Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 103
Текст из файла (страница 103)
АпИЬо4)!ей ТЬе Мо|еси1аг |игегасйоиа Кехеагй Сгоир ГМ!РС) ъч!(Ыи Фе А5юдагюи о( Вюгио|еси!аг Кехоигсе Еасй)йеь ГАПКЕ) (гчгчъч.аЬг~огц) гесогигпеигЬ |Ьаг ргоге|и хат р!ев Ье ргерагег1 lог В1Асоге аиа!уяа Ьу Ьийег ехсйаиее д!а!уяЬ ГЗ г!тех 'в 500 чо!ото) ада!иь1 НЕРЕЕ-Ьийегед кайпе, аид |Ьеи сеигг)1идед а| гиаххпит ьреед |и а геЕг)аегасед гвсго(ице аид йиаПу раахед гйгоиай а 0.22-)оп й!)ег. ТЬе гехи!г!иа ргосе|и соисеи|гайои ь десегихиед Ьу аЬюгЬаисе аг 200 иги иь)иа Фе са!си!агед ехйис|юи соей1с|еиг Еог |Ье рагйси|аг ргоге!и ог рерйде. А4оиье аид-Т5Н тоиос)оиаl аидЬоду (1 т8)т) ги НЕРЕ5-Ьи((егед за)!ие) Тйгх апг!Ьог)у Ь сопииегс1айу ача11аЫе (гоги А|ехоп Тгепг), 1пс.
йаЬЬ(1 аид-тоиье Ес дотат (8АА)с) (30 и8)т) т 10 тм На-асе1а1е рН 5.0) ТЬЬ аийЬойу Ь сопииегс|айу ачайаЫе Егот В1Асоге. Т5Н Г20 )гм )и НЕРЕ5-ЬиИегед ьа1(ие) ТЕН Ь соиииегс|айу ачайаЪ|е Вот А|ехоп Тгепг), 1пс. Ртососо1 6: 5таче 1: Ртератапоп оГ йе Саргите 5ит~асе апй Техт Вгпй!пе 18.105 5ресса! Ес!сс!ргпеп1 В!Асоте гпяститпепс ТЬе !пясгиптепс !ис!ийея йе В1Асоге соисгос яоусчгаге апг1 сЬе В1Аеча1иасюп гайрате.
ТЬе егти!ртепс апд яосичаге аге ача!!аЫе Кото В1Асоге, !пс. 1иЕоппасюп ь ача!1аЫе ас ячгггч.Ьсасоге.сот. 5епяот СЬЕР СМ-5 МЕТНО0 Ргппагу Агп!пе Сосср!спд оЕ ссАМС 1о 5еп5ог С!Зср СМ-5 5ссгЕасе ТЬся ргосейиге са!сея -45 пиписея. ТЬе сопппапйя аге ассеяяей сЬгоиВЬ йе ри!1йоччп шепия ог Ъу йе копя оЕ 11те соо1Ьаг оЕ сЬе В1Асоге сопсго1 яоЕсячаге. 1. ЕЗоссг 5епяог СЬйр СМ-5 ш сЬе В1Асоге шясгшпепс. 2. Рпше ия!па 6!сетей апй йеааяяей НЕРЕ5-ЬОГГегей яа1!пе. 3. Р!асе СиЪея сиота!и!08 100 Гт1 еасЬ оГ ЬЕН5, ЕЕЗС, еСЬапо1апппе, апй КАМ Рс апй 20 шМ НС1 ш арргорпасе рояНопя ш йе аисояагпр1ег гас1г сп йе В!Асоге.
4. Р1асе ап егпрсу сиЬе сп йе аисояашр1ег гас1г сп сЬе В1Асоге. ТЬе 1гигпоЬгсиайои ЪЧгааМ, гЕ ачаг1аЫе, сап Ье ыей со регуопп тЫя ргосейиге. !ТЬе СЧсгагйя аге яапдагй чйсЬ В!Асоге сопсгос яоссячаге чегяопя З.О апй ЫВЬег Еог йе В1А2000 апг1 В!АЗООО.! 1Г ия!пВ йе госгагд, тпяреояе сЬе чосшпея яресг6ей. ТЬе гагаес пшпЪег оГ КСЛя оЕЬоипй ВАМ Рс ы 13,000. 5. 5сагт сЬе шяспипепс ас а Вотч оЕ 5 Ст!/ш!писе очег опе ЕЕочч се11.
6. Тгапясег 75 р1 оЕ!х!Н5 со сЬе етпрсу мЬе. 7. ТгапяЕег 75 р! оГ ЕЕЗС со сЬе яаше шЬе. 8. Мтх йе сопсепся оЕЕЬе сиЬе сои!а!и!пц йе ХН5 апй ЕЕЗС. 9. !и!есс 35 р1 оГ йе ХН5ЕЕЕЗС пихсиге со асВчасе сЬе яигГасе. 10. !и!есс 35 р1 оЕ йе КАМ Рс со соир!е сЬе апс!Ъойу со сЬе ассл асей яигЕасе. 11. 1п!есс 35 р1 оЕ ейапо1апппе со йеасс!часе ехсеяя геасВче агоиря. 12. С сшсЬ!и!есс 10 р1 оЕ 20 птМ НС1 Ео!!отчей Ъу Ехсгас1еап со гепшче попсоча1епс1у Ьоипй шасепа1. 13. !Зесегш!пе йе 1ече! оЕ КАМс Ъоипй Ьу р!асш8 а Ъаяе1!пе геротс ро!пс ЬеЕоге йе ясагс оГ йе КАМс !и!ест!Оп апй а яесопс1 герогС ро!пг 2 пипитея айег йе епй оЕ СЬе 20 шМ НС1 ш!есНоп. ТЬе Йпа1 КСЗя оГ ВАМс иигпоЬСКтег1 яЬои!й Ье Ьесягееп 10,000 апй 13,000; й а 1оячег 1ече! ь оЬтагпей гс сои1й Ье йие со а 1огчег сопсепсгайоп оЕ ВАМс шее, ог ияспа 14НЗ апд ВгтС яосийопя тЬасЬаче Ьееп яогей Гог !оиаег йап 2 топйя.
А яшсасе ейсЬ Геячег РЛЗя оГ КАМс гя ияеаЫе, Ьис сЬе чо1итея оЕ апи-ТЗН иаецу чй11 пеед со Ье айуиясед ептргпса11у; сп Вепега!, гпоге яч!11 Ье геошгей со асЬгече йе йеяЬед 1ече! оЕ Ыпй!иВ, 14. 5сор сЬе Вотч, с1ояе сЬе сопппапй гсиеие гчшйосч, апй яаче йе герогс 6!е. ТЬе В!Агате сап Ье 1егс оп ЗсаийЬу ЕСопсгпие! ас сЬЬ рогат, ог сЬе яигЕасе сап Ье ияед тпгесс1у гп йе пехт яесйоп. ТЬе ВАМс яигсасе ь гтшсе ясаЫе !есс гп сЬе пгасЬгие гчссЬ ЬиГГег Вочйпц сЬгоиВЬ йе !пяспипеис. А1сегпасе1у, сЬе сЫР сап Ье ипгсос1гей апг1 ясогегс ас 4'С!п а 30-гпс сотса! сиЬе сои!а!пспу а япа11 агпоши оЕ Н СО сЬе яигсасе гч!11 Ье ясаЫе Гог яечета1 гчеетгя потей сп сЫя ягау.
Ртогосо! бг Вгаее 1г Ртератайоп о1 гЬе Сарепте 5ит1асе апй Теег Вгпйпе 18.107 Г1С0ЙГ 18-27 Ап6-Т5Н В!п61п 1о КАМ Гс ТЬ1я р!ог аЬогна ГЬе геао1гь гчЬеп ГЬе аатпе сопсегйгаг!оп аег1еа о1 Т5Н га 1п1есге6 очег гЬгее!ече1а о1 ап6- Т5Н саргиге6 Ьу а КАМ Гс аог!асе аь нче1! аь очег гЬе КАМ Гс аиг1асе 1гяе16 ТЬе бага Ьане Ьееп уагапь1отгпе6 ап6 ГЬе гееепегагюп !и!есгюп Ьаь Ьееп гегпоче6 1гогп еасЬ сус1е. ТЬе Ь!КЬ 1ече1 о1 гергодис!Ь!1- Ку о1 ТЬе ап6-Т5Н Ып61пе го гЬе КАМ Гс 1а аррагегП, ая 1а гЬе ага661ту о1 гЬе 1пгегасгюп о1 гЬеае ьно гпо1- есо1еь.
ТЬе 1онч !ече1 о1 !птегас6оп ЬеЬчееп ГЬе Т5Н ап61Ье КАМ Гс аогГасе га а!ьо 1Пивггасеб !и ГЬ1ь 61аВгагп. Ргогосо1 6: 51адесй К~пес)сАпа1У|15 оТГЬеАпГ)ЬодУ-Аппп Тпгегасг)оп 18.109 Ап6Ьойе5 Моиае апд-Т5Н топос!опа) апВЬоду (! тат! и НЕРЕ5-Ьиууегед аа)1пе) ТЫв апйЬойу Ь сошп|егс|а1!у ача|!аЫе 1гогп А!ехоп Тгеп|1, !пс. ВВ1ше |Ье ап|1Ъоду |о 2 пй/ш! ап|1 ргераге 1000 01 1ог |Ье чо1огпе гес|шгед) |о асЫече |Ье гагйег геюпапсе оп1ь аа г!егегш)пед 1п 5|ера 15 — 20 о15|айе!. Т5Н 120 рм )п НЕРЕ5-Ьиууегед хайпе) ТВН 'ь сопппегс|а11у ачайаЫе Егош А!ехоп Тгегн1, 1пс. Ргераге аег1а! Й1о|1опа о1Т5Н 1ог |щес|юп; РгеРаге аепа! ййо|1опа о!200, 100, 50, 25, 10, апд 5 пМ Т5Н, еасЬ гп 280 Р! оу |Ье гопп1пй Ь011ег мед 1ог Йе ехрепгпеп|.
й. Р|арепае 70 П! о! еасЬ сопсеп|гайоп шго 1ош р!а||ге 7-ппп ч)а!а апд сар еасЬ ла1. |й. Иасе |Ье ч1а!а ш |Ье арргорпа|е рог!1!оп |и |Ье В1Асоге гас1|, аа сйгес|ед Ьу |Ье аагпр1е 1оор рагап|е|ега. йрес$а! Ег!о|рпзепй В|Асоге 1паггитеп! ТЬЬ 1пс!одеа |Ье В1Асоге сопгго1 аойгчаге апд Йе В1Аеча!пайоп аоуггчаге. ТЬе ес1о1ргпепг ы ача1!аЫе Ьош В1Асоге 1пс. !пуогп|айоп Ь ачайаЫе а| гчггъч.Ь1асоге.сош. 5епаог С)йр СМ-5, соир)ед го ЯАМс аа деаспЬед )п 5гаде 7 МЕТНО0 ТЬе аес!пепсе Ье1очч сопяага оЕ йгее ше|Ьо|1 Ыос1|а ог аес!|опа: йе МА1Х, йе ОЕР!ХЕ АРГОС, апд йе !)ЕР!ХЕ 5АМРЕЕ. Хосе йа| йеге аге Еопг г)ЕР!ХЕ АРВОС Ъ|ос)са, опе Еог еасЬ оЕ йе Еопг АРКОСа геуеггед |о |и йе МА1Х (Ъ|пд1, Ъ|пд2, Ь)пдЗ, ап|1 Ь)пд4).
гггЬеп |Ье В1Асоге 506- ччаге ед)га а ше|Ьод, |Ье гпе!Ьод сопппапда ъч111 Ье гчг)ггеп |и сарпа15 апд |Ье пхег-дебгпед рагашесега те!11 Ье ш 1о|чегсаае 1енегх. ТЬе сопппепга Е011огч)па ап ехс!ашапоп рошг (!) аге зееп Ъу йе шаггпшеп! аа |ех| га|Ьег |Ьап со|пп|апд соде, апд аге 1паеггед |о ехр1а)п |Ье а)ап16|сапсе оЕ йе ргесейпц сопппап|1. 18.112 Оларгег 18: Ргогет Тпгегасдоп Тес)лпо1ой(ев А)ъ)А1У535 ОЕ 0АТА Айег (Ье гип 'ь согпр|е(ед, ореп (Ье В|Аена|иа(юп войъчаге апд )плрог( Гйе сус|ев йогп (йе герог( Ие. б (Ье гпе(Ьод ънав гип ав ргевеп(ед аокие, (Ье й(е ъчй! сопв(в( о1 64 сус|ев.
Гог а ргей0 Ппагу еча|иабоп ог (Ье дага, Ьг(пб ай (Ье сус|ев (вепвогйгагпв) (п(о опе р|о(, апд У-(гапв(опп (Ье сигнев )ив( Ье1оге (йе в(аг| о1 (Ье |п|есбоп о1 (Ье апб-Т5Н. ТЫ в вбои)д вЬоъч (Ье гевийв о1 (Ье (п)есбопв о1 (Ье гййегеп( сопсеп(га(юпв о( Т5Н очег (Ье (Ьгее д(йегеп( виг(асе депябев о1 апб-Т5Н апд (Ье соп(го! виг(асе (Г)йоге 18-27). То рег(оггп а пюге де(айег3 еча|иа(юп, ве|ес( (Ье сус|ев соггевропгйоб (о еасЬ о( (Ье виг|асе депв)бев о1 апб-Т5Н |п(о верага(е р|обб бъеге в|юи|д Ье (оиг р|оь соггевропд(пй (о |Ье |Ьгее дбйегеп( |ечеВ о1 апб-Т5Н сар(игес! Ьу (Ье КАМс виг(асе апд (Ье соп(го! виг(асе.
НуогЫпй ъи(Ь опе р|ос а( а боле, гегпоче бле гейепега(юп (п)есбоп апд апу а(г вр(йев (Ьа( гпау Ье ргевеп(. П гпау аВо Ье Ье|р(и3 (о гегпоче (Ье героп соггевропд)пй (о (Ье Ьвгйпб о1 (Ье апб-Т5Н. ТЬе вепвогбгапь (сигчев) в|юиЫ (Ьеп Ье У-(гапв(огплед Ье1оге (Ле Т5Н )п)есбоп в(аг(. Ппабу, (Ье вепвогцгагпв вЬоиЫ бе Х(гапв(оггпед во (Ьа( еасЬ о1 (Ье (п|ес(юпв в(агь а( (Ье вапле 6пле. (АгЬеп ехап йп(пВ (Ьеве р|о(в, |( ь аррагеп( (Ьа( |бе |ене! о1 Ь~пд)пй о1 (Ье Т5Н (о (Ье апбЬос3у виг1асе ь |оъчег блап ап((с(ра(ед 1гопл (Ье в(о|сЬюгпе(гу апг! габо о1 пло|еси|аг ъне|ВМ о1 (Ье пло|еси|ев.
Еог ехаплр|е, 1ог (Ье р|о( соггевропд(пб (о (Ье Т5Н сопсесбга(юп вепев |п|ес|ед очег 340 РОв о1 сар(игед апб- Т5Н (Г)риге 18-28), (Ье гпах|гпилп гевропве |в — 140 Р()в, ъчЬегеав 250 РОв 'ь ехрес|ед (2(3 х 340 = 227). ТЫв д)бегепсе гейес(в а |оъчег дерее о1 |п(егасбоп Ье(ъчееп (Ье апбфеп апд апббоду |Пап 2:3.
Опсе (Ьеве ргосес|игев аге согпр|е(ед, (Ье да(а сап Ье ге1егепсе-соггес(ес! Ьу виЫгасг(пб (Ье вепвогВгапл геви|бпб (гогп (Ье |п|есбоп о1 еасЬ сопсеп(га(юп о1 Т5Н очег (Ье РАМС виг(асе Ггопл (Ье вепвогйгагп геви)бпй 1гогп (Ье |п|ес(юп о1|йе вапъе сопсеп(габоп о1 Т5Н онег (Ье апб-Т5Н виг(асев. ТЫв виЫгасбоп В ча|Ы Ьесаиве (Ье Т5Н доев по( Ыпд го Гйе РАМС соп(го| виг(асе.
Саге пюв( Ье ехегсьес! ън леп иипц (Ье (пПпе виЫгас(юп 1еа(иге о1 |Ье В|А2000 апд В)АЗООО, апд Ейе гевропве о1 (Ье 'асйчсйла| Яоъч сейв гпив( Ье ехагп(пед Ье1оге (Ье виЬ(гас|ед да(а аге апа)ухед йлг(Ьег. Еог еасЬ о1 (Ье ейгее р|оЬ гергевепбпц|йе апбТ5Н (п(егасбпй ън(бл Т5Н, а (иг(Ьег соггес(юп сап Ье гпаг|е Ьу виЬ(гасбпВ (Ье Ьийег |п|есбоп вепвогрзпл 1гогп (Ьове геви|бпй 1гогп (Ье Т5Н сопсеп(габоп вепев (Г|рлге 18-29).
ТЫв виЫгас(юп ъчй! гегпоче апу сЬапбев !Ьа( аге соплплоп (п ай (Ье сигнев висЬ ав дпб ог а гпасЫпе ебес(. ТЬе гевий(пВ р|оЬ аге поън геаду (о Я( со (Ье Ыпебс гподе! (Ьа( Ьев( девсг)Ьев (Ье геас|юп Ыпебсв 1ог (Ье де(егпбпабоп о1 (Ье (г, апд |г„. ТЬе В)Аена)иабоп войъчаге согпев ъъ((Ь а пигпбег о1 плоде)в апд айоънв (Ье ивег со плайе гполййсабопв (о !Ьеве ог со адд облеь. |и гйе саве о( Т5Н |п |Ье Яоън Ь~пд(пб (о (Ье апб- Т5Н сар(игес3 Ьу (Ье КАМс видасе, а((ЬоиВЬ еасЬ апббоду 'ь Ыча|еп(, (Ье Ыпд(пй о1 еасЬ о1 (Ье Ьчо Т5Н пю|еси|ев (в )пдерепдеп( о1 (Ье о(Ьег.
ТЬеге1оге, (Ье арргорпасе гпос|е|в (о иве аге (Ье )61 ((апцгпи(г) Ь|пд(пб гподе(в (А 4 В л-ъ АВ). О(йег ргедейпед гпог|ер ргомдед |п бее В|Аена|иа(юп войъчаге в|юи|г! Ье (ев(ед (о вее ъчЬа( с|бйеге осев (Ье чапаи в плогИсабопв ила(ъе | п (Ье й бей о1 (Ье с3аса. ТЬе гподе! ве|ес(ед со 3йив(га(е бле Яббпб ъчав (апбгпи(г Ь~пд)пй ъч|бл а соггес|юп (ог плавв (гапврог( апд ге(гасбче |пдех д)бегепсев ас Ьо(Ь (Ье в(аг| апд епд о1(Ье |п|есбоп. ТЬь гподе3 ъчав ивед (о Гб да(а йопл Ьо(Ь ипсоггес(ед (гаъч) баса (Г|рлге 3 828) апд доиЫеге(егепсед с|а(а (Е(йоге 3 829) ияпб 81оЬа| веб)пбв 1ог)г, апг3 (г . ТЬе оп|у дбйегепсе (п (Ье апа(ув(в о1 (Ье гаъч апс! соггес(ес! с|а|а ънав (йа( (Ье ча)ие о1 )г, (ог (Ье гаъч с|а(а ъчав (ъер( сопв(ап( а( 3 х 10в ((Ье де1аий ча|ие); (Ьь епвигег! а геавопаЫе ча|ие 1ог (Ьь рагапъе(ег. ТЬе ас|иа! ча|ие 1ог |с дерепдв оп бле пло(еси|аг плавв апд бле яоън га(е; 1ог Т5Н а(а яоъч о1 3 О )ъ)(гп(пи(е, (Ье ча|ие ь 5 4 х 30в.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
