Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 98
Текст из файла (страница 98)
ас 1МРОКТАЪ)Т Ехсеха)ие ЙВеяпоп В.е., |и ехсеах оЕ 76 Ьоигх) сМ!! гееи!| |и |Ье с!еача8е оЕЕЬе ГаЬ ЕгаВтепь !пго ста!!ег ро!урерс!дех. 1| ыЬегеЕоге ади!хаЫе со регЕолп а р!!о| ехрепп|еп| иЬеге хтаН а!н)иоЬ оЕ |Ье й8егйоп ! — 5 и!) аге гМ|Ьс!гаип ас 7-Ьоиг !осего!х Еог апа!уа!х Ьу гес$ис!п8 505-ро)уасгу!ат!де Ве! е!ессгорЬогеа!ш С)пдег гедис!п8 сопд!С!опа, СЬе Ьеаъу апд 1!ВЬС сЬа)пв оЕ 18С т!Вгасе ах 50-Ю апд 25-)сО ро!Урерпдеш ТЬе рара!п-сЪВепес! ап1!Ьоду пи8га|еа ас -25 1|О. 3. РцпЕу ЕЬе раЬ Ега8шепса Егош ЕЬе Рс рогсюп апс! попйВепед апс!Ьойеа Ьу раяаа8е ЕЬгоцВЬ а ргосе|п А-ВерЬагоае со1шпп.
Арр1у ЕЬе д!Веясюп пцхсше со ЕЬе ес!ш1|Ьгасе|1 со1шпп апс) ипшейасе1у Ье8!и со11есс)п8 1-ш! Егасс!опх оЕ ЕЬе Е)осссЬгоцВЬ. Ргосеш А е811 Ъ)пг) |Ье Рс ропюп оЕ |Ье апс!Ъог)у, |ЬегеЬу гепюеАпс Ьо|Ь |Ье |сЬо!е апг!Ъог)у апг) |Ье Рс Егаешепь Егош |Ье йееягюп шоаиге. ТЬе ге|ш1|ап| Во|г|Ь|опаЬ хЬои16 солса|п РаЪ Егаеп|епь а!опе. Ве|таге! А пшпЪег оЕ апЬс1аяея оЕ 1еС гпо!еси1ея г)о по| Ъ|пг) |о рго|еш А (р!гасе атее Аррепйх 9). 77|е рго|е|п С |||Ьеп еепегаг!пе РаЬ Егаешепгя оЕ гпогье шппос!опа) апВЬойес 18.82 СЬаргег 18: Ргогет Гпгегаспоп ТесБпо!о81ея 4. То Ыепсгуу ччЬ|сЬ Ггас6оп сопса|ия сЬе рипйе6 ЕаЬ ГгаВтепся, теаяиге сЬе ОР оГ еасЬ Ггас6оп.
Со11есс апд роо! сЬгее ог Гонг Ггас6опя сои!а(п(пВ сЬе Ь(аЬеяс сопсепсга6оп оГ раЪ. ТуркаПу, сЬе РаЬ Ггасшепся аге Гони|) ш арргохн~асе)у |Ь|ее со Гоы йасИопя, 5. Сопсепсгасе сЬе роо1ес1 Ггассюия Ъу сепсп|иВасюп сЬгоиВЬ а Сепспсоп с'М10 (1О-)сР сисоГГ1 Ат(соп) со а чо1шие оГ (0.5 гп1. Арр!у сЬе яагпр!е со а 1ояч-гпо1еси!аг-таях (6-1сР ехс)ия(оп) Ве1 В!сгасюп сЬготасоВгарЬу со!игпи ес)ш11Ьгасес1 ш РВ5. Е1исе сЬе ЕаЬ Ггаатепся |чЬЬ РВ5 (асеоггВп8 со гпапиуассигегя |пясгис6опя). То 1аЬе! |Ье РаЬ Ггасшепся, сЬеу шняс Ье ехсЬапсес( Гпсо а Ьнпег йас с(оея пос сон|а|и Ггее апнпо Вгонря (|.е., сЬе Ггее ну|се(пе пшяс Ье гешочес( (гоги сЬе йсеясюп Ьнссег).
Е011осч(и8 е1шюп, сопсепсгасе сЬе ЕаЪ ГгаВтепся сЬгоиаЬ а Сепспсои сопсепсгасог аид Йегегт(пе йе ргоге|п соисеигга6оп. АсЫ 1ЛО чо!ите оГ 1 М Ъ(с!пе (рН 9.0). ТЬе !Вб сопсепсгасюп с)есегпгспес( Ьу Вгас(Гочс) аыау, няпВ Ьочше яегшп а!Ьнпнп ая а ясапс(агс), пша Ъе нш16рПеа Ьу а Гассог оГ 2. ТЬе сопсепсгасес( ргерага6оп оГ раЬя Ь по|я геас)у со Ье 1аЬе!ес) яч!ГЬ Пногеясепс ян! Го|паосуапспе (Су) Пу .
0уе Ргерага6оп Кеясьрепс1 сЬе сопсепь оГ а я(пц1е чба! оГ 1уорЬ(1(ген ануе 10 20 )с! оГ с1гу М,)ху-с1ппесЬу(Гогп|ап|Ые, Со 81че а Су 501исюп чч)сЬ а сопсепсга6оп оГ -10 тМ. Р(!исе 1 р! оГ |Ье буе гтхсиге 1:10,000 |п РВЕ аис1 са!си1асе сЬе с)уе сопсеисгасюп Ггоп| сЬе ч(я)Ые реа)с аЬяогрбоп. ТЬе ехсшс6оп соеГГ|ссепся Гог СуЗ апс) Су5 аге 150,000 гпм ' апс( 250,000 гпм ' ас 554 п|п апс) 650 пш, геяресПче1у. Оуе Сопсща6оп 10. То 1аЬе1 йе ргосешя, яиярепс1 сЬеги |п а ЬиГГег |Ьас с1оея пос сои!а|и Вее апипо Вгоиря.
1Г йе ргосеш яю!ибои ь пос |и ап арргорпасе ЪиГГег, регуоггп 5серя 6-7. 1Г сЬе ргосе|п Ьая а ярес|а1 ЬнГГег гес!шгеп|епс Гог ясаЬП)су, йе Ве1 61сгасюп со!нгпп сап Ье е9нПЬ Ъ| асс|1 сч(сЬ йас рагПсн1аг Ьнй.ег. Та!се саге йас по Ьнссег согпропепс Ьая Сгее апнпо Вгонря ог Гассогя йас аге шсПЬ|согу со сЬе!аЬеПпц геас6оп. 1с Ь счоссЬ по6пц сЬас гес)нс(пс асепся янсЬ ая с(пЬюсЬге|со! ог 13-и|егсарсоесЬапо! 1псегуеге ъч|сЬ сЬе 1аЬеПпс геассюп. Носчечег, |Г а гес(нсспс асепс н||ьс Ье 1пс1нс)ес) со шаспса|п Ью1оссса1/ргосесп Гнпс|ю, В-шегсарсоейапо! Ьая |Ье 1о|чег шсегсегепсе ап|1 и сЬе гес(нсшц асепс оГ сЬо|се. Вой Т(р) 250 ап|1 МС5 аге ехсЬапсес( шсо РВ5 Ьесоге 1аЬеПпс ш 0.1 м Ь~сспе (рН 9.0).
1с и ас)чсяаЫе со спашса|п ап аП|аПпе рН (|чЬ|1е шашсаш)пс ргосеш 1псесгссу) ш йе 1аЬеПпс геассюп со ргопюсе с)ергосопа6оп осе-апнпо Вгонря оГ 1уяпея апс( сЬегеЬу ейксепс сонр!шс. аеас! йе ргоге|п яагпр!е (ап6Ьос1у, РаЪ ГгаВтепС, ог ргогеш) яч(СЬ а 10 — 40-ГоЫ пю)аг ехсеяя оГ СуЗ Гог 30 т(писея ас гоогп сеп|регашге (ргерагед ая деяепЪе6 10 5серя 8 — 9). АсЫ сЬе ануе чегу я!о|ч1у |чЬ|1е ябгппВ 1Ье яо1исюп |чиЬ а р|репе бр (сагеЬлВу ачоЫ(п8 гВгесс с1уе сои|асс сч)сЬ сЬе т(сгоуице сиЬе).
То ачоЫ ргосеш с)епашга6оп Ьу РМР, сЬе чо1нше ос СуЗЛУМР а|Ые|1 гине пос ехсеес( 10% оГ |Ье соса! чо1шпе. ТЬе с(есеппшасюп ос сЬе ор6гпа! пю)аг ехсегь апс( геассюп сане |я еп|р|пса1. ТЬе Воа( ь со 1аЬе! еасЬ ргосеш чай 1 — 3 с)уе |по!есн1ея (Гог а йясняяоп оГ 1аЬеПпс га6о спсепа, р1еаяе яее сЬе шсго|1нссюп со сЬ~я ргососо1). ТЬе 1ече) оГ!аЬеПпд М11 часу агеас)у |ч|й шйис(на! ргосе|пя ог апВЬогпея. 1Г сЬе Впа! 1аЬеПпц гасю ь соо 1ояч, и ь рояя)Ые со ге-!аЬе! сЬе апс(Ьоду. Мопос!опа! апПЬосаея янсЬ ая Т(р)250 ап|1 МС5 Ьаче Ьееп 1а!ге1ес( янссеяяснПу |чПЬ а 40-ГоЫ спо1аг ехсеь оГ с(уе. Ргососо! 5: 5саче 1с ЕаЬе!сир Ргосетв счссЬ Ниогевсеис Руев 18.83 12. Тегпипасе сЬе 1аЬе1)п8 геасбоп Ьу йе асЫЬюп оу а Егее-атспе-сои!а)п!и8 Ьи!Тег висЬ ав Тгки Со а Йпа! сопсепгга6оп оу 10 псЬЬ 13. ретине сЬе ехсевв ипгеассед Вуе Ъу ехсЬап81п8 йе Ьийег ияп8 Ве1 61сга6оп со1шип сЬгогпаго8гарЬу (1ОРС, В!о-Вас)), апс1 е1ибп8 СЬе ргоСе!п спео РВ5.
а. Вс)ш!!Ьгасе сЬе со1итп ъч!сЬ сЬгее Ъе6 чо1шиев оу РВ5 ог сЬе Ъийег оу сЬоке (-30 т1). Ь. То гпахиисхе верага6оп, 1оас) сЬе 1аЬеВп8 геас6оп иихсиге 6!гесс!у оп!о сЬе геяп, саЫп8 саге со арр1у Ь )и ав япа!1 а чо1шие ав ровыЫе. с. согавЬ йе со1шпп сч)СЬ 2.5 гп! оу Ъиууег (-3.3 гп) )в чоЫ) апс) 6!всагс1. й АсЫ а ЕигСЬег 2 сп1 оГ Ъийег апс1 со11есг йе сбяЫе ргогесп Ггасгюп, 6!всаг6!и8 йе гета!пс1ег. ТЬе 1аЬе!ес) ргодисс ии11 гип ас йе !еасВп8 Ггопс апс1 вЬои16 Ье ч!всЫе. Ргее с)уе ии8гасев споге в1осч1у йюиВЬ йе со1шпп. 14.
СопсепСгаСе йе 1аЬе!ес) ргоСеш опсе а8аш ияп8 а Сепггкоп сопсепСгагог (оу йе арргорп'- асе ию!еси)аг-исая сис-ос!). ! 5. Апа1ухе йе 1аЬе1е6 ргос)исс Ъу е1ессгорЬогеяв сЬгоиВЬ ап 5Р5-асгу1ат!Ве Ве1 со чепуу ясс- сева!и! соча1епс 1аЬе!!и8 ос сЬе ргше)п. РоПоиип8 е!ессгорЬогевки ехаиипе сЬе Ве) сВгесс!у оп а Е)Тг Сгапя!1ииипагог (302 пт) Со и!виаВхе СЬе 1аЬе!ед ргойкС. А 6иогевсеис Ьаи8 вЬои!гс ии8гасе ас сЬе ехрессег1 ию1еси!аг сче!8Ьс ог сЬе ргосеш.
ТЬеге вЬои1гс Ье ио йиогевсеисе 6оги Сгее ссуе ас сЬе ш18гасюи !гоис. ССН ехсгсапои ас 302 иги св виЪор6ша! !ог псов! с!уев. Соив!гСег ивси8 вЬогсег-гчане1еи8сЬ ехсиасюи 1! ио ЬаигСв аге чспЫе ирои 8е! 111шисиасюи. 16. ро11осч!п8 сЬе 1аЪеВп8 геас6оп, са1сп!асс сЬе 1аЪе1!п8 тасю пяп8 сЬе Ео11оиг)п8 Еогти1ас Ал х М!)(А!во у х Ал) х ес) 'слссЬегеАл !в сЬе аЬвогр6оп оусЬе ануе ас 1св аЬвогр6оп тах!тит ас счаче1еп81Ь 7, А а !в йе аЬвогр6оп оу сЬе ргосесп ас 280 пгп, М )в сЬе спо1еси1аг гпая оГ йе ргосе)п )и )сР, ел !в сЬе то1аг ехсшс6оп сое!Вс!епс оу сЬе Вуе ас счаче1еп8й г. !и тм 'ст '.
ТЬе ес)иас)оп а1во согкеса !ог аЬвогр6оп оу сЬе ануе ас 280 пгп. ТЬ)в Еассог!'!в йе га6о Ьеичееп аЬвогр6оп оу сЬе ануе аС 280 пгп апд Вв спахииа! сбяЫе аЬвогрСюп аС счаче!епВСЬ Х. Рог ехатр1е, СЬе !аЬе!сп8 га6о Еогиш1а !ог Су3-1аЬе!е6 асс!!Ьобу Ъесотев: Авва х 170! !!Асво — 0.05 х Авя) х 150) То негсгу сЬас с!ус соир!ш8 Ьав иос ссаша8есс сЬе Ью!о8!са! сиис6ои оГ йе РаЬ, гчЬо1е аис!Ьоггу, ог ргосеги, соисраге йе вресс6с ас6чссу оГ йе 1аЪе1ег) ргогсисс чАсЬ ссв ии!аЬе!есс соиисеграгс.
5ресг6с ас6чиу гиау гергевеис еиЬег сасасу6с аспчиу ог а ргосеш-ЬсигВи8 ааибсу, ТЬеве сурев о! ргосеси-ЬшсВи8 аяаув саи Ье рег!огше8 ои а8агове-сшисоЬ|1!хесС рерсЫе 118аис) ог рЬоврЬосуговсие Ьеассв. 8саигСаггс ргососо1в уог сев6и8 висЬ ЬсисВи8 ассснсс!ев шау Ье !оиисС си Ссгсих АипЬосбев (Наг!иге аисС 1.аие ! 999). 78.84 СЬаргег 78: Ртгет 1псегасг(оп ТесЬио108(еь СТАСЕ 2: СеП РгеРага6оп тог ГЕ1М-ГКЕТ Апа!Уыь !п ргерагабоп Гог ЕЫМ-ЕКЕТ апа!уяь, йе арргорпасе с(оиог апс1 ассерсог сотропепсь спия Ъе спсгос1исес1 шсо йе 1сче ог 6хе6 се!1ь ипс1ег ьсис1у. ТЬе ье1ессес1 псесЬос1 о1(псгобиссюп дерепссь оп сЬе пасиге оу (Ье сотропепсь аь ъче!1 аь йе яасе о1 йе се11ь, с.е., ъчЬейег йе согпропепс сь р1аяпЫ Е)ЫА еисойиц йе ргосеш о1!псегеьс !пью со а СЕР напапс ог ъчЬейег и Ы а ргосеш ог ап6Ъос1у 1аЪе1ес1 аь с)еьспЪес1 10 5са8е 1.
Еог )сче се!1ь, йе (псгодисс(оп оур!аяиЫ Т)3ъ)А Ы ассогпр!!ьЬеъ3 иь!08 еиЬег сгапьсес6оп ог пис1еаг иисгош)ес6оп, ъчЬегеаь ргосесп ог ап6Ъоссу (ь де1Ы- егеъ( Ъу т(его(п)ессюп. Еог ьсийеь оп 6хес1 се1!ь, р1аяпЫ Т))ъ)А Ы (псгобисед (псо се11ь Ьу сгапГессюп ог писго!п)ес6оп, ап6 сЬе се1Ь аге ьиЪьес)иепс!у 6хед ш рагауоппа1деЬуссе Ье1оге ьсаш- !08 ъч(сЬ 1аЬе1ед ргосеш ог ап6Ьос1у. ТЬе 1011оъч(ии спесЬос1 с)еьспЬеь йе (псгодисс(оп оур1аяиЫ ОНА (псо 1сче се1!ь Ъу сгапьуессюп. ТЬе 6гьс а1сегпа6че ргососо1 ас йе епс3 о1 й|ь ргососо1 деьспЬеь йе ргосеьяпц о1 6хед се!!ь апд сгеасгпепс чпсЬ ап6Ьойеь 1и ргерага6оп 1ог ЕЕ(МЕКЕТ апа1уяь. А ьесоп6 а1(егпабче ргососо1 беьсг!Ьеь йе де1!негу осе(йег р!аяпЫ 0)ъ)А ог ргосеш (псо се11ь Ьу иисго(п)ес6оп. ЕасЬ арргоасЬ сь оис1(пес( шс1ерепбепс1у ап6 сап Ье арр11е6 аь арргорпасе со а ьрес(6с ехрегииепса1 геисте.
СГР СЕО(ъ(1)ъ(С ЧЕСТОЙ5 Л ъчЫе гап8е о( СГР чаг(апсь аге поъч соттегс)а1(у ача((аЫе сгот СЮНТЕСН (гсеса!!ь сап Ье (оипсс оп йе ЪЧеЬ 5!се: Ьир;Въчъчъчс)опсесЬ.сот)сесЫп(о)несгогь)сас!с.Ьст1) )пс1ис(!08 нагюиь ьрессга11у орс(т(хасс чегь(опь (епЬапсесс 8гееп, уеПоъч, апс( суап 3)иогеьсепс ргосе!и); а ген-ьЬ!Ьед (ьо)асе 1гопь сЬе сога! ьрес!еь, АпсЬохоа; апс) (оппь (иьсхс со )и(гасе!(Ыаг согпрагсгпепс саг8ес(па ьес!иепсеь (якЬ аь сЬе сагпеьу3ас!оп ~ ьес!иепсе о( На-гаь (ог р)аяпа пъепъЬгапе !оса!ыаиоп, а пк(еаг (оса)!хаг!оп ьес(иепсе, апс( Со(8! сопър1ех ог ~ епс(ор(аьт!с геиси(иис гесепсюп ьегсиепсеь). ТЬеье с)оп)п8чес\оп спись(п ргогпосег ьес!иепсеь сотрас!Ые 3 часЬ ЫВЬ-|ече1 татта1!ап ехргеьь!оп, апс( сЬе СГР чапапсь Ьаче Ьееп тос(!Вес( со сои(а!и Ьипъап сос(оп 3 рге(егепсеь сог ЬлиЬег епЬапсегпепс о( ехргеььюп !и татта1(ап се1Ь. 5(апг(агс( пъо1еси!аг с!оп~па ргососо!ь 3 (СЬарсег 7) гпау Ье пьем со цепегасе ат)по- ог сагЬоху-сегт(па( (ияопь о( сЬе ргосе(п о( )псегеьс ън(0ь сЬе нагюиь СГР пъисапсь (р(еаье ьее (Ье !псоппасюп рапе3 оп СЙЕЕ)ъ) ГШОЙЕ5СЕ(ъ)Т РЙОТЕ!)ъ( !и СЬарсег 7 7), МАТЕсс1А1.6 Войег5 апд 6о!Ш1оп5 Р1еаье ьее Аррепйх 7 1ог сотропеп(ь о1 ь(ос!с ьо106опь, Ьи((егь, апд геадеппи О1!и(е ь(ос(с ьо106оиь Со йе арргорпа(е сопсеп(га6опь.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
