Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 108
Текст из файла (страница 108)
Ноъчечег, Вйчеп йас а пшпЬег от' шсегассюпь 1споъчп со оссш Ьесъчееп Т7 ргосешя чтете пос с1есессет[, апт1 Вйчеп сЬе 1аЬогюиьпеы от' йе Пепега1 арргоасЬ, П Ь пос уес с1еаг йе с1ейгее со ъчЫсЬ сЬЬ Ьгисе-тогсе тпсегассюп яо!ийоп чйП Ье сгапь1асаЫе со огйап[ять от Ьт8Ьег Пепопте сотр1ехйу.
!п ап а1сегпастче арргоасЬ, рготопс-Пас!ие ес а). [1997) тосиьей сЬеп. ейогся оп Ыепйуу!п8 а соитргеЬепяче ьес от" ргосешя шчо1чед ш а гйьсгесе рагс от йе сейи1аг тиасЫпегу, сЬе ьрйсеояопъе. То сЬть епс1, сЬеяе аисЬогя Ьш!с сеп сагйесед Ьа)ся тгот дйсгесе 5асс)татошусея сетелятае ргосешь ипрйсасей ш ргетй)ь)А ярйсш8, еасЬ от" ъчЫсЬ ъчаь шее тот а 1тЬгагу ясгееп.
Ргеуя Ьо1асед ш сЬе ясгеепь ъчеге "гатей'* оп а яса1е сЬас сопяЫегет[ сЬе патге от сЬе сР)ь)А апй сЬе стет)иепсу от [яо!асюп; сЬояе гесетчш8 сЬе Ь!8Ьеьс гас!ийя ъчеге иьей ш тетсетайче ясгеепь со Ьо1асе пеъч ргеуь. Ейпайу, Ьа)ся апй ргеуь счете яуяетпайсайу ехатп!ией тот стоя-шсегассюпь ъч!сЬ!п сЬе соитр1есе Пгоир; а66!с!оиайу, ьет)иепсеь от'ргечюия!у ипс$ейтпей ореп п Ма1!ие, Аггаует! Е!Ьгаг[еь, аот[ Е1Ьгаг!еь о1 ВаИь Ап еаг1у епсгу со сЬе йе!6 от Пепопис апа1уяь тот ичо-ЬуЬгЫ ьшгйея ъчаь йе йсяспрс!оп от !псегасс!оп тастп8 [р!п!еу апд Вгепс 1994). ТЫь Ыеа ехр!ойед йе тасс сЬас уеаяс сопсашш8 рапе1я от" Ьайя ог рапе1я от ргеуя сои!6 Ье тасей ш с$ейтпей 8гиЬ, айоъч!п8 йе гарЫ аяеятпепс от" шсетассюпя Ьесъчееп а ге!айче!у 1агйе пшпЬег от" дейпес$ Ьаиь от" шсегеяс; ЬшсЬегтпоге, Ьесаияе сЬе рапе!ь сои!6 Ье аггаует[ сопчешепс1у ш иисго6сег р!асея, сЬе сесЬпиуие ъчая атпепаЫе со Ьт8Ь-сЬгои8Ьрис апа!уяея оп а яса1е тес[и[сей тот Пепопттс ясигйея.
ТЬЬ Ыеа ечо1чед гарЫ!у шсо йе соппассш8 от" соитр!есе с)7)ъ)А 1тЬгапея шсо роо!ей ьиЬяеся, ъчЬЫЬ епаЫея е!ессгошс Ьапй!ш8 от сЬе дата [е.8., тпс!игйп8 сгасш8 Ьас[с сЬе Ыепстсу от" с1опея йепчей Поит сЬе аггауес1 ЫВЬ-сопср1ехйу поппа1гхес[ Е5Т [Ниа ес а1. 1998) ог ))п!Пеп 1тЬгапея [ъъешег 1998)); айоъчь сйпсйопа! ьиЬсгас6оп от" йе "ргот)ясиоия роястче" с!аяя от' !псегассог тгопс сЬе ПЬгагу; апс1 таей)- сасея сЬе ашоптасет[ Ьапъйшй от" ьатир1ея, ъчЫсЬ яЬо и!6 рготиосе 1агйе-ьса1е ргосеоте апа1уяь [Вис1йо1х ес а!. 1999).
А яесопс) грече!ортепс Ьая Ьееп сЬе ияе от 1тЬгапея от" Ьай ргосешя, ш соп)ипсйоп чйсЬ сЬе ясапдагй ПЬгапея от ргеу. 1п Пепега!, ые от гапйотп!у 8епегасей Ьай ПЬгапея Ьад Ьееи ачоЫей Ьесаые а ЫПЬ регсепсайе от шяегсей с)7)ь)Аь [еясипасес) ас 5 — 10аь) роыемей сЬе тпсппяс аЬП!су со ас6часе сгапяспрйоп, 1еагйп8 со ЫПЬ Ьас[сйгоипй ш сопчепсюпа1 съчо-ЬуЬг!6 ясгеешп8 аяауя.
Ноъчечег, Ьу адар!!п8 арргоасЬ- ея ш ъчЬтсЬ ьисЬ ас6часш8 йзя!опь сои!6 Ье ачоЫей [е.8., р1еаяе яее Вапе1 ес а1. 1996) от росепйайу соипсегяе!ессей тп а ргеясгеепш8 ясер ['ът)т)а! ес а1. 1996а,Ь; Ъъта1Ьоис апй 'ът!Па! 1999), яисЬ 1тЬгапея сои!6 Ье шее !и шсегасйоп псайп8 арргоасЬея оп сЬе 1агйе яса)е йея[гед тот апа1уя!я от" Пепоте-соптр1етйсу 8гоиря от" с0)ъ)Ая [Ртйиге 18-31). 1|суогтаг|оп Ропе|а 18.125 $$ъ)ТЕКАСТЕОЬ$ ТКАР АМ0 КЕЕАТЕО ТЕСНЬ)ОЕОСЕЕа А1|ЬоиаЬ йе уеая пчо-ЬуЬгЫ ауяегп апд |ь 6ег|час|чеа Ьаче с|еаг1у Ьееп Еги)суи1, а пшпЬег оЕ сошр1еп|епсагу сесЬпо1о8(еа Ламе Ьееп Пече1оред.
1п рагски1аг, попсгапасг|р6оп-Ьааеб ауасеша (йасыге|1 Ье1оъч) сьсшпчепс аечега! шсппяс 1ипПасюпа оЕ сЬе ичо-ЬуЬп6 арр|ка6опя шс1исПпд |Ье шаЫ|Пу со |$еа1 еая1у ъчиЬ ае1Е-асс)часога ап|$ ргосеша ехс)идей Егош йе пис1еия Л пигпЬег оЕ сЬеае ауасепь аге а6П |и еаг1у асааеа оЕ еча1иасюп. Опе-Ьу|аг!|$, Оие-апс$-а-Ьа|Е Ну|ау||1, аис$ Оие-Тисо НуЬг|с$ ТЬе съчо-ЬуЬгЫ сесЬпо1оа|еа йаси|ье6 ш сЬе |псго|1исиоп со ргососо! | оЕ йь сЬарсег а|Ыге|ь сЬе шсегассюпа оЕ ргосеша ъчиЬ ргосеша, рерсЫеа, Пгиаа, агЫ К)4А. ТЬе опе-ЬуЬгЫ ауасеш аПоъча сЬе Ыепс|йса6оп оЕ ргосе)иа йас шсегасс ъч(сЬ Еъ)ъ)А. А пшвЬег оЕ агоирч |ибереп6евс1у ПеаспЬе6 сЬе |$ече|оршепс оЕ аисЬ ап арргоасЬ (Ч'Паоп ес а|.
1991; 1л ап6 Нега)соъч|сг 1993; Ч'апа ап6 Кееб 1993; РоъчеП ес а|. 1994; 1поиуе ес а!. 1994; СЬопа ес а1. 1995).!п а аепега1 асгасеау, а $3)ъ)А ае|)вовсе оЕ Ью!о8|са! шсегея (|споъчп со епсои|ра|ь а арес|Пс Ь|псПпц гпо61 Еог а ргосеш) ь с!ос|ее( аа а ясса1е сору ог гпи1|ииег ирасгеаш оЕ герогсег аепеа, яш|1аг со сЬоае иге|1 ш а съчо-ЬуЬгЫ ауасеш (К|гиге 18-32). 5рес|йс ае1ессюп асга|иа аге сЬеп аепегасес1 чбсЬ сЬе Ьшб|сса-аппо|(Е-герогсег |псе8гасес) ог епсо|пра|ье6 |п а р!аяпЫ, ап6 ап ас6ча6опс|огпа|и ПЬгагу е|ьепс|аПу ес(и(ча!епс со |Ьоае паем |п ичо-ЬуЬп6 асгееп|па ь |Ьеп |ьед со Ыепс|(у ргосе|па СЬаС сап 6|и|1 ап|$ асС|ча|е Сгассасг|рг)оп. А)СЬоиКЬ |Ье пее|$ Со сопаггисг арес|йс и|ойпгерогСег Ягаша гпа)сеа |1ече|ор|пепс оЕ асгеепша геа8епса гпоге 1аЬопоия ове-ЬуЬгЫ асгеепа ъчог)с ъчеП |ог а шипЬег оЕ ргосеша.
Кейесс(п8 |Ье Кгоъчшц рори1апсу оЕ |Ьь асгасеау, Ч'о|Е ес а1. (1996) герогсе|1 йе аепегас(оп оЕ а аепеа оЕ герогсег сопасгись йас аПоъч агеасег Пех|Ь|!иу ш сЬе иае оЕ а опе-ЬуЬгЫ арргоасЬ ч6|Ь ПЬгапеа Ьогп еиЬег йе СЛ(4 ог 1.ехА съчо-ЬуЬгЫ ауасешя Л ге1асе|1 арргоасЬ соп|Ь|пеа е!ешепса о(|Ье опе-ЬуЬгЫ апс| съчо-ЬуЬгЫ ауасеша со асгееп Еог $3)ъъАЬ|псПп8 ргосешя ТЬь арргоасЬ, сеппед опе-ап|$-а-Ьа!Е ЬуЬгЫ, |а шсепъ(е6 со |Пепс|(у ргосе(па сЬас Ь|пс| $3)чА оп!у ъчЬеп сошр!ехе|1 аа а ЬесегогПшег ъчПЬ а аесопй 1лоъчп рагспег ог |Ьас ЕаП со Ь|п|1 В)ъ)А аисопогпоиа1у, Ьис ша1|е а асаЫе сегпагу согпр1ех ш сЬе ргеаепсе оЕ ап ассе|ьогу ргосе|п. А герогсег Ь Пгас сопасгиссес) ияпи а Ьесегоб|шег-Ыпб|иа ясе со гПгесс сгапаспрсюп, ап6 ПЬгагу |гас|а(оппас|опа аге сЬеп рег(оппес| ш уеаас ехргеяПп8 |Ье 1|поъчп ЬесегогПшепс рагспег.
ТЬЬ арргоасЬ ъчаа Пгас паем со |6епс|Еу 5АР-1, ъчЫсЬ асьос|асеа ъчиЬ аегшп геаропае Еассог (5КК) со Ьшд йе с-Еш аегиис геаропае е1егпепс (5КЕ) ($3а)соп апс| Тге|япап 1992), ап|$ П Ьаа Ъееп аиссеаа(иПу сье|$ Ъу о|Ьег 8гоира (1(ауа ес а|. 1995). А аошеъчЬас япв!аг арргоасЬ ъчаз |ье6 ш |Ье |$оиЫе шсегассюв асгееп (!3!5). у|15 ъчаа аиссе|ьуиПу иаес) (уи ес а|. 1999) со Ыессс|уу яиш1сапеось|у 0$4А-Ыпб|пц сгапагеаи!асога оЕ)гг аепе ехргеаяосс (ъчЬ|сЬ ъчои16 Ыпб со йе Егг ргохпва! епЬапсег, р1асе6 ирасгеаш оЕ герогсег репса) ап6 соуассога сЬас сПгесс!у |псегасс ъч1сЬ гсг ргосе|п.
ршаПу, 1лю ес а1. (1996) Ьаа ргороаес$ СЬас |п гоше арес|аПгес1 сааеа, |ичо!ч|п8 Ыепбйсабоп оЕ ргосе(па сЬас ЬосЬ Ь|п|$ ВИА ш|$ереп||епс|у ап6 6|свес|ге ъчПЬ а 1|поъчи рагспег, П гпау Ье рго6 иссгче со асгееп Еог Ьой рага|песега яиш1сапеось1у со е1ипшасе Еа1ае рояс|чеа ап6 аепегаПу шсгеаае арес|Псьу оЕ сЬе аяау. 1п сЬь асгасеау, сеппес| опе-съчо ЬуЬгЫ, уеаас ае1ес6оп асса|па аге епа|пеегед со сопсаш опе герогсег с|г|чеп Ьу ЬшгПвд аьеа Еог р53, а аесопд асавдагд герогсег асгаш Еог сЬе съчо-ЬуЬг|6 ауасеш, апъ$ а Ьа|с Есьеб со |Ье р53 Ьошо|Пгпепга6ов аес)вес|се. 5ирегсгапауогша6оп оЕ йь асгаш ъч|й ъч|1йсуре р53 геаи1ь )и яиш1|апеоиа ас6часюп оЕ ЬосЬ герогсегя ргоЫп8 йа| 6|е сопсерс ь ргасскаЫе; и Ьаа пос уес Ьееп Ьгоа|$- |у сеяе6 Ьу ПЬгагу асгееи|па.
5р$$1-$)$|$$$ь|1$п ТЬе иЬн!шбп-Ьааед зрПс-ргосе|сс |епъог (()5Р5) шесЬо|1 Ьаа Ьееп ргороае6 аа а шеапа оЕ аьаушд сгапяепс ргосе|п-ргосеш аыос|асюпа ш геа| сипе, ипсопасга|пе|1 Ьу сопаЫегас|опа оЕ шсгасеПи1аг 1оса||габоп ()оЬпьоп ап|1 ъгагаЬача)су 1994). 1п |ЬЬ асгасеау, а ргосе|п ь Есьеб со а сагЬоху-септипа! Егаасвепс о( иЬ|с|- ш6п, ап|$ а аесоп6 ргосе|п ь Еиае|$ со а ишсасе|$ аивпо-сегпипа! Егаашепс оЕ иЬк!шсш. 11 сЬе съчо се|с ргосеша шсегасс, |Ье аиипо- ап|$ сагЪоху-сегпипа1 Егаашепса оЕ иЫ|!ш6п аге ЪгоиаЬ| |псо ргохипиу, сагцес|и8 сЬе сагЬоху-сеггп|па! 6ьюп ргосеш Еог с1еаъ аае. ТЬЬ деагабас|оп, шоп(сигей Ьу ъчеасегп Ыос апа!у||я сова!|!исса сЬе герогсег Еог йе ауасе|п (|оЬвьоп ап|$)гагзЬача)су 1994; $)иппъча16 ес а!.
$999). ТЫз ауасеш Ьаа пос уес ассаше|$ Ьгоа|$ сье ш йе ас|еп66с сопипипПу, авд шЕоппабоп аЪош 1са регЕоппавсе чбй а чаг|есу оЕ ргосеша ь 1асЫпа. 5оспе Ееасигеа, шс1исПпц сЬе аЬ|П|у со ячьсЬ Ьесъчееп асьауа ш ч|чо ог ш лсго, 1иЕог|иас(оп Раие1ь 18.127 Сбс25. Ваи ргосешь аге ехргеые6 ая |ияопя со а п|уг|яу1асюп (гпетЬгапе-саг8есш8) я8па1, ъчЬегеаь шсегас6п8 рагс пега, е|йег бебпе6 ог сгот а сРНА ПЬгагу, аге ехргеяе6 аь Еияопь со Еоь.
1( 1Ье си о ргосеш сотропепыпсегасс, Еоь и Ьгои8Ьс со сЬе тегпЬ|апе, аПоичп8 паЪ|16у ас |Ье С|1с25 геьсгк6че сеп|регасиге. Еогпе ййки16еь Ьаче Ьееп епсоипсеге6 ъчиЬ сЬЬ сесЬшс)ие, ап6 !п ап ассетрс со очегсоте а пшпЬег оЕ ргоЫегпь сь!п8 ЕК5, сЬе бене!орегь Ьаче !|пргоче6 йе ргосеш гесгшсгпепс ьуьсет, Пея8пасе|1 сЬе Каь гесгшс|пепс яуьсет (КК5), Ьаяе|1 оп |Ье аЬьо1ше гес)и!гетепс йас Каь Ье!оса1|ае|1 со йе р1аяпа |пе|пЬгапе Еог |ь сипс6оп (Вгобег ес а1. 1998). Кая тетЬгапе !оса!ыасюп ап6 ас6чаиоп сап Ье а8аш асЫече6 |ЬгоиПЬ ~шегас6оп Ьепчееп пчо-ЬуЬг!6 ргосе|пя.
Вой йе 5КЕ ап6 ККВ ьуьсеиь Ьаче Ьееп пьес! ебес6че1у Ьой ш 1еясь оЕ 1|поъчп шсегас6опь ап6 1о Во!асе поче! шсегас6п8 рго1ешь (гоп| а ПЬгагу (АгопЬеип ес а!. !997, !998; Вгобег е1 а1. 1998; си ес а1. 1998); сЬеу аге а ргопияп8 а66июп со |Ье ачаПаЫе рапе! оЕ !п1егасИоп аьау ясгаге8!еь. )ъ)оп-ьеаьЕ Тччо-НуЬг16 Вуь1еть Веса|ье оЕ Кь Пепе6с гоЬсьспеь ап6 еаье оЕ |ье, уеаь1 Ьаь Ьееп йе оп8ашяп оЕ сЬоке Еог бече!оргпепс оЕ 1ио-ЬуЬгЫ ьуьсегпь, ап|1 ииП ргоЬаЫу гегпаш ю, )ъ)ечегйе!еья, югпе арр!касюпя, 1огеп|оя агпоп8 сЬет аьау оЕ РЬаппасо1орса1 сотроипбя ъчои16 Ьепебс Егоп| а тапипаПап соипсеграгс со йе уеаяс съчо- ЬуЬгЫ яуьсет, ап|1 а пшпЬег оЕ Вгоирь Ьаче бене!оре6 Ьаяс геа8епь соъчаг6 сЬЬ еп6 (Рап8 ес а1, 1991; уаьана6а е| а1.
1991; Реагоп е1 а1. 1992; Рао е1 а1. 1997). То ипргоче |Ье ьепяичиу оЕ гпаиипаПап пчо- ЬуЬгЫ аьауя, аПоилп8 шсегас6опь Ьесъчееп роо|1у ехргеяе6 ргосешь со Ье 6е1ессе6, а ясгасе8у оЕ "Ьип61ш8" асс|часогя Ьаь Ьееп 6ече!оре6 гесепПу. 1псогрогабоп оЕ а сесгаиктгаа6оп Поспаш (6епче6 Егои| 1ассоье гергеьюг) аПоъче|1 ас6часюп По|паш Еияоп ргосе!пя со Ье ехргеые6 аь попсоча1епс сесгагпегк "Ьип|Пеь," ъчЫсЬ аге я8шбсапс!у июге росепс сЬап ясир!е топо|пепе ассгчасогь ас яи|Паг !ечеь оЕ ехргесьюп ()ъ)асеяап е1 а). 1999). 1п 8епега1, сЬеье ьуьсеиь Ьане ргочеп со Ье |пояс сьеЕи1 |п аьау оЕ шсегасПопь Ьесъчееп рге-6е6пе6 ргосешь. Ко|я ес а1. (1997) Паче гесепс!у |1еяспЬе6 а гпаиипаПап ьсгасе8у и61|аш8 съчо-ЬуЪп6 рппс|р!еь, Ьис ичй а чегу йЕЕегепс геас)оис, шсеп|1е6 со аПоъч аяеьяпепс оЕ йгпепха6оп ш а Ыо1о8)саПу ге1ечапс сопсех1.
ТЬь ьуяе|п ехр!о|ь а РЬепотепоп саПе|1 и-согпр1еи|еп|а6оп, ънЬ|сЬ |чая Ьееп иье|1 Еог тапу уеагь |п рго1|агуосея (е.8., ш 1Ье Ыпе-ъчЬие ье!ес6оп чессогь пьес! Еог с!оп!п8). СеПь сЬа1 Ьеаг е|сЬег йе и (аиипо-сегпипа1) Ега8тепс ог о| (сагЬоху-1еппша!) 6а8гпепс оЕ )3-Па1ассоьк(аье (епсобе|1 Ьу 3' ог 5' с)е!еПопь оЕ сЬе Ьассег1а! !ас2 Пепе, геьресс|че1у) ьЬоъч по епаугпе ас6чПу, Ноъчечег, !Е а сеП ехргеяея а ап6 в Ега8тепся !п со|пЬ~пасюп, йеу сап асьегпЫе со Еопп ап аспче епхуте (!Л1гпапп ес а1.
!967). Еои|е !)- 8а1ассоьйаье пшсапсь сЬас ге6исе йе а1Тшиу оЕ а ап6 я Ега8тепсь Еог еасЬ осЬег ЕаП со гесопь1|сисе ап асс|не епхуи|е; Ьоъчечег, 1Ься сап Ье очегсои|е !( сЬе шсегас6оп ь агс|6с|аПу еп(огсе6. Р|ьюп оЕ шсегас6п8 ргосе|пя со ьпсЬ пошпсегас6п8 и ап|1 я пшсапс Ега8гпепь ргонккя а соо1 Еог епЕогсеи|епс, ап6 йе ()-8а1ассоьЫаяе асспбсу оЕ йе гесопьс(сисе6 епхуи|е ьегнеь аыпеаьиге оЕ ргосеш-ргосеш шсегас6оп (Ком| ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
