оп мало приемлем для таких химических агентов, которые, как большинство водонерастворимых полициклических углеводородов, не диффундируют в агар.

Даже при использовании более чув- ЧАСТЬ пь Генатикх ствительного и допускающего количественную оценку метода наслоения (внесения исследуемого вещества в расплавленный агар верхнего слоя) важно проверять несколько различных концентраций исследуемых веществ, чтобы определить, имеется ли линейная зависимость индукции обратных мутаций от концентрации. В случае выраженной гибели бактерий исследуемого штамма, что проявляется в ослаблении роста бактериального газона, необходимо убедиться в том, что это происходит на линейном участке кривой доза — ответ, а не при тех концентрациях, когда степень летальности клеток относительно преобладает над мутагенностью.

Степень летальности клеток можно определить сравнением действия данного вещества на нормальный штамм, используемый в пробе, и на штамм с нарушенной системой репарации (иогВ). Другой фактор, влияющий на результаты, — фракция 5-9. Мутагенный эффект может несколько изменяться от одного образца фракции 5-9 к другому, поэтому желательно проверять каждый новый образец в различных концентрациях с несколькими стандартными веществами, такими, как 2-аминофлуорен, 7,12-диметилбензантрацен и афлатоксин В1 18].

Вещество обычно считается немутагенным, если 1 мг этого вещества при исследовании включением в агар не дает двукратного увеличения числа обратных мутаций по сравнению с фоном спонтанных обратных мутаций. Некоторые вещества прн стандартной постановке пробы включением в агар проявляют слабую мутагенность. Для таких соединений чувствительность пробы можно повысить, проведя ЗО-мин преинкубацию в растворе перед посевом. Чтобы провести преинкубацию, смешивают в указанной последовательности в стерильной стеклянной пробирке: 0,1 мл раствора исследуемого вещества, 0,5 мл смеси 5-9 и 0,1 мл бактериальной культуры.

Иикубнруют 30 мнн при 30'С (или 20 мин при 37'С), слабо перемешивая. Добавляют 2 мл агара верхнего слон (равд. 13.9.20), перемешивают и выливают в чашку с нижним слоем минимального агара М56 (равд. 13.9.10). Инкубируют и учитывают колонии, так же как в случае стандартной процедуры. Случается, высокая частота спонтанных обратных мутаций у используемых штаммов смазывает истинную !в.

мутднии 13.9. РЕЦЕПТЫ СРЕД 13.9.1. 1:Бульон (для Е. сой и других энтеробактерий) Гриптон 10 г Дрожжевой акстракт 5 г ХаС1 0,5г Дистиллированная вода 1 л Доводят рН до 7,0 добавлением 1 н. (х!аОН и автоклавируют 15 мнн под давлением 10' Па при 121'С. После автоклавирования добавляют !О мл стерильного 20%-ного раствора декстрозы. 13.9.2. 1:Агар Добавляют 15 г агара на 1 л Е-бульона и разливают по 20 — 25 мл в чашки Петри (!ООХ15 мм). 13.9.3. Лактозо-тетразолиевая среда Среда 1Са 2 (для определения устойчивости к антибиотикам) Дистиллированная вода 2,3,5-Трифенилтетрааолийхлорид (5!Кгпв Сйепнса) Со) 25,5 г 950 мл 50 мг Сначала растворяют среду № 2, затем добавляют к ней тетразолийхлорнд и нагревают до тех пор, пока он не растворится полностью.

Автоклавируют 15 мин прн картину. Как правило, это происходит из-за присутствия в среде мутагенов. Возможно, эти мутагены содержатся в некоторых партиях питательного бульона; поэтому для выращивания штаммов, используемых в опытах, рекомендуется бульон Охо!г! (равд. 13.9.7). Кроме того, отделы1ые партии пластмассовых чашек Петри разового пользования могут содержать значительное количество окиси этилена, мутагенной по своей природе. В настоящее время можяо приобрести чашки Петри, которые не стерилизуются окисью этилена (равд. 13.10.2). чАсть и!. ГвнетикА 121'С, добавляют 15 мл стерилизованного отфильтрованного 20%-ного раствора лактозы после автоклавирования н разливают в чашки Петри размером 100Х15 мм.

13.9.4. Трио-малеиновый буфер (ТМ-буФер) Трис 5 г Малеиновая кислота 5,8 г (МН»)»50» 1,0 г »'е50» 7Н»О 0,25 мг Добавляют дистиллированной воды до 1 л, доводят рН (если это необходимо) до 6,0 и автоклавируют в течение 15 мин при 121'С. Пос»те охлаждения среды до температуры около 50'С добавляют в стерильных условиях: 13.9.8) до- Доводят рН до 4,6 добавлением концентрированной уксусной кислоты. 13.9.7. Бульон Охо(б Среда Охоы»»Г» 2 25 г Листиллирова»»ная вола ! л Стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при 121'С.

М250» 7Н»О 0,1 г Са(НО»)» 5 мг 13.9.5. Сульфаниламидный бульон Минимальную солевую среду М56 (равд. полняют следующими компонентами: Смесь каааминовых Урацил кислот, не содер- 5-Бромурацил жащая витаминов 0,1% 1.-Трнптофан Ксантин 25 мкг/мл Сульфаниламид 13.9.6. Ха-ацетатный буфер НаС»Н»О» ЗН»О 13,6 г дистиллированная вода 1 л 2,5 мкг/мл 50 мкг/мл 20 лщг/мл 1 мкг/мл » з. ми та пи и 13.9.8. Минимальная среда М56 Ма»НРО, 7Н»О 8,2 г КН»РО» 2,7 г (МН»)г50» 1,0 г Ре50,.7Н»0 0,25 мг Добавляют дистиллированной воды до 1 л, доводят рН до 7,2 и автоклавируют 15 мин при 121'С (10' Па). После охлаждения среды до температуры около 50'С добавляют в стерильных условиях: Ми50» 7Н»0 О,! г Са(НО»)з 5 иг Для использования этой смеси в качестве ростовой сре- ды добавляют 10 мл стерильной 20%-ной глюкозы.

13.9.9. Среда М56/2 Среду М56 разводят стерильной дистиллированной водой в отношении 1: 1. 13.9.10. Минимальный агар М56 Готовят минимальную среду М56 (равд. 13.9.8), автоклавируют, добавляют 10 мл 20е(е-ной глюкозы и соответствующие наборы аминокислот и витаминов. 1 объем полученной среды М56 добавляют к ! объему 3,2е(е-ного агара (32 г агара на 1 л воды). Среду и агар автоклавируют порознь при 121'С. Хорошо перемешивают, дают раствору отстояться до выхода всех пузырьков воздуха и разливают по чашкам. 13.9.11.

Характеристики

Тип файла
DJVU-файл
Размер
4,16 Mb
Тип материала
Предмет
Учебное заведение
Неизвестно

Список файлов книги

Свежие статьи
Популярно сейчас
А знаете ли Вы, что из года в год задания практически не меняются? Математика, преподаваемая в учебных заведениях, никак не менялась минимум 30 лет. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6559
Авторов
на СтудИзбе
299
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее