Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 99
Текст из файла (страница 99)
Се(апп ьо(06оп (Въ 7;4) Ориопа!, р1еаье ьее 5сср 1. О!ыо!че 08 5 оЕ 5е!аип (Рогсше, 5!5ша) сп 500 ш! о( )х РЬоьрЬасе-Ьис(егегс ьа1)ие. 5сег)!)хе Ьу аисос!алп5. РЬоьрЬасе-ЬиЯегег) ьа)те (РВ5) Ро)у-с-)уь(пе Ориопа!, р!еаье ьее 5сер 1. Ача(саЫе сошшегс(а!!у Ггош 515ша аь а 0 390 (ъч)ч) ьо1шшп ш НО; 861ше 1:10 ш НО Ье(оге иье. 35!ос!е1с Асп15 апс! О!коппс!ео11Е1е5 Р)аьтЫ РЬ)А саггугп8 йе ргоЬе СГР Гиь(оп чессог (СЕОГ(ТЕСН) еисогйп5 сЬе ргосеш о( !псегеьс. Рта сосо! 5г 5гаее 2: СеП Ртерагаг(ои Тот РПМ-РЯЕТ Апа)уз(з 18.85 Ме(1!а СО -(пг)ерепг)епг Ета8(п8 тегПит ТЬгз !осч-Ьас)сПгоппд Пиогезсепсе гпейшп ы соиипегссапу ачас1аЫе Пою ЕПЕе ТесЬпо1оВ!ез ог ай)ссзс СЬе згапдагй Еогпгп!аеюп оЕ Рп!Ьессо'з гпой6ей ВаВ!е'з шей!шп Ьу огпППпВ еасЬ оЕ СЬе Еопогч!пВ: РН !пдкасог РЬепо! гей реп!сППп, зсгерсоигусгп, Со1к ас!й, апй г!ЪоНач!п. 1изс ЪеЕоге пзе, зпрр!еигепс сЬе шей!шп члсЬ яеп1е НЕРЕЯ (Ппа1 сопсепсгасюп 50 игМ) ай)изсей зчссЬ ЫаОН со РН 7.4.
ТЬе !шаП!пц спедшис шпя пос сопсагп согпропепь Йас аге апсоПпогезсепс. Ьрес1а1 Ецп1репеп1 Т!ззие си)гиге р)асез Гб- ог 12-ччеlП Г)з)ипс) ог С!азз Ьогсотед г(ззие си)сиге сПЯЬез (35-тт, Ма(Те)с Согрогапоп) ог С!азз сЬатЬет зИез от сочет81азз сЬатЬег зПг)еь ГсаЬ(е)с, !1ипс) А(1Й6опа! Кеацеп1Я 5гер 2 оЕ(Ьта ргогосо) тес(иггез йе геа8епгз гог а СгалзЕес!)оп те(Ьос(аз г)езст(Ьег) сп СЬарсег 16. Се!15 апс! Т1яяпея СеП )те Гаг(Ьегепт ог зизрепь(оп сипиге) го Ье СтапзЕесгег( ТЬе оп!у сопз!дега!!оп Еог сЬе сЬоке о( сеП суре, осЬег сЬап сЬе!г зп!саЫПсу Еог сЬе зузсеш со Ъе гпчезПцасей, Ь сЬас а Еасс1иу Ъе ача11аЫе со ппшоЬспге Йегп сп югпе гпаппег (зее посез со Ясер ! Еог зиВВезс!опз). МЕс НО0 1. Яеед йе се11з опсо ап арргорпасе зпгЕасе Еог ппсгозсору: Рот 1тре геП ртератапопзг Яеед се1!з оп!о 81азз-Ъоссопсед д(зЬез ог сочег81азз сЬапсЪег з11дез.
Рот сеИртератапопз го ЬеТ5хег( аугет гтапфесг(от Яеед йе се11з оп(о ц!азз сочегз!(рз р1асед сп 6- ог 12-сче1! 1(ззпе сп!сиге й(зЬез. ТЬе Ппа! сЬоке оЕ чеяе! дерепдз оп счЬесЬег Йе сеПз аге со Ье ипсгош)ессей айег сгапз(есйоп; К ю, сопяйег Йе зЬаре апд с!еагапсе зрасе Еог пеед!е ассея. Рог зырепяоп сепг, !пипоЬПсхапоп сап Ье Еасгпсасед чдй Йе ые оЕ гпеспа зпсЬ аз Пе1апп (О.
! зч сч)ч гп РВЯ; апсос1ачед) ог ро!у-с-1уз!пе (ОЛ)! чгЯ зч)ч ш Н О). 1п еЬЬег сазе, соас сЬе зпгЕасе Ьу сочег!пВ еПЬег сЬе чгепз, сочегзПрз, ог сочегВ!ая з!тдез сот -30 пипи!ее чг!сЬ сЬе сЬозеп шеспшп апд Йеп азрггасе сЬе ехсея. Сепг сап Йеп Ье спгесс!у зеедед опсо сЬе соасед зпг(асе. ТЬе сепз сап а1зо Ье иса!псагпед ш зырепяоп сЬгоиаЬоис сЬе сгапз(еспоп ргосес1ше апд сЬеп ипиюЬПЬед 'ипгпесаасе!у Ье(оге !шаВ!пВ. Опсе !шшоЬП!гей, иисгосп)ессюп ы а1зо розяЫе.
Р!асс сепг ас а с!гиясу зпсЬ сЬас сЬе сепг аге -40чтз сопПпепс сЬе ЕопочйпП с!ау. 2. ТгапзЕесс йе се11з чч(сЬ сЬе р1аяпсд(з) епсод(пП сЬе СЕР-саППед ргосесп(з) оЕ шсегезс, ияпП апу опе оЕ йе сгапзЕеспоп тесЬодз дезспЬед сп СЬарсег 16.
3. 1пспЪасе сЬе сгапзЕессес1 се11з ипс1ег сЬе арргорпасе сопд(с(опз Еог 16 — 24 Ьопгз со а11осч сЬе се11з со ехргезз сЬе ргосесп оЕ (псегезс. 1п югпе сазез, Йе !ече! оЕ ргосе!п ехргеяюп пзпзс Ье сопсгоПед асспгасе1у. 1Е ЙЬ Ь сЬе сазе, гс Ь адчьаЫе со сопядег орспп!х!пВ сгапз(есс!оп ейгссепссез аз зчеП аз сЬе ехргеяюп репой Ье(оге сЬе РЫМ шеазпгешеис, из!пВ а геВп!асей ргоспосег со йпче ехргемюп оЕ Йе ргосе!п (р1еазе зее Ргогосо1 5: 51аее 2: СеП Ргерагапоп Еог р(13ъ7-рКЕТАпа|улюа 18.87 АЕТЕК|ъ|АТ$ЧЕ РКОТОСОЕ: РКЕРАКАТ1О|ъ3 ОГ Г!ХЕ!2 СЕ|05 ГОК ГЕ!М-ГКЕТ А|ъ|АЕУ5 ТЬе геаВеп(6 иаею3 Еог (Ье ргерагаИоп о( Ихес| сейа Еог ГЫМ-ГКЕТ ехрепгпеп(6 Ьаче Ьееп ор1|т|гею3 (о гп пзые (Ье с|оепсЛ|пВ о( СГР пзиюапюа апю$ Яоогеасеп( ю|уея ТЛВ рго(оса| сап Ье аррйею| еая!у Ео 1Ье ргер (юп о( Ихею| сей хам р|еа (Ьа( ю|о по( гею|и |ге (геа(из ел( ъч|(Л 1аЬе |ею! апИЬойеа, Изг ехапзр|е, аапзр|еа |Ьа| Лане Ьо(Ь (Ье ю|опог апю| ассер1ог ИиогорЬогеь ехргеааею3 аа Ииогеасеп( Еиь3оп рго(е$пя И (ЫВ |а 1Ье сабе, опз|1 1Ье Тп(оп Х-1 00 реггпеаЬИ|гаю|оп а(ер (5(ер 5 Ье|оъч) алд ргосеею$ ъи(Ь (Ле гегпа|пю|ег о( |Ье ргоюосо| Еог Их|од апю$ пзоип(|пВ.
Гага(оппа|ю|еЬуде 'ь !Ье Иха(ве о( сЬоюсе и Ьеп рег(оггп|пе ГКЕТ ехрепгпеп(6, аа И 'ь а сгоьаИп|ю|08 аВеп( 1Ьа| ргеаегчеа (Ье |п(ецг|юу о( рго(е|п Ы1егасйопа апю3 ю|оеа по( ргес|р$(а(е сейи|аг рго(е$пя СА(ЛТ|ОЬ|ю Р1еаае аее Аррепй|х 12 Еог арргоргюа|е Ьапю|1|пй о( пза1егюаВ пзаг|юею$ ъчю1Ь <! > АЕ$13|1|опа! Ма1еПа15 Су31аЬе3еюЕ ГВЬ 1га8гпепюа ог ъчЬо!е ап(|ЬюхЕу 08|и1ес1 |и 7% (ию Ы Ьоч|пе аегигп а|Ьит|п |и Р85 (айе|ед ргозе|и В ргерагею3 аа деюг|Ьед |и 51аВе 1. Мото( тоип8п8 теюЕ(ит Мнило! В |Ье с$еа|гею3 гионию|ии гиедвги аа |1 йоеа ио1 ю|неисй СРР Яногеасеисе.
М|х 6 ги! о( В|усего3, 2.4 В оЕ Моиза! 4-ВВ (Са|Ыосйеюи, 475904), апю3 6 ги! о( ю3|а(3! ей ю)е|ои|гею3 Н,О. й. 5Ьа1юе юйе пнхилге Еог 2 Лонга а1 гооги 1егирега1нге, 1Ьеи аюЫ 12 гп! о( 200 гим ТияНС! (РН 6.5), аию3 |иснЬа1е аю 50'С иа|Ь оссаяоиа! йаЫиВ ниюй |Ье Моъио! ймойеа (-3 Лонга). ш. Ейюег |Ье ю|наои юйгонВЬ а 0.45-ииз гиеюийгаие 61ег аий аюоге Ы айинои Еог иееЬ а| 4 С ог Еог гпоиюйь а1 -20'С.
Рагауогта(ю(ейфе (4%1 ИхаВче юЕоИоп <! > 1. О(аю|че 4 Во( Рага(оггиа)йейуде (5|Вюиа) |и 50 ги! о(ВВВИею3деюийей Н,О, аид юйеи аюЫ1 из! о(1 м НаОН 3 ю|нйои. й. 56г юйе гиЫиге Велю|у ои а Ьеаю|ий Ыосй ( — 65"О ний! 1Ье Рага(оппаЫеЬуде 'ь даю|чей. 'ш. Нехю аюЫ 10 ги! о(10х РВ5 аий айоъч юйе ш|хюнге юо соо! Ео июги юегирегаыге. Ад|ня юйе рн юо 7.4 няийз м ' НС! (-1 из| В лесю|ей) аию3 ЕЬеи аю3)на( юйе Ииа! ил|игле юо 100 ги! юи1Ь йййед ае|ои|гею3 Н,О.
|и Рйюег юйе го|и|оп Июгонйй а 0.45-огп пюеюиЬгаие 631ег 1о гегиоче аиу рагйол3аюе изапег, апю3 аюоге |и айю|иои а1 — 20"С Еог юечега$ июиюйя Ачок| гереаюей Егеегеююйаъиий о( юйе Рага(оггиаЫейуде ю|нйоп. ЕЛгтеаЬЕ|га(юоп ю|и1|оп 0.1% (ъчАю) Тп1ои Х-100 (5|Игла) юи РВ5 Оиепсйюп8 ю!и1юп 50 гим Тпа-С! (РН В.О) 100 гим НаС3 3юиЬЬег сетепг ог тойеп 7% (иМ а8агоае Орйоиа|, р|еаю яюе 51ер 10.
58то1оа Еог ЫЫ308(са7 асФйу Ео Ье толю(огас( Ме1Лою$ 5еею3 (Ье сейа оп(о е1(Ьег В!ааа сочегйра ог В!ааа сЬатЬег айю|еа апю3, И песеаюгу, (гала(ес( аа ю|еюг|Ьею$ |п 1Ье ргесес3|пВ рго1осо1. 2. Гойоъч|08 югапйесйоп апю3 |псиЬайоп (о айои ехргеаа|оп о( (Ье (гала(ес(ею3 целе, 1геа( (Ье се|В юм(Ь (Ье ю|еа|гею3 51йпи1иа Еог ап арргорпа1е рег|ою$ оЕ (нпе. 5. ЗАюааЬ 1Ье се1В |и4се |п РВ5, аар|га(е Изе ИиЫ, апю$ аюЫ 4% рага(огпза1ю|еЛую|е (о Их 1Ье се1Ьх 3псоЬа(е (Ье ~ ю сейа Еог 10 пз|пи1еа а1 гоогп 1егпрега(иге. 4.
ЯюйсЫузчааЬ 1Ье сейа и4|Ь ю|иепсЫпц 50101|оп (о г|пае (Ьеехсеаа Иха(йе апю3 |Ьеп июааЬ ада(п Еог 5 го|пи(еа (о ю!иепсЬ (Ье гепза|п|пц а1ю|еЬую$е Вгоиря 1Е 31 В ио1 иесеаадЯу юо юи1гойнсе 3айе|ею$ рго1е|и |и|о 1Ье се1Ь, ргосеею3 1о 5(ер В. |псиЬа(е (Ье сейа |п реггпеаЬ|1ыа(юп 60101|оп Еог 15-20 пипи(ею 6. ВааЬ 1Ье сейа (ъч|се ииТЛ РВ5 (о геточе (Ье реппеаЬ|1ыаИоп ю101|оп.
|псиЬа(е |Ье сочегайра ог сЬагпЬег айю|еа юп а |аЬейпВ юЫ1юп о( СуЗ-1ВЬе|ею3 ГаЬ ЕгаВюпеп(а ог и Ьо1е ап(|Лог|у ю|йи(ес3 |п 1% Ьоч|пе аепнп а1Ьипзюп юп РВ5 Еог 1 Лонг а1 гоопз юегпрегаюиге юп а Лит|ю||йес| сЬагпЬег. То пййи(ге 1Ье ю|иаийюу оЕ аиИЬоду ог Рай июею$, р|асе 1Ье сочегйрь сей-а|ю|е доил ои 25-и| ю|гор|еюа о( 1Ье апйЬоду юЫоп. ТЬВ саи Ье РегЕоиией ои а айеею о( Рага63юи ог огйег с|еаи, иогьйс|ю ялг|асе. То геюгече |Ье соъ-, 18.88 СЬаргег |8$ Ргогет )игегасдои ТесЬио(08(еь д о| $Ле )псиЬагюп, р)асе а 100-)д дгор)е! о| РВ5 аг гйе ед8е о| гйе сочегйр; $ЛВ ъч)й гаВе Фе пйу го Всат )Ле едйе ъъъйь )еъче!ег'ь (огсеря акоп гапйеь |ог )псиЬа(юп аге Ьеичееп 1 апд 100 пм соггеаропд)пй го 0 15-1 5 р8ггп! |ог а ъчйо)е адчьаЫе го рег(оггп а Гйгайоп )о дегеггп)пе гйе орйгпа! й)ийоп $Лаг геен)гх )п ер)горе яъ!нга!юп.
дегес! дъе ас!Ыайоп ьгаге о| РКСа, )пснЬа)е МСГ)ОА се! В ъч)дь 10 ий(гп! СуЗ-)аЬе)ед )250 апй- 3) апд ! О РВггп! Огейоп-Сгееп-)аЬе)ед апй-РКСи (МС5-ОС) )п РВ5 сопгяп)п8 1% Ьоч)пе ъегнгп 8Ьигп~п. 8. ъЧаеЛ (Ле сочегйрь Вче $(тех (п РВ5. 9. В)ос о(( ехсейй РВ5 чл(Л а (вене ас (Ле едВе о( (Ле сочег51!р, са(дп8 саге по( (о а)1оъч (Ле се1Ь $0 гйу ои(. ! ъ О. Моип((Ле сочеге!)ра оп ) 0 р1 о( Мочч)01 оп 81аае т)сгоесоре 51)де8 апд а11оъч (Ле пъоипдп8 гпесйигп со Лагдеп нчего)ВЛ( а(4'С. ТЛе Мочдо$ тие(501!д)(у Ьегоге )гпа8$08 ог (Ле сочегйр гпи51 Ье еесигед Ьу гиЬЬег сегпеп( ог пю1(еп аВагоае ()% )п Н О).
А)гегпайче)у, 88)аъе сйагпЬег айдекс Лаче Ьееп иеед го ргераге )Ле се)Ь, р)асе 10-р! дгорь о1 Моъъйо! очег еасЛ ъчей о| се(В апд йъеп р!асе а )опк айиаге сочегйр очег гйе епйге йде, гай)пй саге го пнпхпие а)г ЬиЬЫея ТЛе йдеь аге поъч геаду ю )гпайе; ргассед го 5)а8е 3. А ! МРОКТАЛ)Т 0о пег нее пай ро)ей аь $Л)ь Лае Ьееп Фоъчп го г)непсЛ СГР йногеьсепсе. АТТЕКНАТ1ЧЕ РКОТОСОЕ: М1СКО1)ъ()ЕСТ!Ой( ОГ ПЧЕ СЕЕЕ5 1 ТЛе )п(годисйоп о( ОНА (пго се)15 Ьу гпкго)п!есйоп 'ь !Ле пъе(Лог| о(сЛо)се ъчЛеп а Л)ВЛ 1ече( о| соп(го11ег1 ! рго(еп ехргеяйоп ь гег)и)гед ((ог а де(а))ед (есЛп(са) деесг)р(юп о( т)сго)п)есйоп, р1еаее аее Реррег)ъо)с е! ~ а1. 119981 апд 5рес(ог е( а). 1) 998, СЛар(ег 831). ъйгЛеп |Ые-се11 ГКЕТ ехрег)теп(5 аге (о Ье рег!оггпед, )аЬе1ед ' рго(е!05, еисЛ аь ГаЫгаВтеп(5 ог гесопъЬ|папС рго(евк тиаг а!50 Ье гп)сго)п)ес(ед.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
