Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 104
Текст из файла (страница 104)
б )г, 'ь по( )ъерс сопв(ап(, (Ье наЫе оЬ(а| пег3 ь Вгеа(ег (Ьап (Ье гпахипи го рова |Ые га(е о1 д(йивюп. ТЬе плоде| Ебв бле соггес(ед да(а гпоге с|ове|у !Ьап |( доев (Ье гаъч да(а, ав (Ье Ппев гергевепбпц (Ье й( да(а пюге с|ове|у 1ойоън (Ье Ппев ',того бле ас(иа| да(а (Е|рлге 18-28) (Ьап (Ье Ппев о( (Ье ганн г3а(а (Г(рлге 18-29). ТЬе гев|диа1 р|о( вйоъчв (Ье д(бегепсе Ьебчееп (Ье ехрепгпеп(а| апд Ябед да(а (ог еасЬ сигче апд 'ь апо!Ьег плеапв о1 аввевв(пй (Ье Воос1певв о1 (Ье Я(. ТЬе геядиа1 р|о( 1ог (Ье соггес(ед да(а (Егй лге 3 8-29) вйоънв (евв дема(юп блап (Ьа( о1 (Ье гаъч да(а (Брлге 1828), сопйпп(пц (Ье арргорпа(епевв о( (Ье доиЫе ге1егепс|пр Еог а сев( оНЬе д(оба! Й6пб о1 (Ье да(а, (Ье сигчев геви)3(пб (гогп (Ье (п|ес(юпв ог 5, 50, апд ) 00 пм Т5Н очег (Ье (Ьгее апб-Т5Н виг|асев ънеге согпЫпед (ог апа|удв. ТЬе пюс|е! Ябв !Ье согпЬ|пед соггес(ед вепвогВгагпв япх|аг|у (о (Ье Гб вееп 1ог (Ье |пг|Мс|иа! соггес|ед виг(асев (Г(йоге 18-30).
|и Таб|е 3 Вд 2, (Ье ча|иев оЬ(а(пед (ог (Ье Ыпебс га(е сопв(ап(в 1ог а3! (Ьгее |ене|в о1 апб-Т5Н аге соплрагед 1ог (Ье дага Ье1оге апд айег (Ье соггес(юпв ъчеге рег(оппед, ав ъней ав бюве оЬ(а|пег| 1гопь (Ье соплЬ|пед да(а. Гог (Ье 340 РЫ видасе, бъе ча3иев оЬ(а|пед 1ог (Ье сопв(ап(в (ог Ьо(Ь ве|в о1 с|а(а аге ъч(бл(п 30',4 о1 еасЬ обжег, |пгйсабпц (Ьа( (Ье пюде! Я(в |юбл ве(в о1 с|а(а Ыпй|аг|у. ЪАлЬеп (Ье ча|иев (ог (Ье согпЫпес! да(а аге ехапл(под, |Ье сопв(ап(в (ог (Ье гаъч апд соггес(ед да(а аге ъчПЫп 20% о1 еасЬ о(Ьег. ТЬе Ь~ВЬ дейгее о( сопдв(епсу Ьебчееп (Ье га(е сопв(ап(в (ог (Ье соплЬ|пед апг! (пд)ч(диа! апб-Т5Н видасев гейес(в (Ье арргорг(а(епевв о( (Ье ве(ес(ед гподе3.
Ргогосо! 6: Бга~е еЬ Ктег(с Апа(угг2 о(г гйе Апг(ЬодуАпг(ееп Тпгегагйоп 18113 НСОКЕ 18-28 Еап гпи)г-Ьдпд)п Моде! ТЫь р)о( ейоъчь 1Ье геаи)(ь о1 йидпц гйе ьепгюгцгагпя геяи)1)па (гогп 1Ье гачч да(а 1о а 1:1 ()апагпи!г) Ьед)пй спиде! ччйЬ а соггес(юп (ог пгаеа 1гапьрог( апд ге(гас(Ые )пдех сдйегепсея а1 Ьо(Ь 1Ье я(ап апс! епд о(1Ье (п)есгюп. ТЬе да(а )п 1Ье апа)уе(а оп)у )пс(идед 1Ье Его 380 гесиода Ьесаиае о( аррагеп1 гпасЫпе ейесгь геяЫ1)пд )п Ыайег (1()ь (ог 1Ле (а((ег раг( о(1Ье д)ььос)аг)оп рагг оТ(Ье зепгюгйгагпь.
0(йегепсеь Ьегччееп 1Ье ехрег)гпеп1а! апд ййед да(а аге аррагеп1 Ьо1Ь (п 1Ье сигчеа апд )п Ейе гее)диа! р)ог. Бо(Ь ьйочч ьуьгегпайс деч(а()опт (п 1Ье ааьооайоп апд д)ееос(а((оп рйаьеа. Г!С$38Е 18-29 Соггес(ед Еап гиии-Ь)пд)п Моде! ТЫа р)ог ейоччь 1Ье гехи)1в о( Яйдпц 1Ье доиЫе геТегепсе еиЫгас(ед да1а (о 1Ье ьагпе гподе! аь иьед (п у)доге 18-28 (1:1 [(апйпги(г! Ыпд(па ъч)1Ь а соггес(юп (ог гпааа (гапарог( апд гейасдче (пдех д)йегепсеь а1 Ьодп 1Ье ь1аг( апд епд о( 1Ье )п)ес1(оп). ТЬе соггес(ед да1а айпи Ье1(ег ййдпц 1о 1Ье сигчея апд (п 1Ье геа(диа! р)о1. 18.114 СЬаргег 183 Ргоседа 1пгегасгсои ТесЬпо!о5гез Г!С()КЕ 18-30 С1оЬа! Г1111п8 о11Ье В)псВп8 Моде! То (Низ!гасе ап арргохсгпадоп о( к10Ьа( йсдпд, 1Ь!з р!ос соспЬ!пез йе соггессед зепзог8гапсз оЬ(агпед ччЬеп еЬе загпе еЬгее сопсепсгасюпз о( Т5Н (5, 50, апд 100 пМ) ччеге сп)ессед очег ПЬе (Ьгее д!((егеп1 зиг(асе !ече!3 о( апд-Т5Н (160, 340, апг( 550 К()в).
ТЬе ча(иез (ог К оЬ(а1пед !торп (Ье Ясз о(1Ье !пд(- ч!диа! зиг!асез счеге изед аз сопзсапс рагапте1егз !и 1Ье 81. ТЬе ча!иев оЬ(а!пед (ог 1Ье согпЬ!пед с!а1а аге с)и!(е с(озе со 1Ьозе ОЬ(а(пед (ог еасЬ )пд!ч!диа( зиг(асе, )пд!сас!пц сЬас сЬе гасе сопзсапсз (ог !псегассюп Ьесччееп 1Ье апс!кеп апд апдЬоду аге сопзсап1 (ог д!((егепс !!капд апд апа(усе сопсепсгасюпз. ТАВЕЕ 18-12 К1пе(1с Ка1е Сопзсапсз 1ог АП ТЬгее Ьече!в о1 АпИ-Т5Н Австс-Т5Н 513кГАсе 50иксе Кт 5 Кмт хг К М СотЬспед 5Ьочга Ьеге аге йе ча)аез (ог йе Ыпепс сопзсаоь апд гс (ог Ьой йе гасе апб еоггеесеа Паса (ог аП сЬгее ыгйее 1ечеЬ о( аос)-Т5Е1, аз счеП аз йе сошбспеб ча1аез гергезеоС!а8 а 81оЪа) й. Рог йе гаш Пата ПЬ, йе Е, счаз ЬеЫ сопзгааг аС 1е', ччЬ!сЬ ргочЫез а 8оад езогоаСе апд е!апспасез ошоепса! гППсеа!без Ъазеб оо сбе зош-39аагед а18огаЬто. ТЬе Ь|8Ь Пеагее ау еопяпеоеу Ьепчееп сЬе гасе сопзсапь (ог сЬе еошЪ!пед апд спйчЫаа) апс(-Т58 загуасез гебееь сЬе арргорпасепея о( тЬе зе)еесед шаде).
Резр!се сЬе «пргочепсеос зееп Ы сЬе бс аод !и йе гез!Паа)з счбео йе Паса ыеге ПооЫе-ге(егепее зоЬсгаесей сЬе Ыоеис соозсапь аге с)о!се е)озе, аба1п шйеасш8 с)сас сЬе зе)еесед шабе! ь арргорпасе. ТЬе 23 ча1аез аге оо йе заосе оЫег о( спа8- о!сабе аз шзсгшпепс попе (суркаПу <2 КР), счЬ!сЬ сз еооязсепс чай а Поод й. "Рог Ппсо8 йе гачч Паь, йе псасепа1 сгаозрогс ча1ае (Е,) счаз Ье)4 еоозсаос ас сев. 160 КБз 340 К()з 550 К()з Каче да1а' Соггессед дага Каче с1а1а' Соггессед даса Каст да1аз Соггессед с1аса Касч да1а' Соггессед дага 62.8 43.9 111 89.9 1бб 142 4.42ез 7.01ез 5 02ез 6.23ез 4.90ез 5.73ез 5.35ез 5 72ез ! 8)е-3 3 80е-3 2.25е ' 3.19е 3 2.58е ' 3.06е ' 234е 3 2.82е ' 1 00ев 3.37ет 1 00ев б 51ет 1 00ев 8.Обет 1.00е' 8.34е" 2 44ев 1.85ев 2.23ев ! 95,в 1 90ев 1 87ев 2.29ев 2 03ев 4 10е-ч 5 41с-ч 4,48е ч 5!2ез 5 26е-ч 5 34е-ч 4.37е ч 4.93е ч 1.18 1.08 2.7! 1.74 3.35 2.28 2.06 1.45 1пЕогта((оп Рапе1ь 18.115 Е!ЕАМЕЫТОЕ)о РНАСЕ О!ЯьЕАЧ 5(псе йе песЬос( |чаь 6гя г(еьсг(Ьес( Ьу Сеогде дпп|Ь ( 1985), сЬе йьр!ау оЕ Еоге|дп рерсЫеь апс( ргосе|пь оп сЬе ьшЕасе оЕ 61ап|епсоиь ЬассегюрЬадеь Ьаь Ьесопе а согпегьсопе оЕ сесЬшдиеь со |и еьддасе п|о!еси1аг |псегасдопы и рагски!аг, йоье шчо1чшд ьыЕасе ьсгиссигеь оЕ ргосе(пь.
РЬаде йьр1ау Ь ые|Ь ° То ИеиВЕу аи|Е аиа(ухеуеагигеь ои йе ьигуисеь оургоге(иь сЬас |псегасс |ч(сЬ осЬег ртосепь. ° То Ьо!иге пеьч 1(даи|2ь г)гаг Ьии|Е го рагйси!иг атиио асЫ ьег!иеисеь. ТЬеье Вдапс(ь пау Ье апбдешс ерпореыпЫЬ|согь, апсадошьо, адошьсь, ог ьиЪьсгасеь. ° То !тргоче г)се ахи(гу ан|4 ьресфс!гу оуг)се !игегисоои Ьес|чееп 1(дапг)ь апс) |Ье|г сагдес ьсгиссигеь. ТЬе ягепдсЬ оЕ йе рЬаде йьр(ау ьуьсеп| геьи1ь Егоп| сЬе ро|чег6|! соп|Ьспасюп оЕ а(у|псу ье!ессюп а|Ы Ью1оддса1 агпр1|6садоп. Весаиье 61агпепсоы ЬассепорЬадеь сап Ье ехроьес) со 1(даос( ас сопсепсгасюпь (п ехсеы оЕ 10'| рагс(с1еь)п1, а чаьс пипЬег оЕ Еоге(дп рерсЫеь сап Ье йьр!ауес( оп сЬе ьиг(асе оЕ|Ье |Вга! раг6с1еь апс) ьигчеуес) Еог |Ье|г аЬ|!|су со шсегасс |ч(сЬ а сагдес 1|дапй А1сЬоидЬ ЬассепорЬадеь йас Ь(пс( со |Ье сагдес п|ау Ье чегу гаге Ы йе ог(д(па( роро!а6оп, йеу сап Ье гесочеге|1 апс( еппсЬе|1 Ьу гереасшд гоип|Ь оЕ аддшсу ье1есдоп ап|1 дгосчсЬ.
г11агпеп1оиь Вассег(ор!ьадеь 1п 61ап|епсоы рЬаде йьр1ау, а ьедпепс оЕ Еоге(дп РВА Ь (пьегсес! шсо а рЬадепЫ ог ап шЕессюы 61агпепсоы ЬассепорЬаде депоте, Ьес|чееп йе ьес(иепсеь епсойпд |Ье 1еас(ег рер|Ые апс( |Ье тасше ьес)иепсеь оЕ ргосеш дрП1 ог дрЧП1. Аь йьсиые|1 ш с(еса(1 ш йе шсгос(иссюп со СЬарсег 3, |Ье ргосеш епсос(ес( Ьу депе П1 оЕ ЬассепорЬаде Я Ь оп1у а гпшог сотропепс оЕ сЬе |В| ы рагск1е; Вес|чееп сЬгее ап|1 Вче сор|еь оЕ сЬе ргосеш (М„= 43,000) аге ргеьепс ас опе епс( оЕ сЬе 61ап|епсоы ч|поп (Ргасс ес а1. 1989; 6гапс ес а). 1981; 2апап ес а1. 1992), |чЬеге |Ьеу аге тчо!чегып аЬьогЬПоп оЕ йе ЬассепорЬаде раг6с!е со а гесерсог 1осасе|1 оп сЬе Пр оЕ р р|6 (Агпягопд ес а1.
1981; Еог ге|6е|чь, р!еаье ьее Мос(е! ап|1 Кипе! 1988; Киые1 199!). Масиге рП1 Ь с(еНчес( Его|п а 424-геьЫие ргесигьог сопсашшд ап !8-геьЫие ЬуйорЬоЬ|с апппо-сеппша! ядпа! ье|)иепсе йас о с1еачес) роьссгапь1асюпа11у Ьу Ьассепа! ядпа! рерсЫаье 1. ТЬе спасше ргосеш Ео!сЬ спсо а ьсегп ап|1 1|поЬ ьсгиссиге соп|роьес! оЕ |Ьгее с(опа(пы ТЬе апппо-сегпппа1 1|поЬ (СгЬяпап ап|1 дп|пЬ 1984) Ь гес(и(гес( Еог ассасЬгпепс со апс( репесгадоп оЕ |Ье р р|16 сЬе сепсга1,!ш1|ег с(опа(п сопсашь ьечега! 81ус|пе-НсЬ гед(опь, ьсаЬ(1(хес( Ьу сбьи1Е|де Ьопс(ы апс( |Ье сагЬоху-сеппша! |1огпаи| апсЬогь сЬе тасиге ргосеш ш сЬе епче1оре оЕ сЬе рагдс1е (Но!1шдег ап|1 ВдесЬп|апп 1997; 1иЫсосчь)с( ес а!.
1998). бепе НП! оу ЬассегюрЬаде Е1 (рЧШ) епсос(еь йе та)ог сарыЫ ргосеы| оЕ |Ье ч(гы рагск1е. Матге рЧП1, |чЬкЬ ьь )иьс 50 ап(по аскЬ 1опд, Ь г)ег(чес) Егогп а ргесигьог йас сагпеь а 23-геьЫие, апипо-сепп|- па1 1еас)ег ьес)иепсе. Айег сгапь!осасюп асгоьь сЬе Ьассепа1 п|егпЬгапе, йе 1еас(ег ьес)иепсе Ь гепочед Ьу Ьассепа! ядпа! рерсЫаье 1. ВассепорЬаде Е! рагдс1еь сопсаш -2700 сор|еь оЕ рЧП1, |чЫсЬ аяегпЫе агоипс( йе япд1е-ьсгапс)ес( ч|га! РВА с|4|Ь сЬе|г Ьаьк сагЬоху-септипа1 геыЫиеь ш сопсасс сч!|Ь сЬе пис1е|с асЫ. ТЬе сепсга1 Ьус(орЬоЬ|с геьЫиеь оЕ сЬе рЧП1 аге сссчо!чес) |и сопсассычпЬ пе(дЬЬог(пд рЧП! п|о!оси!еь, ъчЬегеаь йе(г асЫк апипо сеппш аге ехроьес( со ьо1чепс (Маг|бп 1990).
ТЬе апипо асЫ геыЫиеь ас |Ье апипо сеппшиь оЕ рЧЕП аге пос соска! Еог сгапь1осасюп, Ьис сЬеу аге ипрогсапс !ог рЬаде аяеп|Ыу. Чес1огь ()ьег! Еог РЬаде 0!ар!ау !п сЬе Ьасгег1ор)саде |Е(ьр!ау ьуьгет, а ьедтепс оЕ Еоге(дп РХА Ь шьегсес( шсо депе П1 ог депе ЧП1, а Еесч пис!еосЫеь с(оьчпьсгеап 6от йе Неачаде япх Е.
со11 сгапь(ессес( ьч(сЬ йе гесоп|Ь~папс ч|га! РЫА ьуп|Ьеыхе апд ьесгесе а риге рори1асюп оЕ ш(ессюы "йяоп рЬаде" рагдс1еь йас йьр)ау оп йе|г ьыЕасе сЬе апипо аснЬ епсос(ес( Ьу |Ье Еоге(дп Р(4А (дпий 1985; Рапп(еу апс) дпйЬ 1988). Вчегу сору оЕ рП1 ог рЧП1 оп йе ьигЕасе оЕ ап ш(ес6оы ЬассегюрЬаде раг6с1е сагпеь сЬе ьес(иепсеь епсос(ес) Ьу йе Еоге(дп РЫА, |чЬ|сЬ аге сЬегеЕоге йьр!ауес( |и а |1епье1у рас1|ей "пш16ча1епс" Еайюп. ТЬе рйадешЫ |Е(ар!ау ьуьгеш сопьЬсь оЕ а р!аьпЫ сЬас сагпеь а япд1е сору оЕ депе П! ог депе ЧП1 апс( сЬе Ыга1 опддп оЕ РНА гер1кадоп.!и рЬадеспЫ йьр!ау, аь ш сопчепдопа! рЬаде йьр!ау, а ьедпепс оЕ !оге|дп РЫА Ь шьегсес( шсо депе П1 ог депе УП! )ыс с(спчпьсгеап Его|п йе с!еачаде ясе йас ьерагасеь сЬе Ьус(горЬоЬ~с ядпа! ьес(иепсе Егот сЬе тасиге ргосе|п. ТЬе гесо|пЬ~папс р1аяпЫ Ь |Ьеп пьес( со сгапьСопп ап арргорпасе ьсгаш оЕ Тх со!Ь ВассепорЬаде рагс|с!еь йьр!ау|пд сЬе апппо асЫ ьес(иепсеь епсос(ес( 18.116 СЬар|ег!8: Рго|есп!нгегасйон Тес)гпо!оч!ея Ьу |Ье яейшепг оЕ Еоге!Вп Р)4А аге оЬса!ией Ьу яиреппЕес6п5 йе ггапяЕоппед се11я чЫй Ье!рег рЬайея (е.В., Ъ|С5М13 ог М13КО7; Еог бе|ай|, р!еаяе яее СЬар|ег 3 ап|1 Аррепгйх 3).
Весаияе гер1ка6оп апг) рас1|- ай!п5 оЕ |Ье Ье1рег ь 1еяя е!Т|скп| йап сЬа| оЕ |Ье рЬайешЫ, |Ье рори1а6оп оЕ Ьасгег!орЬайея яесге|е|1 (гоп| |Ье яирепп(ее|ее! се11я сопя|о очегч Ьеш!п51у оЕ рагбс!ея |Ьа| гйяр!ау |Ье с1опе|1 сагйес яе|)пенсе. Ноъчечег, йе Еопп оЕ |Ье ойяр1ау В я1|ВЫ1у 6!ЕЕегепс Его|и |Ла| оЬга!пей Ьу с!оп!пй ш|о |Ье Вепогпея оЕ сопчеп|юпа1 |п(ес6оия Ьассег!орЬайея. ТЬе яигЕасе оЕ пошпЕесйоня раг|к1ея Вепегасей (гоги рЬа5ешЫя соп|ашя |ъчо суре| оЕ рП1 ог рЪ'П1 — опе епсодег) Ьу йе рЬайешЫ сопла!п!пй |Ье Еоге!Вп яе|)иепсея апй апо|Ьег, |чЫсЬ!асйя Еоге!Вп яес)иепсея, епсойег) Ьу |Ье Ье!рег ч!гия. ТЬе рори!а6оп оЕ Ыгы раг|к1ея яесгегед Егоп| яирепп(ее|ей се11я аге |ЬегеЕоге рЬепо|урка11у ш!хек апд |Ье!г яигЕасея аге п|ояак.
А| 1еая| яоп|е оЕЕЬе Еоге!Ви яег)иепсея ъчй1 |Ьеге)оге Ье гйяр1ауед !и а "п|опоча1еп|" ЕаяЬюп, ч ЫсЬ лпау Ьаче ас)чапсайея ъчЬеп яе!есйпй Еог 1!Вапйя |Ьа| Ь!пй |о |Ье гагйег яег)иепсея |чЬЬ Ь!ВЬ ай|пйу. 5рес)а1!гес( рЬаВеш!6 сйяр!ау чес|огя Ьаче Ьееп Вече)орей !ог рагйси!аг ригрояея. ТЬе Ье|и Епоъчп оЕ йеяе аге рЬацешЫ неслося |Ьа| соп|аш ап ап|Ьег (! |АС) сЬа!и-сегш!пас!п5 п|и|а|юп ннп|е|йа|е1у йоъчия|геап| Егоп| |Ье шяег|е|! яейшепс оЕ Еоге!Вп РЫА апг( ирпгеап| оЕ йе Ьойу оЕ рП! ог рЪ|П1. ЪНЬеи |Ье гесогпЬ~пап| рЬайеп|Ы В же|1 |о |гапяЕопп попяирргеяя!иВ ||гаги| оЕ В сой (е.ц., НВ2151), йе рго|е|п епсо|)е|! Ьу йе Еоге!цп РЫА |епшпа|ея а| йе ап|Ьег со|)оп ап|1 В яесге|е|1 ш|о |Ье си1илге п|е|1шп|. !п |Ье саяе оЕ рЬайеш(йя йа| саггу Егайшепгя оЕ ппшипоц1оЬи!!п Вепея, |Ье яирегпа|ап| ше|!шгп йоги шгйчЫ- иа! яирргеяяог-ш(пия |ганя(оггиапся сап Ье ясгеепег) |ог яо1оЫе ап6Ьо|)у Егацгиепь ъч!ЕЬ сЬе сарасну |о Ь~п|1 апг!Веп (Еог геч!ечг р1еаяе яее ЪЪг!пгег е| а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
