Методы общей бактериологии (том 2) (947293), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Питательный бульон (среда общего назначения) Порошок питательного бульона 8 г Дистиллированная аоиа 1 л часть !!!. гннвтихА 13.9.12. Питательный агар 8 г 15 г 1л Автоклавируют при 121'С (10' Па) в течение 15 мин и разливают по 20 — 25 мл в чашки Петри размером 1ООХ15 мм. 13.9.13. Бульон Репаззау (для ВасП!из км/т/(/(к и других бактерий) Среда для определения антибиотикоа Рнсо № 3 17,5 г Дистиллиронанная аода ! л или 3,5 г 1,32 г 3,68 г 1л Автоклавируют при 121'С в течение 15 — 20 мин, 13.9.14. Агар с антибиотиками К автоклавированному питательному агару (равд.
13.9.12) добавляют один из следующих растворов антибиотиков, стерилизованных фильтрованием: Сульфат стрептомицина (5!нша) 100 мкг/мл Пенициллин С (5!Кша или 5Чн(55) 500 мкг/мл Рнфампии (5!инта) 50 мкг/мл 13.9.15. Минимальный бульон или агар Дввиса В одну колбу (например, Эрленмейерн) вносят: КаНРО» 7 г КН РО 2 г Цитрат натрии 0,5 г в двухлитровую колбу 58 Порошок питательного бульона Агар Дистиллиронанная вода Мясной экстракт Дражжеиой экстракт Пептон Декстраэа 1,5 г 1,5 г 5,0 г 1,0 г или Питательный агар 23 г Дистиллироааниая иода 1л ЫаС! КН РО КаНРО! Дистиллированная вода Мяво, 7Н,О 0,1 г (НН!)ьйо! 1,0 г Дистиллированная вода 500 мл !3.
МУТАНИН В отдельную колбу вносят: Агар (не нужен для приготоилсния бульона) 15 г Декстроза 5 г Дистиллироианная вода 500 мл Оба раствора автоклавируют прн 121'С (10' Па) 15 мин и дают им остыть до температуры около 55'С. Растворы объединяют, перемешивают и разливают по чашкам Петри размером 100Х!5 мм.
13.9.17. 1.С-Агар для верхнего слоя (для локального мутагенеза) Триптон 1О г Агар Дрожжевой экстракт 5 г Дистиллированная ХаС! 5 г вода 7 г 1 л Ингредиенты растворяют, распределяют по бутылям и автоклавируют при !21'С в течение 20 — 25 мин. 13.9.18. ЕС-Агар (для локального мутагенеза) Трентон !О г Агар Дрожжевой экстракт 5 г Дистиллированная ЫаС1 5 г вода !О г Автоклавируют 30 мип при 121'С. Перед заливкой в чашки на каждый литр смеси добавляют следующие предварительно простернлизованные растворы: 0,5 М СаС!а 4 мл 20сй-ная глюкоза 5 мл 0,25тэ-нмй тимидин 40 мл 59 13.9.16.
Бархатные репликаторы В качестве репликаторов используют обычно квадратные кусочки бархата со стороной 15 см. Их заворачивают пачками по 1Π— 20 шт. в плотную бумагу и автоклавируют в течение 10 — 15 мин при 121'С в аппарате, имеющем быстрый выход пара и вакуумное высушивание. ЧАСТЬ П! ГЕНЕТИКА 13.9.19. Спектнномициновый илн стрептомициновый агар (для локального мутагенеза) Готовят 1 -агар (равд. 13.9,2).
После автоклавирования в стерильных условиях добавляют спектиномицин (2 мл простерилизованного фильтрованием бо(о-ного раствора) или сульфат стрептомицина (1 мл простерилизованного фильтрованием 10о(о-ного раствора). Тщательно перемешивают и разливают по чашкам. 13.9.20. Агар для верхнего слоя (для теста Эймса) !Ча С! 5г Агар 6,5 г Дистиллированная вода 1 л Растворяют нагреванием и распределяют порциями по 100 мл в колбы. Автоклавируют 15 мин при 121'С и охлаждают до температуры около 50'С.
После автоклавирования на каждые 100 мл агара добавляют 10 мл стерильного исходного раствора, в состав которого входят следующие вещества: (.-Гистидин.НС! (0,5 мМ) Биотин (0,5 мМ) 10,5 мг/100 мл 12,2 мг(100 мл 13.10. ИСТОЧНИКИ ШТАММОВ И СПЕЦИАЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ 13.10.1. Штаммы Штаммы Елсйег(сл(а со!1. Генетический центр, коллекция штаммов кишечной палочки, д-р Барбара Бахман. Отделение генетики человека, медицинский факультет йельского университета, 333 Се!(аг 31., Меч Начеп, СТ 06310.
Штаммы Васйиа зиб!Шк Куратор генетического центра — коллекции штаммов рода Васйиз, отделение микробно.ногин, Университет шт. Огайо, Колумбус, ОН 43210. Штаммы Ба!топе!!а !урй!тиг!ит для проверки на канцерогенную/мутагенную активность. Д-р Брюс Н. Эймс, отделение биохимии, Калифорнийский университет, Беркли, Беркли, СА 94720. 13.!0.2. Среды, химические агенты и реактивы Ростовые среды. Агар, среды для определения чувст- вительности к антибиотикам, питательный бульон, декст- роза н пр.
Р!!со 1.аЬога1оиез, Ре1го!1, М1, 48232; ВВ1. М!сгоЬ!о!оку Яуз!ешз, Соскеузу!11е, МР 21030. Фосфаты и другие неорганические соли. Ма1!1псйгоб! СЬеппса1з, 51. Роша, МО 63147. Общедоступны через компании, занимающиеся лабораторными поставками. Аминокислоты, 2,3,5-трифенилтетразолийхлорнд, 5- бромурацил, 2-амннопурин, гидроксиламин, 5-метил- триптофап, этнлметансульфонат, эритромицин, нитрозо- гуанндин, рифампин, пенициллин О, сульфат стрепто- мицина, даупомицин, глюкозо-б-фосфат, никотинамида- дениндинуклеотидфосфат, сульфаниламид. 5!пгпа СЬе- пцса! Со., Р.
О. Вох 14500, Б!. 1.ошз, МО 63178. 1СЙ-191 н 1Сц-170 Ро!узс!епсез, !пс., Рац! Ча!!еу !пг!Из1г!а! Рагк, %агг)пй!оп, РА 18976, Лактоза. Лактоза СНД (без примеси глюкозы). 1). 8. ВюсЬеппса! Согр., С!ече!апг), ОН 44!22. Метилметансульфонат, этилметансульфонат, интриг натрия. Еаз!лап Отдан!с СЬеппса!з КосЬсз1ег, Ь)У 14650. Стандартные мутагены для испытаний. Бепзо(а)пн- рен, 2-аминофлуорен, 4-нитро-о-фенилендиамнн. А!г!г!сЬ СЬеппса! Со., 940%.
5!. Рац! Ауе,, М!!ууацкее, %153233, 9-Аминоакридин: 5!дгпа СЬеппса! Со., Р. О. Вох 14508, 51. 1.ошз, МО 63178. Казамнновые кислоты. Кислый гидролизат казеина, или казаминовые кислоты (без витаминов) фирмы РИсо РаЬога1оПез, Ре1го!1, М! 48232. Кислый гидролизат ка- зеина: Г 5. В!осЬеш!са! Согр., С1ече!апд, ОН 44!22. Ароклор-1254. Апа)аЬз апд Со., 80 КерцЫ!с Рг!уе, Ног!Ь Начеп, СТ 06473.
Днметилсульфокснд (спектрально чистый). Бсйтуагг/ (Мапп, ОгапдеЬцгп, Х. У. 10962. Среда Охо!б № 2. К. С. В!о!оп)са!, Р. О. Вох 5441, 1.епаха, КБ 66215. ЧАСТЬ !и. ГЕНЕТИКА Не стерилизованные окисью этилена чашки Петри (для теста Эймса). Мп1а-Аззау с)!зйез, номер по каталогу 1028, Ра!соп 1 аЬога(оНез, 1950 зч'!1!!агпз Ог., Охпагс1, СА 93030 (805485 — 8711). Имеющиеся в продаже препараты $-9.
Доступны нз следующих источников: Магйе(!пй Мапатс, В1опеНсз 1.аЬога1огу Ргос1ис16, 1!!(оп ВюпеНсз, 1пс., 5516 )ч)!сйо!- зоп [.апе, Кепи)пй!оп, МТ) 20795 (301/881-5600), Ме!оу 1айога1ог!ез, !пс., 6715 Е!ес(гоп!с Ог., Зрг!пй[!е!6, УА 22151 (703('642-4800) . Благодарность Нам хотелось бы поблагодарить тех, кто оказал нам помощь при подготовке этой главы: С. Кашнера и У. Чемпнея за советы по методикам локализованного мутагенеза, Линн Харон за указания по описанию теста Эймса, Л. Орнстона за просмотр всей главы и Дебби Чендлер за неоднократное перепечатывание рукописи. 13.11.
ЛИТЕРАТУРА 13.11.1. Общая литература 1. С1омез )7. С., Нарез йг. Ехрегппепм !п ш)сгойа! яепеисз. Лойп %!)еу апс( зопз, !пс., Ыечг Уог(с (1966) . Сборник, включающий описание экспериментов с бактериями, бактериофагами и грибами рода Азрегйп!из; осиову сборника составляют лекции, прочитанные в Хаммерсмитской клинике Лондона (Аиглия). Описываемые эксперименты охватывают широкую область исследований — от флуктуациоииого теста с фагами до генетического картироваиия оргаиизмов рода Азрегл!!!из.
Составлеи по пуи«там в стиле лабораторного руководства. 2. У)гада У. йг. Тйе гпо1есп1аг Ьаз)з о1 пш(аиоп. Но!беп-))ау, Вап Егапс)зсо, 1970 Одиа из иемиогочислеииых полных монографий по молекулириым механизмам мутаций. Хотя с момента ее выхода прошло несколько лет, оиа и сейчас представляет большую цепкость для общего озиакомлеиия с вопросами мутагекеза. 3.
У)гайе У. йу., Вале й. и. Тйе Ыосйеш!з!гу о1 пш1аяепеиз, Аппп. Реч. В(осйеш., 46, 1! — 37 (1976). Дополненная монография У(рейка, вышедшая в 1970 г., с акцентом иа различные типы нарушения репарадии ДНК, которые могут сами по себе оказывать мутагеииый эффект. 4. М(1!ег У. Н.
Ехрег(шеп(з 1п шо)есп1аг иепе!!сз. Со!б Врг1пп НагЬог ) аЬога1огу, СоЫ 5рг1пд НагЬог, Ы. у., 1972. [Имеется перевод: !3. мутации Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике.— Мз Мир, 1976.] Сборник, включающий описание довольно сложных экспериментов по бактериальной генетике, многие из которых взяты из курса лекций, прочитанных в летнее время в Колд-Спринг-Харборе.
Хотя большинство экспериментов относится только к лактозиому оперону Е. сод, принципы обработки мутагенами, методы отбора и нахождение характеристик мутантов применимы для широкого круга молекулярно-генетических экспериментов. 13.11.2. Специальная литература 5. Аде!Ьегд Е. А., Малде! М., Сйел Р. С. С. Ор1ппа! сопсинопв 1ог пш1адепеьй Ьу Х-тейу1-Х'-ппго-Х и!1гоьодпап!д(пе !п Еясйегш)ла сой' К12. ВюсЬеп!. Вюрйув. Яев. Согппшп., 18, 788 — 795 (1965). 6, А!!ел М.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
