Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 102
Текст из файла (страница 102)
1п асЫ(гюп, гЬе яге сап Ъе ивег1 го 1еагп пюге аЬоиг йе сесЬ- по!о8у ап6 арр!кабопв о15РК апй В1Асоге швсгшпепгавюп. ТЬе сотрапу о((егв швсгис6оп гп гЬе иве оу В1Асоге апс1 гЬе В1Аеча1иа6оп войгчаге, аист В1Асоге арр1ка6оп всгеп6вгв аге ачаг1- аЫе го Ье1р млгЬ г!иевгюпв ог ргоЫетв гЬаг тау апве. ТНЕ ЬЕ)вЬОК СН!Р воаасе Фю! вд мгп ~ аяеауде агпяв с — инн =он — п с — нн — п с — ин — вв — в с — нн — вв — и !! о !! с еоча)епг бепчагаапоп г!СОКГ 18-23 Ь!8апд!ттоЬ!!!гав!оп ч!а На!!че -НН -5Н -СНО апг( СООН (Кедгаччп, гч!гЬ рептпвв!оп, ггот В!Асоге, !пс.) ТЬе сЬ(р сесЬпо1оВу (псгос1исе6 Ьу В1Асоге сопявгв о1 а !-стг савв в1Ые соаге6 чч(гЬ Во!6 ап6 егпЬегЫе6 ш а р1ав6с виррогг 1ог еаве о(Ьапд1шц.
ТЬе вгапс1агс1 гв йе СМ-5 вепвог сЫР, Ьиг вечега1 чапе6ев о1 сЬВрв аге ачаг1аЫе !ог врес(а!(хе6 ригровев (илччч36асоге.сот). ТЬе СМ-5 вепвог сЫР Ьав йе ес)и!ча(епг оу 2% сагЪохугпей1уасед бехггап соча1епг!у аиасЬед со йе ВоЫ вигГасе. А пшпЪег оу ргогосо1в Ьаче Ъееп дече1оред (ог ассасЬВп8!18ап6 пю1еси1ев со гЬе бехсгап вигуасе (О'5Ьаппевву ег а1. !992); гЬеве сгеасе ас6че Вгоирв оп гЬе сагЬохутегЬу1 6ехсгап гЬаг аге сараце оГ геасг(п8 соча!епг1у вч(гЬ гЬе ВВап6 пю1еси1е.
ТЬе сЬоке о(соир1(п8 сЬепивггу го Ъе ивед дерепбв оп йе сЬагасгег(в6св о( гЬе 1!Вапй то!еси!е (Р!Киге !8-23). ЕасЬ сЬВР Ьав уоиг 61ггегепг !)очч се11в во йас 118апд лепя!у гпау Ье чапес1 оп гЬгее о1 йе виг(асев ап6 гЬе уоиггЬ гпау Ъе ивес1 !ог а сопсго1 ог Ыап1с вигуасе. 1с (в ппроггапс со 8(че саге6л! сопвЫегагюп го гЬе тегЬо6 ивег1 го (ттоЬВ(хе гЬе 118апс1 го гЬе СМ-5 вепвог сЫР. ЪЪепечег ровяЫе, гЬе тейод о1 сЬоке вЬои16 пипипгхе йе Ьегего- Ртотосо1 6: Апа!ууд о7!птетасдп8 Ртоге(пу пай Би ~асе Р1аутоп йеуопапсе Бресгтоьсору Югп8 В!Асоте 18.99 А у и ° ' ° ° 4)6 ' ° е1гер1ачаап-соегеб еепеог еог1есе Ыпб!пд о1 Ьюапу)е1еб !)депо Ыпб)пд о1 апа!у1е рге!ПКПЬЫтеб ПТА п)схе1 СПе)е1юп сара ге о) Пвоеапе-1еддеб Гдепб апе)уяе о1 Ыпб)пд Е!С()КЕ 18-24 Са 1ите о( Тат е1 Мо!еси!ее (А) Саргите о( Ью(!пу(а(ед гпастотпо(еси(еь.
(В) Сар(иге о( Ь(а((д(пе-1а88ед рто1е(п. (Ведтаъчп, юлгЬ реттп)аа)оп, (топу В)Асоте, (пс.) Вепеду о( ВЬе Ъоипд 118апд. ТесЬп(с)иеа (Ьаг аПоъч саргиге ог" (Ье 118апд Ьу апогЬег пю1еси1е соча!еп(1у Ьоипд (о (Ье сагЪохугпе1Ьу1 11ехггап аге иье(и! Ьесаиье ТЬеу геаи)г ш ип!(огш опепсагюп оу ТЬе 1!Вапд апс1 аге ргегеггед очег йгес( соир1ш8 о( (Ье 118апд со (Ье сЬ!р аиг(асе. Ехашр1еь о(' аисЬ саргиге яиггасея аге яггергагдйп (Мог8ап апд Тау1ог 1992; О'8Ьаппеаау е( а1. 1992), п(с)се1-сЬе1а!е (ХТА) ()ъ)(еЪа ег а1. 1997), гаЬЬЬ апг(-шоиае С допъаш (КАМс), апд апг(- СВТ. СЬ!Ра сап Ъе ригсЬаьед ъч(ТЬ ГЬе а(сер(ач)д!и (Р18иге 18-24А) ог ХТА (Р18иге 18-24В) а1геас1у соир!ес1 го (Ье сагЪохугпеьЬу! 11ехггап.
Саргиге шо1еси1еа яисЬ ая апдЪойеь апд аггергагдйп сап Ье соир1ед го (Ье яиг(асе ТЬгои8Ь рпгпагу апипе 8гоира (аа деясПЪед гп (Ье ргососо1 Ье1оъч). ъ'ътЬеп а саргиге шо1еси1е )а иаед, аигУасе Ьесего8епеЬу )а пот ап ьяие, аа 11 ъчои1д Ье 11 а Ьесего8епеоиа 118апс1 ъчеге йгес!1у соир1ес1 го ТЬе сагЪохуше(Ьу1 дехггап. СЬ!Ра аге ача!1аЫе ВЬа( оггег адй(юпа1 (еа(игеа. Рог ехагпр!е, сег(аиъ сЬ(ра ргопюге (Ье (отша((оп ог'а 1!Р(д Ь11ауег (НРА) (Р18иге ! 8-25) ! огЬегз Ьаче аЬоггег дех(гап пю1еси1еа (Рюпеег 18.100 СЬаргег 18: Рго|ерч 1пгетасдоп ТесЬпо!оегек Зе| ПубгсрпсЬЬ собесе ссе|еб чз|Ь иееебеапеб Зрсесп|ее Ьуб|српьс ыг|есе-сгее|еб епе|у|е Ысб|со Е!СЕ1КЕ 18-25 МетЬгапе ВюсЬепикгг апд Ме|пЬгапе-Ьоппд Весе 1ог 51ид1ек |Кедгаъчп, ъч||Ь рег|п1кк!оп, 1го|п В|Асоге, |пс.) СЫР Р1), |1ех|гап то!есп1ек ъчПЬ а 1оъчег сЬагце (Р!опеег СЫР В1), а сагЪохуте|Ьу!а|е|1 кпгуасе ъч1|Ь по дех|гап гпагпх (Р!опеег СЫР С1), ог а Пас Во1д я|гуасе ич|Ьош апу ассасЬед гпо1есп!ек 1рюпеег СЬгр 11).
КЕСЕ!ъ)ЕКАТ1ОЗЧ ОГ ТНЕ СН1Р ЯЗКГАСЕ То га1|е 6|П адчапсаце о1 |Ье СМ-5 кепюг сЫР, 6 ь ппрогсапг |о с1ече1ор а гоЬпя геВепегадоп кук|е|п ко |Па| |Ье сЫР кпгуасек тау Ъе гепкед. А ъчЫе чапе|у о1 гпа|епа1к (асЫ, Ьаке, ко1чеп|к, за!|, дегегВепгк, ог соп|Ъ|падопк о1|Ьеке геа8епгк) тау Ье пкед 1ог гецепегаг!оп. То дегегпппе |1 |Ье 68апд геташк Ьоип|1 со |Ье кпгуасе, ап ехрептепг кЬоп1д Ъе дея8пед со |екг гЬе гоЬпкгпея о11Ье геВепегадоп Ьу гереа|ед ш)есгюпк о1 апа1у|е апд ге8епегадоп ко1п|юп ш огдег. 1| кЬоп1|1 Ье рокяЫе |о ге|ье а кпгуасе 1ог пр Со 100 ге8епегаГ!оп сус1ек.
СОЕЕЕСТ1ОЬ) ОГ 0АТА ТЬе шк|пппеп|адоп |ьек а Поъч кук|егп апд а кепюг сЫР со ъчЬ|сЬ а ПВапд Ьак Ъееп аггасЬед (ппгпоЪ|1ые|1). ТЬе апа1у|е ко1пгюп !к 1п)ес|ед гЬгопВЬ |Ье кук|егп ап|1 о|очек Ъу ййпяоп Тгот |Ье ЪпКег Поъч со |Ье сЫР кигуасе, ъчЬеге 6 шсегась ъч!|Ь |Ье ПВап|1. Р!Впге 18-26 61пкггасек |Ье ргоцгекк о1 ап шсегасдоп ак пюпПоге|1 Ъу а В1Асоге кепкогВгат. ТЬе шсегасдоп Ье|ъчееп |Ье ПВап|1 апд апа1у|е пю1есп1ек !к 1оПоъчед !п геа1 6|пе ак а сЬапВе о1 |Ье 8РК апре.
КеВепегаг!оп !к ассотр1ВЬе|1 Ьу геточа1 о1попсоча1еп|1у Ьопп|1 тасепа1 1гогп |Ье кпг1асе ш ак Вепс1е а гпаппег ак рокяЫе, аПоъч!п8 гепке о1|Ье ПВапд |и кпЬкес)пеп| Ь|пйп8/геПепегадоп сус!ек. ТЬе ргосекк о1 й16|к!оп о1 |Ье апа!уге ь саПе|1 п|а|епа1 |гапзрогг, апс1 аП Ь!пйп8 куяепь аге абессед со коте децгее Ьу |Ьь РЬепотепоп.
Раг| о1 |Ье ехрегппеп|а1 деяВп 1ог В1Асоге кгпйек |пчо1чек 6пд!п8 а 1оъч епопВЬ кпгуасе депягу о1 68апд апд а Ь!ВЬ епопВЬ Поъч гаге го пптппхе |гапкрог| е1Тесгя Айег кадк1уш8 |Ье тшппа1 сп|епа 1ог ап ехрепп|епс, |1аса аге со1- 1ес|ед 1ог кпЬкеь!пепг 6гг!пВ со ап арргорпаге Ь!пд!пВ тоде!. ъъге кггоп81у гесопппепд |Ьаг |Ьгее сЬаппе!к (а!ко геуеггед со ак Поъч сеПк) о1 |Ье кепког сЫР Ье п|ой6ед |о соп|аш ййегеп| 1ече!к о1 Пцапд апд |Ьаг |Ье 1опг|Ь сЬаппе1 Ъе пкед ак ап арргорпа|е!у пюйбед сопгго1 кпгуасе. Ргогосо! б: Апа(угй о) Гпгегасгтц РшгеГиз пай ЯигЕасе Р!аяпоп йезопапсе Бресггозсору (Гх(пе ВГАсоге 18.101 я ~с .е Ю с СЛ а е е е с о О Ф $00 200 300 400 500 600 $епе(е( Р!С1$РЕ 18-26 Рго геее оЕ ап $пгегасйоп (чгоп(гогед ае а Бепеог гага Апа(уге Ь(пде го йе $юг(асе-ассасЬед $(Вапд диг(пе еагпр(е (п)ес((оп, гехи(г(пе (п ап (псгеаее (п яапа!.
А( (Ье епс! о( йе (п(есгюп, йе еагпр(е (е гер!асес! Ьу а сопйпиоие Е(оъч о( Ьи((ег апд (Ье десгеаее (п е(епа( поъч гейесге д($ьос(аг(оп о( оиегасгапг Ггогп йе $юг(асе-Ьоипд сошр(ех. А гееропее о( $000 Р($ соггееропде (о а сЬапае (п еиг(асе сопсепггайоп о( 1 пфгпгпе. (йедгаъчп, ън((Ь регш(ае(оп, (гога В(Асоге, $пс.) Муех)са (1999) Ьае еицйехгед йаг гееи1(е оЪ(агпес1 Егош а 1огн-депягу 1!Вапд хигЕасе еЬои1д Ье соггесгед Ъу доиЫе геЕегепс!па. ТЬе яйпа! Ггош йе апа1уге ш)есгюп очег а геуегепсе сЬаппе! !е еиЪ(гассед Егош (Ье ерес(йс Ъгпйпй е!епа! оЕ (Ье апа1уге $п)есгюп очег (Ье асггче еигЕасе.
А Еигйег $шЬ(гасгюп оГ а Ьийег )п)есг!оп Егогп еасЬ оЕ (Ье гп)есйопе оГ апа1у(е !е иеед го гедисе шасЬ$пе ейесге ш (Ье дага. Саге зпгь( Ье га)сеп 4чЬеп арр!у!пВ апу оЕ (Ьеее гесЬп!с)иея еерес!а1- 1у 4чЬеп (Ье е!апа! по!ее ь дгеагег (Ьап (Ье Ьгпсйпй яапа! $ье1Е. 1Е (Ьеге ь попхрес)Егс Ь$псйпй (о йе геуегепсе сЬаппе1 ((Ье сопгго1 еигЕасе), (ЬЬ гесЬпк)ие оГ еиЬ(гас((пВ (Ье геЕегепсе сЬаппеГх е!Впа1 йозп (Ьаг оЕ (Ье ас(гче $шгЕасе ппь( Ье гьес1 сап(!оих!у. ТЬе гехи!(!пВ хеп$югйгаш ог хепее оЕ еепаогйгашыпау Ье шоде1ед ияпц опе оЕ еечега! Ь!псйпВ п1оде1е ргонЫед $ч!(Ь (Ье В!Аеча1иагюп еой$чаге ог Ьу иаег-дейпед пюде1я 'ггЬеп апа- 1уйпВ дага Ггош (Ье В1Асоге, и шиег Ъе гегпегпЪегед (Ьаг (Ье еепяйниу оГ (Ье !пе(гишепг ге(пепе а чегу 1отч поье е!В$1а) йаг )х ргоГоипд1у еепяггче го шасЬгпе еГГесгя якЬ ае йе преп!пй апд с1ое)па оГ ча!нея !п)есгюп поье, сешрегагиге, апд рге$ьиге, ах $не1! ае гейасйче гпдех шыпассЬ Ье($чееп йе гипп!пй Ьийег апд йе аашр1е $Ье! Е.
ТЬе гп(егрге(акоп оЕ йе Ь!псйпй яапа! сап Ье сошрйсасес1 Ъу йе ргееепсе оЕ йехе Егес)иепг!у ипачоЫаЫе йвгигЪапсея Ваяс гга!и!пц гп (Ье $ье оГ йе В1Асоге апс1 хресга!гхед сга!п(пй ш йе В1Аеча1иайоп еой4чаге аге ехсе11епг гееоигсее Еог 1еагп!па )пеггишепг орегагюп, ехрепшепга1 дее!ап, апд дага еча!иагюп. К!НЕТ!С МЕАЯ/гхЕМЕМТй Ъйьеп В1Асоге )пеггишеп(е 4неге Еггег !пггодисед, (Ьеу Ьад Ееъч арр1!са(!опе апс1 оп1у а гид!шепгагу гпе(Ьод Еог апа1уе!х оЕ (Ье дага. ТЬ!е яшайоп еепегагед д!хсыяопх ах со $чЬе(Ьег с1ага йоиЫ Ъе апа!ухес1 ияпВ поп1$пеаг ше(Ьодх (О'0Ьаппе$ьу ег а!. 1993) ог 1$пеаг гпе(ЬогЬ Ргогосо! 6: Апа!узи оЕ1пгегасВпе Ргогеспс ьч!г)с $игуасе Р!аяпоп Кегоиапсе Вресггозсору Их!по В1Асоге 18.103 0ЕЯС!х!1!ЧС А РКОТОСОЕ Г)ече1ор)пд а чгеП-ЪеЬачесс ехрептепса1 ргососо1 сап гес)шге аоте саге апсс 1пс1пссе ьечега! ргеПпппагу ехрепгпепга Со сЬагасСепге СЬе геааепгя 'чСге ргехепг Ьеге йе вес!пепсе оГ агера Сог апа- 1угспВ а сургса! апс)Ъог)у-апс)аеп ауасегп апс1 П1цасгасе хечега! ссесаПа !пчо1чес1 пс сЬе с1ече!оргпепс оГ а В1Асоге ехрепшепс.
ТЬе апПЬос1у апс) апс)аеп аге ачаПаЫе сопппегссаПу апс1 сои!а Ье икес) Со гергос1исе йе геял1га ьЬосчп Ье1осч Сог орг!ппгспВ СЬе рагатегега оГ йе ауагеш ппссег агпс)у. Т1се ргоСосо! 1а г!1ч)с)ес! 1пСо Ссчо агаВея Вгаае 1 деаспЬеа йе ргерагаПоп оГ а КАМс саршге апгЕасе, ЕоПосчег) Ъу сея!а Еог йе ЬспсПпц оЕ а арес)Есс апс)Ъог)у (апсс-ТЯН) со йе КМАс апгГасе, апг) ЬспеПпц оЕ сЬе апссаеп !Т5Н) со сЬе апПЬос1у Еап6-ТЯН).
Ясаае 2 ргеаепса а аепеа оЕ шесЬод Ыос1са ог апа1уа)а ргоагаша йас аПосч сЬе с)есеппшаПоп оГ сЬе ес!ш11Ъпшп сопасапса Еог йе 1псегасПоп. 1п хцпппагу, Яаее 1: 1. Ргераге КАМс саршге сшгГасе оп СМ5 сЬср. 2. Теьс ЬспЕПпд оГ сЬе апс1-ТЯН со сЬе КАМс аигЕасе. 3. Теьс ЬспгПпд оГ ТЯН со сЬе апсс-ТЯН япЕасе; геВепегасе апс1 гереас. Яаее 2: 1.
Кпп апа1уяа ргоагашх Еог ргераппВ сЬгее 1ече!а оЕ ап6-ТЯН апд Ь)псс)па сопсепсгассоп аепех оЕ ТЯН. 2. ГСегегпппе ес!ш!сЬпшп сопагапга оЕ йе шСегасПоп. 18 104 Сйаргег 18: Рюгет 1пгегасдои Тесйио1ой|еь СТАСЕ 1: Ргерага6оп от Йе СарШге $ог1асе апд ТеМ В1пйщ ТЬе Ео!!очч)па ргогосо| с1ехсг!Ъеь а те)Ьод со саргиге ап6(Ьуго!д-збти!аппц Ьоппопе Гап6- Т5Н) оп а гаЬЬ|г ап6-тоихе С г)ота)п ГПАМс) аиг(асе, |о ргераге йе аппчТ5Н югЕасе Еог 1а1ег ихе гп )Ье )с)пепе апа!уяа оЕ )Ье !606108 оЕ 1Ьуго|йксппи1аг|пд Ьоппопе ГТ5Н) чч|й ап6-Т5Н.
ТЬе ПАМс 15 ишпо!61|хед го йе сагЪохупге|Ьу1 дехггап оЕ )Ье ьепюг сЫр Ьу ргипагу апипе соир1!пй, апй ъчЬеп ихес1 аа йе сар|иге пю1еси1е Еог )Ье агг6Ъог)у, геаи1ь |п )Ье д|ча!епг ап6- Ъоду то1еси1ех Ье|пи опепгед |п а таппег йа| аПоччх Ь|пд|пц оЕ гччо аппйеп гпо1еси1ех |о еасЬ апг!Ъос)у гпо!еси|е. Ап а|гегпабче те)Ьод оЕ ргераппд а яи.Еасе Еог )с|пепе апа1уяа ччои16 Ье со соир1е опе оЕ йе геасгапга спгесбу го 1Ье хепюг сЬгр ичй (Ье ргипагу апипе. 11 1Ь|х гпейос1 гчеге Го Ъе иаед гч|)Ь ап аппЪоду, йе Ьегегойепепу оЕ йе гехи)6пй юг(асе гчои1г) гехи|с гп !еах )Ьап гччо апг|йеп пю!еси)еь Ьгпйпй 1о еасЬ оЕ )Ье ап6Ьоду гпо1еси|ея МАТЕИАЕБ СА))Т!Ойг Р1еаье аее Арреиопх 12 1ог арргорг!аге Ьаид1!ии о( гпагег!а1х таг)год гчПЬ <! >.
ВоЕЕегй ап41 Бо!66опв Р!еаье атее Аррепд!х 1 Еог сотропепП оЕ хгос)г хо|и6опя Ьи((его, апд геадеп)я О!101е 51осй ао1ипопа 1о йе арргорпа)е сопсеп|га6опя ЕОС (0.2 м Ы-ейу)-Ы '-Гсйтегйу)атторгоруИ-сагЬодйт)де (и Н О) <|> Ейаиоlатте Л м ейаиоlатте ЬудгосЫоиде, ад)иьгед Го рН 8,5 чч|(Ь НаОН) <! > Ехггас)еаи Ехггас!сап ь а зо1иг|ои Еог гиг(асе гейепегагюп апг) ь сопипегсгайу ачайаЫе Ьоиг В!Асоге. НЕРЕ5-Ьи(Еегед за)те Ьи((ег |0 гпм НЕРЕ5 РН (74) |50 тм ЫаС! 3 игм ЕРТА 0.005О)о |ч)ч) Треп-20 ТЬЬ Ьи((ег Ь согпгпегсгайу ачаг1аЫе Егот В|Асоге. НСl (20 тм) <! > НН5 (0.05 м Ы-Ьудгоху5исс(и(т1де т Н О) ЕОС, Егйаио|атте, аис) НН5 аге соттегсгаПу ача()аЫе ав раг| о( йе Атгие-Соир1ги8 )((1 (гоги В)Асоге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
