Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 101
Текст из файла (страница 101)
ГИМ да1а а1 101.118 МНа ччеге асг(и(гед Ье(оге (О гп(пи(еь) апд а((ег (10, 15, 23, 45 пдпи1еь) 1геа1- гпеп( чч(1Ь 100 пм РМА. Анегаае Пиогеьсепсе Иедгпе п|арь снеге са(сИа(ед Рд (ог еасЬ сеП апг! 1Ьеье аге дер(с(ед аь а рьеис(о-со!ог гоар соггеьропд(п8 1о ачегаае Иедгпеь гап8(п8 ггогп 1.3 пьес (дай Ыие) (о 2.5 пьес (гед).
РЬаье апд гподи)агюп Ие((гпеь (Ье(оге апс! айег 1геа1гпеп0 аге а(ьо р(оиед аь Ьчод(гпепь(опа! Ь(ь(о8гагпь. ТЛе сЬапае (гогп Ь(ПЬег Ие(ипеь (Вгееп апд гед, 0 гп|пи(еь) (о (оъчег Иедп|еь (Ыие, 45 гп(пи(еь) )и 1Ыь сеП деп|опь(га(еь ЕЬе рго8геьы(че рЬоьрЬогу(адоп о( ТЬг-250, апд Ьепсе ап (пдис(юп о( ГКЕТ гехи(дп8 и а гедис(юп (п ЕЬе допог Йиогеьсепсе !Иедп|еь. ч)/е (Лап(ь Топу ГьП апг! 5апдга 5сЬгп(й (Ргоге(п РЬоьрЬогу(адоп апд СеП 8(орЬуь(сь ЕаЬога1опеь, (п|репа! Сапсег КеьеагсЬ Еипд) (ог ЕЛе ехрепгпеп(а! гехи(гь ргеьеп1ед (и 1Л(ь ((Пиге. 18.94 СЬаргег 18г Ргогесп 1и1егасдоп Тесйпо!оц(ез ЕХАМРЕЕ: ЕЕ)М-ГКЕТ ЕХРЕК)МЕЬ)Т ОЬ) ПЧЕ СЕ! Ец Ап ехаюр!е о( а НАМ-ГКЕТ ехрептеп( 1о гпоп!1ог 1Ье арча(юп яа1сь о( РКСа !п !Ые се)Ь Ма Кп рЬопрЬогу1апоп оп ТЬг-250 'ь пЬохчи !п Е(циге 18-20.
ТЬе долог (и йь ехрегппеп1 'ь ЕСЕР (ипед 1о йе аиппо 1етп)- пип о( РКСа, апд йе ассер1ог 'ь СуЗ соп)ица1ед 1о ЕаЬ Тгацюеп(п ацапп1 рЬопрЬогу1а(ед ТЬг-250 (аТ(р)250- СуЗ). ТЬЯ рго1осо) сап Ье адар(ед 1о ойег рго1е(п пуп(еиь (и )ве се1!я 1. Ргераге 1Ье сейп Ьу (гапдесйоп о( 1Ье СГР-РКСа Типюп сопп(гис( ап депспЬед )и Иаце 2. 2. Яепйу йе 1гапп(ес(ед сейп (Ьа1 аге ехргеь(пц СГР-(аццед РКСа алд гпкго)п)ес( пе)ес(ед сейп ипй аТ(р)250-СуЗ (0.5 юц)гп() ап депспЬед )п (Ье рапе) АЕТЕКЫАТ(ЧЕ РКОТОСО1: М)СКО(Ь))ЕСТЮН ~ ОГ ЫЧЕ СЕ11$Нп 5(аце 2. 3. Гойоиппц гпкго!п!есйоп, асс(и(ге а рЬапе ппаце пепеп о( йе Той ап а гего Иейте ге(егегке.
4. Ргосеед (о ас<)Ыге йиогепсепсе рЬапе ппаце пес)иепсеп о( Фе долог (СЕР Я1ег пе() ап депспЬед !п 5(аце ~ 3, Ье(оге апд а((ег (геа(гиеп( хч((Ь йе деягес! пбипйп (100 п)ч) РМА (ог РКСа). )пс1иде а( )еая опе ип!п)ес(ед сей И 1Ье ппацед гец(оп о( !п(егеп( ап а долог ге(егепсе Иейие гпеапигегиеп( !п (Ье аЬпепсе о( 1 ассер(ог. 5.
Са1си1а(е йюгепсепсе Иейпе гпарп ап депспЬед )и 1Ье Япсипяоп оп !глаце Ргосепяпц !п 1Ье рго(осо) (п1гойк(юп. ЕХАМРЕЕ: ГЕ)М-ГКЕТ ЕХРЕК)МЕЬ)Т ОЬ) Г)ХЕО СЕ! Ец Ап ехагпр1е о( а йхедсе$1 ЕЕ)МЕКЕТ ехрепгпеп1 1о гпопйог йе ас(йайоп п(аджип о( РКСа н1а 1ь рЬопрЬогу)айоп оп ТЬг-250 ь пЬоъчп )и Е)циге 18-21. )п йь ехрепгиеп1, 1Ье с)олог апд ассер(ог согпропепь аге сагпес! оп Ьчо д йегеп1 ап()Ьод)ею йе долог Огецоп Сгееп ь соп)ица(ед (о йе РКСа-прес!йс гпопск1опа$ аппЬоду (МС5-ОС) апд 1Ье ассер(ог СуЗ Ь соп!ица1ед (о 1Ье ро1ус1опа1 апйЬоду сйгес(ед ацапы рЬопрЬогу1а1ед ТЬг- 250 (аТ(р) 250-СуЗ).
ТЬь рю(осо) сап Ье ас(ар1ед Ьг апа1уя3 о( ойег рго(е)п $п(егас(1оп пуяеиь )п йхес) се$14. 1. Ргераге Фе сеЕЬ ап депсг)Ьед !п йе рапе$ $п 5(аце 2 оп АЕТЕК1ЧАТ)ЧЕ РКОТОСОЫ РКЕРАКАТЮЬ) ОГ ИХЕО СЕ! 65 ГОК ГЫМ-ГКЕТ АНАЕУ515, согпр1ейпц (Ье с!еягед пйии$гь апд (пие гец(гие.
МосИу йе апйюс!у !псиЬа(юп 1о !псогрога(е 1:1 (10 ицггп!) гп!х о(долог (МС5-ОС) апд ассер(ог !аЬе1ед (аТ(р)250- СуЗ)апйЬойея 2. Ассйпге а рЬапе-!юаце пепеп о1 йе ЕЫ$ ап а гего Иейие ге(егепсе. 3. Ыпе 1Ье СГР 6$1ег пе1 (дкЬго!с: О495ЕР егп)ппюп: НО510!20) (о асс)и(ге ап Огецоп Сгееп долог рЬапе)гпаце пес)иепсе (ог а гец(оп о( !п(егеп( ап депсг(Ьед аЬоне.
4. Кесогд ап )юаце о( 1Ье ассер(ог, апд (Ьеп рЬо1оЫеасЬ йе ассер(ог Ьу сЬапц(пц (о (Ье 100-ЧЧ гпегсигу агс $агп р (Уе(пп А((оАгс) ап а пои гсе о( й)игп(па()оп. Моче 1Ье СуЗ Я(ег пе( (ехсйайоп: Н( >545130, д(сЬго(хг О565ЕР егпыюп: НО61 Ог75 сЬгогпа) пдо йе де1ес(юп ра1Ь. Тайе ап (юаце ог' 1Ье ассер1ог Ьу орбгпа)пц йе ехропиге йпе (о оссиру йе (и$1 дупагп(с гапце о( йе ССО.
С$опе йе де1ес(ог рог( апд 1$1ииппа1е 1Ье ассер(ог ипй1 йеге 'ь по Япсегп)Ые СуЗ йиогепсепсе. 5. Ке(игп (о йе долог Я(ег пе1 апд асцвге а песопд, роп(ЫеасЬ долог рЬапе 'пиаце пеиея ТЬЯ сопп(1(и(еп (Ье долог ге(егепсе Иейие ппаце, )п (Ье аЬпепсе ог ассер(ог. 6. Ргосеес)1о са)си1а1е йиогепсепсе Ие(пие гоара ап депспЬед (п 1Ье д)псиппюп ои 1гпаце Ргосепп(пц 'в Фе рго(осо) !п1годисйоп. г. Са1си1а1е ЕКЕТ еЯс$епсу гоара Ьу (ай(пц йе га(ю (К,.) ог' 1Ье Иейгие гпарп асс)и)год Ье(оге апд а((ег ассер1ог РЬо1оЫеасЫпЦ. ТЬе ЕКЕТ еЯс1епсУ ециа1п 1 — Кг Рго1осо! 6 Апа!уыил ог!п1егас6пц Рго1е~пь ЫЙ 5ог~асе Р!аьгпоп Кеюпапсе 5рес1гоьсору 0япу В!Асоге Мах|пе Ч.
Медафа апс1 КоЬегС !. Г!вЬег* На!гола! Сапсег 7пабсисе-ГСЙРС, Ггег)ег(с)г, Магу(ап|7 27702 вогнав-то-ркотнге вин|с|с 1гетгкастюьсь нпчт веем ьтсгн|ен ияпк шапу б(ссегепс шесЬос!а, ЪосЬ ср|а1!сабче (Ве! 61сгасюп) апс1 с)иапс!сас!не (са1огипесгу апс1 и!сгасепсг(гикасюп). ТЬе 1псгос1исбоп о! сопипегс|а! шаггишепга, якЬ аа В1Асоге (!опааоп еС а1. 1991), СЬаг аге сараЫе о! шеааиппВ аиг(асе р1аяпоп геаопапсе (ЯРК) Ьаа а!шр116ед сЬе асибу о! |пасгопю1еси1аг шсегасс!опа Ьу ргон(б!пВ а Еогшас йас гпау Ье иаег( со шеааиге пю1еси1аг !псегасс!опа ш геа1 сипе ълсЬ япа11 апа!уска1 апюипса о! гпасепа1.
Яечега! ВРК шасгишепса аге анабаЫе, гапВ!пк сгогп чегу ягпр1е апб шехрепяче шоссе!а со пюге !псекгасед (пасгишепса чг(сЬ ассепбапс гоЬобся орбса1 шсег(асея апс! аойънаге. ТЬе яшр1еас ден(се, са)(ест а Яргееса сЬ~Р, ъчаа с1ене1орес1 Ьу Техас 1пасгишепсз (ънъчъч 6 сош/аргееса). Техаа 1пасгишепса ша(псаша ап (пЕогша6не ъЧеЪ Ясе ълсЬ ап !псегеас!пВ безспрбоп оЕ йе РЬуяса! Ьаяа оГ ВРК. А аошеъчЬас пюге аорЫаскасеб !пяпипепс 1а йе 1В15 В!оаепаог, ънЫсЬ (а оггегес1 Ьу ХапТес 1паспипепга (ънъчън.хапсес.сош). ТЬе 1В1Я Вюаеп|юг иаеа сичессея Ъис К !а аЬо согпрабЫе ъл|Ь В1Асоге аепаог сЬ(ря Тъчо шасгшпепса и6- 1(хе сичессеа га|Ьег |Ьап сЫря Опе |а а ргоцгашшаЫе Ьюаепаог са1!еб Р1аяпооп, ъчЬ|сЬ ыпапиуассигеб Ьу ВюТи! (ънъчъч.Ыоси1.сне).
ТЬе ойег, 1аауз, !а ап орбса1 Ьюаепаог |Ьас иаеа а ас!ггеб сш ене (ънънъч.аСС)п!Су-аепаогясош7!аауяЫш). ТЬгее ша)ог г)папуас(не арргоасЬеа аге паем со асибу сЬе (псегассюп Ьесъчееп шасгогпо1- еси!ея апа1ус|са1 и1сгасепсги!кас!оп, )аосЬегша! бсгабоп са1огппесгу, апд ЯРК арессгоасору. ТЬе аггепксЬ о( ВРК арессгоасору (а сЬе аЪ!16у со оЪса|п )с)пес!с |1аса, |.е., |Ье ш(сгоасор!с гасе сопасапса Еог ап шсегассюп Ъесъчееп п|асгогпо1еси1ея Апа!уска1 и1сгасепсг!!икас)оп ргон(беа сЬе Ьеас ечЫепсе Еог сЬе аккгека6оп асасе оЕ а ргосе|п, апд !аосЬегша( бсгабоп са1опгпесгу ргон!беа а сошр!есе сЬегшос1упаш!с ргоб!е |пс1исВпВ сЬе ес)и!!!Ъг!иш сопасапс, геассюп асокЬюгпесгу, епсЬа1ру, апд епсгору.
1деаПу, сЬеае шесЬосЬ зЬои16 Ье иаес1 сокесЬег со сЬагассепхе а гпо1еси1аг шсегасбоп согпр1есе1у. Са1огппесгу апс1 апа1уска1 и1сгасепсг(гивасюп тес)и(ге пп111Вгаш агпоипга оЕ риге ргосеи|, апб ВРК арессгоасору гег)и(геа ш(сгоВгаш ашоипсь о! Ргосе(п.
'ТЬе а|пЬога ргераге|С |Ь|а рго|осо) ип|Ь гве Ье1р о! М. Нча|Ь, С. Ни|оп, апгС Е. ън|1|оп (|Кабопа1 Сапсег 1пагсгпге-рСКС|С, ргес|егсс$с, Магу1апо). Ртогосо! 6: Апа!упв оу1пгетаст(п8 Ртогетв М(Ь 5ит!асе Р1автпоп йевопапсе 5ресгтовсору Бвт8 В1Асоте !8.97 во вепвсг с до(б вепвотдгагп Е!С(!РЕ 18-22 5сЬегпа(!с о! 5РК В(А(есЬпо!оду тедев оп (Ье рЬепогиепоп о! виг1асе р)автпоп гевопапсе (5РКЬ ччЫсЬ оссигв ччЬеп вит(асе р1аяпоп ччачев аге еха(ед а( а тпегаИ(г(и(д (пгет(асе. 68Ы !в йтесгед аг, ати! ге(!естес( (гоги, йе вЫе о! йе вит!асе пог !и сопгасг вч((Ь вагпр1е, апд 5РК саивев а тедисдоп !и (Ье тейессед 1!ВЬ( !пгепв!(у ас а врос(((с согпЫпа(!оп о! аи8!е апд ччаче!епВФ. Вютпо1еси(аг Ь!пйп8 ечепгв саиве сЬап8ев (и йе ге(гас(сне !пдех аг (Ье виг(асе )ауег, и ЫсЬ ате дегесгед ав сЬап8ев !и йе 5РК я8па1. (Редтаюп, ич(Ь регги!вяоп, (тоги В(Асоге, 1пс.) Я)КРАСЕ РЕЙМОН КЕйОМАМСЕ ЯРЕСТКОБСОРвт 5РК 1в ап ор6са1 гевопапсе еггесг ш ччЬкЬ (Ье ЪасЫде о!а (Ып сопдис6че пиггог аггесгв (Ье ап8)е аг нчЬкЬ (Ьеге 1в а пишппип ог гейесгед 118Ь( (Р!Вите ! 8-22).
ТЬе 5РК. гевропве 1в ехггеше1у вепя6че го апу сЬап8е ш (Ье йе1есгпс сопвгапг ог (Ье шейшп ад)асепг со (Ье ВоЫ виггасе ог а вепвог сЫР. СЬап8ев ш (Ье 5РК в!Впа! аге пюшгогес1 Ъу гесогйп8 (Ье ап8и1аг сЬапВев нчЬеге гЬе гейессед 118Ь( (в пишпшгп. А гевопапсе ишг (ИУ) гв агЬгггап1у дедпед ав !(3000 о!а де8гее ш (Ье В1Асоге швггшпепс. ТЬе В!А(есЬпо1оцу Напс)Ьоо1с шс1идев а сЬарсег йаг йвсиыев (Ье РЬепошепоп о! 5РК апд Ьоъч йе 5РК я8па! ге1агев го (Ье !псегас(юпв Ьеьчееп йе апа)усе (Егее) апс1 11цапд (Ьоипд) пю1еси1ев.
Апо(Ьег йвсивяоп ог" 5РК сап Ье уоипд (п (Ье Епсус!арейа о~ Ще 5сгепсев (ъчъчъч.е!в.пес). ТЬеге аге уоиг гпа)ог сошропепгв о!а В1Асоге гпвгпппепг: ° ап ор6са1 шгеггасе ипЬ го шоипс йе вепвог сЫР ° а ш!сгойшйсв вув(оп (5)о1апдег апд с)гЪап!сг)су 1991) со с1е1гчег апа1у(е (пю1еси1е о! шсег- евг) ргес(ве!у го (Ье 118апд (гпо1еси1е апасЬед со йе виггасе оу(Ье сЫР) ° ап аиговашр1ег го сгапвуег вашр1ев ггош (Ье вапгр1е гас)с го йе гпкгойи!Йсв де!гнету вувгеш ° дага соПесбоп апд дага апа1уяв вогггчаге 1( (в ййси1С Го ргейсг Ьонч 1оп8 Ь вЬои1д Самосе Со регГогш а В1Асоге ехрепшепг апс1 апа1ухе (Ье дага оЬ(ашес1. Аггег ргерапп8 (Ье арргорпа(е вепвог сЬ(р апд орг!ш(х(п8 сопй6опв Гог (Ье шгегас6оп Ьегнчееп (Ье 118апд апд апа1у(е, йе ге8епега6оп сопй6опв пшвг Ье де(егш)пед. Опсе йеве рге1ишпагу в(ийев аге согпр1егед, (Ье асгиа! ехрепгпепг (в гип, апд (Ье г1а(а аге апа!ухес1 ияп8 (Ье В!Аеча!иа(юп воггнчаге.
Рог вогпе вувгешв, висЬ ав ердоре гпаррш8, опсе йе оршпа! сопс1июпв Ьаче Ьееп евг(ша(ед, (Ье ехрепгпепга! дея8п апд апа1уяв оГ (Ье геви1(в аге г)шге вгга!ВЬ(уогнчагд. Ноъчечег, ехрег(шеи(в деяцпед го е1исЫаге йе Ыпе6св о! ап гпгегас(юп 18.98 СЬаргег 18: РгоГегп 1пгегас6оп Тес)гпо!о8(ев тау 1еас1 го йе с1ече1ортепг оуЫпе6с рагЬгчаув гЬас аге тоге сотр!ех гЬап гЬе гпК(а! тос1е1.
ТЬе В1Аяпш1агюп воуггчаге (ачаг!аце оп гЬе чггеЬ Яге) ргочЫев а гпеапв го рге6(сг ччЬаг гЬе геви1гв оу йе шгегасбоп ччои16 1оо1с 11)се чч(гЬ 6)гТегепг Ыпе6с тос1е1в. В1Асоге апа1уяв Ьав Ьееп иве6 1ог ргосегп — ргогеш, ргосегп — втаП пю1еси!е, ргогенг — пис1ек асЫ, апс1 ргоге(п-11РЫ (пгегасбопв (Се1(а ес а1. !999; Каш ег а1. !999; 5аеп1со ес а1. !999). Моге гЬап 1300 ге(егепсев со йеве арр1кабопв ав вчем ав ойегв сап Ье уоипд (п а ге(егепсе 1!в! 1серг аг ъчгччч.ЬВасоге.сот. ТЬеве геуегепсев г11ивггасе гЬе ъчЫе гапке оу ехрептепса1 дея8пв гЬаг Ьаче иг111ге6 В!Асоге 5РК гесЬпо1о8у.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
