Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 106
Текст из файла (страница 106)
ТЬЬ арргоасЬ УНП 8епегасе а роро!асюп оЕ 088опис)еос!дек ЕЬас сопсашк арргох)пса!с!у ес)иа) гадок оЕ аП 64 содопк ас ечегу роясюп оЕ де8епегасу. Носчечег, йск арргоасЬ Ьак ьчо д(кадчасгса8ек. Бгкс, йеге Ь а 3 ш 64 сЬапсе сЬас апу опе сос1оп РНП Ье а сЬасп сеппспасог. ТЬЬ ргоЫепс Ь пос кег!оик ак 1оп8 ак ЕЬе гапс)ош о1«8опсегк аге япаП ш кие. Носчечег, споге сЬап опе сЬ«гд оЕ 24-шегк (сойп8 1ог гапдопс оссарерсЫек) апд ссчо сЬ«г«Ь оЕ 48-шегк (сосП08 Еог гапс(ош ЬехадесарерсЫек) ппП сопса!и ас 1еая опе сЬасп-сегпппайп8 сос)оп.
5есопд, Ьесаике оЕ йе де8епегасу ш ЕЬе Пепейс сос1е, апипо аспЬ РНП Ье гергекепсед ш ЕЬе сПкр1ауед рерсЫек чдсЬ д!ЕЕегессс Егес)иепс!ек. Рог ехапср1е, 1еисспе, кеппе, апд аг8(п!пе, мпсЬ ях сос(опк арсесе, сч«П арреаг ях сипек псосе Егесрлепс1у сЬап сгурсорЬап асн! псесЬюпше, Ас ргекепс, сЬе оп!у ргасйсаЫе псейос) оЕ купсЬеяпп8 рооЬ оЕ де8епегасе о1с8опис!еосЫек Ь со ые шсхсигез оЕ деохупис1еокЫек ак ргесилогя Тес Ьу ияп8 кисЬ ппхсигек, сс Ьесошек ппрокяЫе со купсЬеяхе а кес оЕ де8епегасе о1«8опис1еосЫек сЬас соде Еог рерсЫек ш счЬЫЬ аП 20 апнпо асЫк аге д!кр)ауед сп еасЬ роясюп счссЬ есрга1 Егес)иепс!ек. Весаике ЕЬе пшпЬег оЕ росепсса! рерсЫек Ь ко 1аг8е (кее ТаЫе 18-14), П Ь ипрогсапс со )сеер ЕЬе кес)иесссе сопгр1ехПу оЕ сЬе роо! оЕ с1е8епегасе о1«8опис1еодс)ек со а псшипшп ко йас рерсЫе "кесрлепсе красе" сап Ье кеагсЬед псоге еЕЕ«с!епс1у, ТЬеге аге 1«чо рокяЫе счаук со гедисе сЬе кес)иепсе сопср1ехйу оЕ йе о1«8опис!еосЫе рооЬ (1) Ьу ассерйп8 а 1ппПес) кос оЕ апппо асЫк ас юспе ог аП оЕ ЕЬе роядопк сп сЬе рерсЫе; (2) Ьу епср1оуш8 пис1ео1Ые "с1ор!08" ксЬегпек сЬас гек1псс сЬе ЕЬ«гс) пис1еосЫе ш еасЬ сос)оп со С ог С (ПеЫЬааг-О!коп ес а1.
! 991), ог б ог Т (5сои апд 5писЬ 1990). ТЬеке гезспсйопк ргос)исе 1гипсасед чегяопк оЕ ЕЬе Пепеск соде (кее ТаЫе 18-15) сЬас епсоде сЬе епйге кес оЕ апипо асЫк ияп8 оп1у Ьа1Е ак гпапу содопк. Оп1у 1 оЕ йе 32 сойопк сп сЬе сгипса1ед соде Ь а сЬаш сегшспасог, апд йе псахппшп гасю Ьессчееп сос(оп-псЬ апй сойоп-роог апппо асЫк Ь гесЬлсед Егош ях со йгее. 'ТЬе с1азя6сапоп зузсегп ь Ьазед оп сЬас дезспЬей Ьу 5пий (1993). 1,«Ьгапез гпау Ье сопзписсед зисЬ йас сЬе шзепед зеаиепсе и есйег сагпед ш бепе П! апд сПзр1ауед оп р10 (Туре 3), ог сагпесс ш Оспе ЧС П ап«1 гПзр1ауесс оп рЧ!П (Туре 8); ш йезе сазез, йе шзеггесс зе9иепсе и сПзр1ауед оп аП сор(ее оу СЬе соаС ргогеш. А1Сегпадче1у, а зесопсс соаС ргоееш Вепе псау Ье !пегой осей гези1Сш8 ш сазр1ау оЕ йе Ее«осси ргосеш оп оп1у юпге оЕ йе сор«ез оЕ сЬе соас ргосеш. 1Е ЪосЬ ЕЬе пасйе соас ргосеш Вепе апд сЬе Вепе саггушх ап «пзегсей зе9иеггсе гезше ш йе рЬасе Вепоспе, сЬезе 1ЕЬгапез (ог че со«ь) аге аезскоасеа суре *'33" о~ "883 П с!ге «есогпЬ1пзпс созе ргосеш депе Ь саг«Сед оо з РЬзкепгра аод йе пзиче коле и озгпед оп з Ье1рег РЬзке, йезе зуксепы зге сеппед суре "3+3*' ог "8+85 (Моййесс, г«««Ь реппЬяоп, Сгогп 5соп апд ВагЬаз 200!.) Епуогтаг(оп Роше!к 18.119 ТАВЕЕ ! 8-14 ТЬе 1Чошйег оЕ О1!цопос1ео1Ыек Кеа)п!гед 1о Соде Еог А11 Рокк(Ые Рер1гдек оЕ Егаг)опв Еепцгйк ЕЕМСТН ОЕ РЕРТ1ОЕ (АМ1МО АОО КЕ51ОСЕ5) (ЧОМВЕК ОЕ ОПСО1ЧССЕЕОТ1ОЕ5 ЕМ ТНЕ ОЕСЕМЕКАТЕ РООЕ 20а 16х10 20' = 3 2 х 1Ок 20ь 6.4 х 10г 20г = 1.28 х 10в 20в = 2 56 х 10'о 20го 1.024 х 10гз 20гг 2028 х 10га 4 5 6 7 8 10 12 ТАВеЕ 18-15 А Век(г!сгед Сепейс Соде чч!ЕЬ Оп1у С ог С 1и Ейе ТЬггд Роед11оп оЕ Еасй Содоп Ао Ыеогка1 кеведо соде ы оЬгагоед К сог1оов аге гевгпсгег1 го ММгу(С,Т) 1окгеад о( ММ15(С,С1.
А1цопгЬшк апд сошрп1ег ргоцгашк Ьаче Ьееп дече1оред го Еогпш1аге пюге согпр1ех доршц ксЬегоек го купгйеяхе децепегасе роо15 о( о1(цоппс1еойдев 1Ьаг епсоде кресгйс впЬкея оЕ апппо асЫв апд ехс1пде огЬегв (АгЫп апг1 'гопчап 1992). 1п ТЬеогу, Ейе очега11 апппо асЫ согпроягюп оЕ 1Ье йкр1ауед рергЫек кЬопЫ гпагсЬ Ейе йгдпЬпйоп оЕ апппо асЫк гп 1Ье сог)е ргейсгег1 Ьу 1Ье г)оршц а1цопгЬпгк.
ТЫк сап (апд вйоп!й Ье сйес)сед Ьу вег)пепсшц а кгайкйса1!у яцшйсапг пшпЬег оЕ гапдогп1у сЬовеп ЬасгегюрЬацек (Счдг!а ег а!. 1990; 81опд-Е1цшпй ег а). 1993). 5(цп(Егсапг г1егдагюп Егогп 1Ье ргейсгед апппо асЫ сошроягюп ь а яцп е(ТЬег оЕ ппрегЕесггопв ш 1Ье доршц ксЬеше, оЕ ве1есйоп 1ог ог ацашвг сеггаш с!аыев оЕ рергЫев дпгшц ргораца1юп оЕ1Ье ЬасгепорЬацек, ог оЕ ЬогЬ. цо Еаг, Ьас1егюрЬаце йвр1ау 11Ьгапек Ьаче Ьееп ргодпсед пйпц оп1у Ейе яшр!екг доргпц ргогосо15. 13еч!ш ег а1. (1990) Ьаче девспЬед Ейе цепега1юп апд пве оЕ а 1гЬгагу оЕ 2 х 1Ог Ьас1егюрЬацев Ейа1 ехргеквек гапс1опг 13-гевЫпе рергЫев; цсосг апс! цппгй (1990) Ьаче цепегагег) а 1гЬгагу йкр!аушц арргохппа1е!у 4 х 10' д(ЕЕегепг ЬехарергЫе ерйорек; апг) Счдг!а ег а1.
(1990) Ьаче декспЬег1 а 11Ъгагу оЕ 3 х 10" гесошЬ(- папгк 1Ьаг а1ко ехргевкек Ьехарер1Ыек. ТЬе рергЫек йвр1ауед 1п 1Ьеке 1ая пчо йкр1ау 1гЬгапев ргоЬаЫу сочег пюк1 оЕ 1Ье Ьехарер1Ые кег(пепсе красе. С1опек ке!есгед Егогп 1Ьегп Ьу айгш1у раппшц Ьаче а1геаду Ьееп мед го дейпе апд ехр1оге вресгйс апйцепк ерйорев апд огЬег 1)цапдк. Новчечег, ЕЬе рогеп1га1 оЕ ЕЬе ЬасгепорЬаце йкр1ау кукгегп саппог Ье ЕН11у ехр1оггед ппй! 1агцег!гЬгапев Ьаче Ьееп сопвггпс1ед гЬас ехр1оге 1Ье вег)пепсе красе оЕ 1опцег рергЫек. Согпр1еге Ьергарер1Ые йкр!ау!гЬгапек сап Ье сопкггпсгед апд ксгеепед мой ргевепг-дау гесйпо1оцу.
рог ехагпр1е, Ыеъч Епц1апд Вю)аЬк оЕЕегк а 1гЬгагу рдг сопякйпц оЕ гапдош(гед Ьергарер1Ыев; ЕЬе 11Ьгапек сопга(п -3 х 10в (пдерепдепг с1опек, а вп(йсепг пшпЬег 1о епсоде гповг, 1Е пог а11, оЕ 1Ье 20' роягЫе 7-шег вег!пепсев (1.28 х 105). МегЬодк го сопкггпсг ЬасгегюрЬаце йкр!ау11Ьгапев апд го аыеы 1Ьегг сопгр!егепея аге йвспяед ш СЬпкйап ег а1.
(1992) апд геч(евчед Ьу цш)ТЬ апд Реггеп)го (1997) апг) Кой апг) Ма)совок)д (1999). 'т(ЕСТОВ)5Т5ТЕМ СОМРОХ ЕХТ5 РНАСЕ Р!5РЕАУ Пе5ОРасе!СОмРАху 5у5тем!К!т СОММЕ1ЧТ5 КесотпЬтпап! РЬаВе АпйЪот1у 5увтепт рСАХТАВ 5 рЬайешЫ. АтпегвЬатп-РЬагшас!а ВютесЬ тчтчтч.арЫотесЬ.сош Ргвр1ау 5увтепя ВютесЬ ипею.сйвр!аувувтешв.сош йвр1аурНАСЕ 5увтепт р5КАХ (р!П рЬаВе соа! Гыюп рготетпв). НтТгх Капйопт РертЫе Рьр!ау 1.тЬгагу ЬтЫтгоВеп тчтчвч.(пч!тго5еп.сош рРВр!ау Ехргевяоп Ъестог ТЬе честог В т)еяВпес( то тагВе! гесоптЬтпап! рготешв то тЬе яи(асе о( шатпша1тап сей!. ПесошЬ!пап! рготешв епсос(ей Ьу йе честог саггу ап атшпо-тегтпша! сей шг(асс тагВейпВ яапа! апй тЬе сагЬоху-теппша1 тгапяпепт- Ьгапе апсЬопп5 йоша(п оГ РРСЕ рУР1 уеав! Рйр!ау Ъестог Кт! Хе» Еп81апй Вю!аЪв иттчтч.пеЬ.сош РЬ.Р.
РЬайе Р(вр1ау РертЫе ЫЬгагу К(ь М13КЕ честог (р111 рЬаВе соа! Епяоп рготешв гйтЬ 6!у-61у-61у-5ег Пп1тег). Т7 5е!ес! РЬа5е Рйр!ау 5увтепт Т7 (ехргеяев рертЫев( рготешв ав Гпяопв то тЬе сагЬоху1 тегпипив оЕ тЬе 10В сарвЫ рготе)п). Н!атпептоив рЬа5е с!оп(пВ честог; ПЬгапев Вепегатет) ироп гейиев!. Хочайеп ииилоча5еп.сош РЬайе Рйр1ау 5увтеш! 5егчке Сопви!татюп вегчке; сияошегв ргочЫе тЬе Ьай (та!Ее! оЕ штегев!), 5упсопип ргочЫев ПЬгапев НГ пеев)ет(); сотпр1ете тЬгее гоипт)в оЕ рапп(пц апт) ашрПЕтсатюп, апй рояйче с1опе Ыепййсайоп Ьу ЕЕ!5А апс( РХА ветртепс(п8 5упсопип ВютесЬпо1ойу Рече!ортпеп! 1.аЬв тчтчтч.вупсопип(Ы).сош Соп51га)пег! Е!Гтгаг(еа Ешеаг рертЫев йвр!ауей оп йе вигГасе оГ ЬастегюрЬайев птау Ье Ыептка! то а "пашгаГ' рертЫе ш апипо асЫ вет)иепсе Ьи! шау ас1ор! а сошр!ете1у ййегеп! тЬгее-йтиепяопа1 соп68игайоп.
Опе ю!ийоп то тЬ(в ргоЫеш (в то сопвтгаш тЬе пюЬт1ау апс( соп68игайоп оНЬе йвр1ауей рертЫе Ьу )пс!исйп8 сувтеше гевЫиев Ы тЬе вес)иепсев йапЫпй тЬе гапйопихей рерййе вет)попсе. ТЬе Ыеа В тЬа! йе сувтетпе геяйиев тчй! Гопп а ОВЫ тйви)Етое всайоЫ йа! тчтП втаЬПгхе йе рертЫе тп а ГачогаЫе в!гостите (ре1к! е! а1. 1991; МсЕайегту е! а1. 1993). Рв!пй тЬВ ягатейу, вечега! Вгоирв Ьаче Ьееп аЫе то ве!ес! рертЫев йа! Ыпй то а ве1естог пю1еси1е Гготп спев!та)пей 1тЬгапев Ьи! по! (тоти ипсопвтга(пет( 1тЬгайев оГ ет)и(ча!еп! со!яр!ехпу (е.й., р1еаве вее Ео!Кой е! а).
1994; Ноея е! а1. 1994). Но!вече!, тЬВ арргоасЬ гпау по! Ье а ипгчегва! рапасеа Еог втгисшга! ййки16ев япсе тЬе тпс!ияоп оЕ сувтеше гевЫиев тп тЬе йвр1аует! рертЫев тпаг1сесйу гес1исев тЬе шЕесййту оГ 61атпептося рЬааев апй во Вгеат1у !отчета йе йтет оГ сопвтгашет( йвр1ау ПЬгайев. !8.120 СЬартег !8г Рготегп Гптегасбоп Тес)тпо(ойтев ТАВЕЕ 18-16 Сопипегс)а! РЬайе РНР1ау 5уйешв рНтТгх честог (йаВейа (ЕП)- тЬюгес1оып (Ттх! Гияоп рготетпв аге ехрогтес( апс1 аввешЫет) ш рагйайу Гипсттопа1 йаВейа), РРяр1ау (тпапииа1тап ехргевяоп честог) сои!авив тЬе 51740 ог(8(п оЕ гер!капоп, Т7 ргопютег(рг(ш(п5 ятев, апй тЬе пеошусш геявтапсе гпаг)тег Гог втаЫе ве!есйоп тп тпапипайап сей!. рУР1 (уеав! ехргеяюп честог) сагпев тЬе САЕ! ргошотег, Т7 ргопютег! рг(ш!п5 ятев. ТЬе вуяеш тпс1ийев а вепев оГ тпойп!ев рго- чЫет) Гог с!опш8, всгееп(п5, апт( ехргеяюп оГ яп81е-сЬа(п Ггайшеп! чапаЫе (5срч) апй- Ъойев.
Рыр!ау 5увтешв ргочЫев тЬгее Е. сей ПЬгаг! ев (Ьп 7-, 8-птегв), тЬгее то Еоиг гоипт(в оГ Ьто- рапп)пц, апй роятгче с1опе Ыепййсатюп Ьу ЕЕ15А апй РХА вециепс(пц. ТЬе Ьат! ог рготе(п о( 1птегея В всгеепет) тп шссевяче гоипт(в аВашв! рертЫе с1опев; ров- гйче с!опев аге гевсгеепес( апт) вециепсей ТЬе честог ь т(еяВпет) то та!Ее! гесотпЬтпап! рготе!пв то йе вигГасе оГ 5. сегеляае ла тЬе и-а55(ийп)п уеав! айЬеяоп гесертог. КесошЬ(пап! рготешв епсос(ет) Ьу тЬе честог саггу тЬе Аца2 шЬишт, тчЫсЬ аяостатев ит)тЬ Аца1 ехргеяет1 Ьу йе Ьов! сей. ТЬгее гапт1ош рертЫе ПЬгапев аге ачайаЫя 2 оГ 7 апт) 1 оЕ 12 гевЫиев. Опе оЕ тЬе 7-тпег ПЬгапев (С7С) ехргеяев тЬе гапс(ош(аес( швег! вет(иепсе ийЬ йапЫп5 сувте)пе гевЫиев.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
