Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 107
Текст из файла (страница 107)
ТЬе вувтетп ь рагйси1аг!у шейй тот сРХА юшсе тпатейа1. Р!вр!аует) рготЬлсп оп тпатше рЬа5е рагйс1ев аге ге1еавед Ьу сеП 1уяв. 1п(огтаггоп Рапс!к 18.121 ТЬе кеагсЬ со Ыепб(у а!сегпасгче ксаЕЕо16!глд куксепь йас аПоъч а ргорег кесопбагу ог сег6агу йкр!ау оЕ сопксгашес1 рер1Ыек Ьак шс!ис1ес( йе ике оЕ а Ье!кек (ъбл ес а1. 1989; ВсапсЬс ес а1. 1995; (ъ)ог6 ес а1. 1995), йе С)-кЬсес ксгиссиге оЕ сЬе апсу1оке спЫЬссог сепъ1апиксас (МсСоппеП апс! Нося 1995), сЬе а(псЙпдег ргосесп (Ъйл ес а1. 1989; КеЬаг апс( РаЬо 1994), апд ечеп 1Ье сье оЕ купйе1к киррогск, )споъчп ак "рерсЫек оп ЬеасЬ" (Ыеейе!к ес а!. 1993).
ТЬе гечсеъч Ьу 5гпПЬ апс! Ресгеп1со (1997) ргочЫек а геаюпаЫу согпргеЬепяче 1Ьс оЕ сопксга(пеь) рерсЫе 1лЬгапек. АЕЕ)п!1 Сопнпегс)а! 01ьр!ау 5уьЕегпь апг! К!18 А питЬег оусопппегсса! куксепь аге поъч ачас(аЫс сЬас ргочЫе а чагсесу о( гекоигсек Еог сопксгиссюп, йкр1ау, апс( апа1уяк оЕ рерсЫе ПЬгапеь ияпд куксепь гапд(слд Егогп ЬассепорЬаде 1о уеая со псапппа1сап седа, ТЬеке куксепь аге юпсгпагиес1 (п ТаЫе 18-18. Рп!ем сЬеге Ь а ксгопд кс!еп66с геакоп со сЬооке а тоге сюсепс с!ьр!ау ьуксесп, ч е гесоттепс) ияпд яапйапП 6)агпепсоик РЬаде с1ьр1ау 1сЬгапеь (е.д., сЬоке ко!6 Ьу )сеъч Епд!ап6 Вю!аЬк) 1о ъчог1с оис сопйсюпк сог рапшпд, ксгеешпд, апс! атр1л6сабоп, ТЬе тапиЕассигегк Ьаче ассипш1асес) а Еипь( оЕ ике6л! 1споъч1есде аЬоис сЬеке!сЬгапек апс( Ы11 Ье аЫе со киддекс рокяЫе ко!и6опк 1о гпокс ргоЫетк йас апье.
Вас1ег)ор!саре О!кр!ау оЕ Гоге(еп Рго1е1пк Рогесдп рго1еспк, !Псе рерсЫек, сап Ье йкр1ауес1 ш а Влпссюпа! Еопп оп йе кигуасе оЕ ЕПатепсогь ЬассепорЬаде рагбс1ек Ьу Еияпд сЬе сойпд кеъ)иепсе со депе!11 ог депе ъг!!! (Еог гечсеы, р!саке кее Нося 1993). 1пксг6оп шсо депе Ъ'1!1 Ьак йе ас!чапсаде сЬас 1ЬосьапсЬ оЕ сорсек оЕ 1Ье рго1есп оЕ (псегекс агс ехргепед оп сасЬ Ьас1епорЬаде рагссс!е, Ьис П Ьак йе таг)се6 сПка6чапсаде оЕ р!асшд кечеге сопксгаш1к оп сЬе яхе оЕ сЬе шкегс.
Ноъчечег, !пкегь епсойпд >с! аспшо асЫк По пос Еопп ч!аЫе ЬассепорЛаде раг6с!ек (Сгеепъчоос) ес а1. 1991) ип!еы сЬе ссП ь а1ъо спЕессег! ъч!сЬ а Ье!рег ЬассепорЬаде йас собек Еог ъч !й суре депе ъг!1! Ргосеш (ЪЧППк ес а1. 1993). ТЬЬ гею1ск !п 1Ье рго6ис6осс оЕ РЬепо1уркаду т(хеь) рагск!ек ш ъчЫсЬ оп!у а гпшопсу оЕ сЬе депе ъг!!! соас ргосеш гпо!еси1ек сапу йе Пеягес$ шкегбоп. у де!ес11оп апг1 РппйсаНоп оЕ ВасЕег)ор!ьаеев Мокс оЕ 1Ье ксЬетек со ке1есс Ьас1егюрЬадек ехргекяпд а кресс6с рерсЫе шчоЫе ксгеешпд йе йкр1ау ПЬгагу чбй а сагдес ргосеш ог апосЬег Пдапй а ргосеы 1гпоъчп ак "раптпд." 1п а сурка1 рго1осо1, 1лЬгапек аге ехрокес( очеса(дЬ1 со Ьюсшу!асей ап6Ьос1у ог Пдапй апъ( йеп раппес) Еог а Ееъч пипшек оп р!акис кигЕасек (р1асек ог пппилпоЬеасЬ) ог рагапсадпеск ЬеагЬ соасед ъчПЬ ксгер1ачЫсп (Рагпс1еу апъ) 5тс1Ь 1988).
()пЬоипс( ЬассепорЬадек аге ъчакЬе6 ач ау ш Ьи((ег сопсашшд а Песегдепс ап6 сЬе Ьоипс( ЬассепорЬадек аге йеп гесочеге6 ес1Ьег Ьу е! и1юп ъчПЬ а ЬиЕЕег юсЬ ак 81усше-НС! ЬиЕЕег (РН 2.2) ог ъч(сЬ а спадпебс керага1ог. 1п рппсср!е, П ь рокяЫе со нпргоче йе кресс6сссу оЕ гесочегу Ьу ияпд а ЬиКег сопсаспшд а Пдап6 ог соуассог сЬа1 чиП ргогпосе йгьоссабоп оЕ а рагски1аг суре оЕ ш1егассюп.
Рог ехагпр!е, В1опс)- Е!ди(пй ес а1. (1993) ксгеепес! йкр1ау (сЬгапек Еог ЬассепорЬадек ехргеышд рерсЫек члсЬ ап аЬс!иу со Ъспс! со ап ипгпоЬПпеъ) псапипа!лап сЬарегопе. Т!ле ЬассепорЬадек ч еге е!исе6 Ьу аййпд АТР ъчЫсЬ саикек 6!ккос(асюп оЕ сЬарегопек сгопл 1Ьесг с(спашгеъ1 ргосеш киЬягасск. СвгЬасечег 1Ье тесЬос( оЕ йкюсса6оп, ЬассепорЬадек схргеыспд ЫВЬ-аЕЕсп(су 1сдапсЬ сап Ье ехрессес! со е1 псе псоге к1оъч!у Попс сЬе сагдес ргосеш сЬап сЬоке ехргекяпд ПдапсЬ ос' !оъч аЕЕсп(су. 1!очи чег, йе ргекепсе оЕ "пш16ча!епс" сорсек о(1Ье рерсЫе оп сЬе ЬассепорЬаде кигЕасе Еоксегк йе Еоппасюп оЕ пш(6р!е сопсась Ьесч ееп сЬе ЬассегюрЬаде рагск!е апд йе сагдес ргосеш.
(ъ(еаг1у аП оЕ йеке сопсасск ъчои16 пееь) со Ье Ьго(сеп ас йе капсе сапе сог сЬе ЬассепорЬаде со Ье гесочеге6 сп йе е1иасе. Песочегу оЕ ЬассегюРЬадек сЬас Ьшс! ч4Й ЫВЬ аЕ6шсу псау Ье ЕасППа1ес) Ьу сьшд а "гпопоча!епс" 3 е 3 ог 8 е 8 йкр!ау куяегп (р!саке кее ТаЫе 18-13). 1п ргасс!са! сесть, Ьоъчечег, П Ь ойеп ппрокяЫе со йк6пдшй Ьепчееп ЬассегюрЬадек йас Ьшб со 1Ье сагдес ъч(1Ь йбегепс айшП!ек (Ваггес1 ес а1. 1992; НаъчЫпк е1 а1.
1992). Абег псисга!ыасюп ап6 сопсепсга6оп, йе е!исед ЬассепорЬадек аге депегаду агпр66е6 апъ( раппес) ьечега! пюге шпек. Ререпйпд оп 1Ье 1сдапс(, сЬс ЕоЫ-очегаП еппсЬпсепс айег пчо гоипсЬ оЕ раппшд апс! атр1с6сасюп сап Ье 1Ок ог дгеасег. ЕчепсиаПу, кгпаП рори1а6опк оЕ р!аь) иск ог, ш саке оЕ РЬадегпЫ чессогк, сгапк(оппе6 Ьассспа1 со1ошек сап Ье ксгеепед ъч(й Пдапй еыепс(аду ак ПекспЬсс) Ьу Уоипд ап6 Рачь (1983). 5(пд1е-ксгапъ(еъ( РНА оЕ (пйчЫиа! с1опек оЕ ЬассепорЬадек сап 1Ьеп Ье ргераге6 ап6 кеъ)иепсе6 со с1с1егтспе сЬе апипо асЫ кесрлепсе оЕ сЬе рерсЫе сЬас ЬспсЬ со сЬе ап6Ьос1у ог Пдапй 18.$22 Сйарсег 18: Ргогесп Епгегасбоп Тесйпо1оц|ек А с1оп|пц япе 1осасег3 пеаг сЬе апппо сегпипсь оЕ ц111 ргосе|п Ьая Ьееп ияес$ со ехргея с|ошашк оЕ кечега! шашпсайап яесгесогу ргосешя и41Ьоис сопсргоппяпц шЕесцч1су оЕ йе гесогпЬспапс ЬассепорЬацея.
ТЬе геки!Ппц Еияоп ргосешя геса|п ас 1еая коше оЕ сЬесг опц|па! ЬюсЬеспка1 апс$ епхугпацс ргорегскк. ВассепорЬаце раг6с1ек сЬас гйкр1ау Еияоп ргосешя оп сЬесг кигЕасе сап Ье сарсигег3 Ьу ацдпцу рапшпц ог сЬгогпасоцгарЬу ияпц крессбс Пцапс|к сЬас Ьспг1 со сЬе соцпасе ргосеш мчсЬ ЫцЬ аЕ6ппу. ТЬеке Пцапс|я сап шс1иг$е шЫЬссогя апг| яиЬ«сгасея |п сЬе саяе оЕ г|Ьр1ауег| епхупсея, апс|цеп|с ерьорек ш йе саке оЕ апс|- Ьосйея, апс1 гесерсогя ш сЬе саке оЕ гйкр!ауес1 ро1урерсЫе Пцапг3«.
РНАСЕ О|5РЕАУ ОГ А!«3Т1ВОО!Е5 Гйашепсоик рЬаде рагцс|ек апс$ рЬадеш|с|к сап Ье икес| со с31«р1ау апс|Ьос33ея (сьиайу |и сЬе Еопп оЕ ясГч ог ГаЬ' ЕгацшепЬ). $3 рЬадеш|с|я аге икег3 ак чесСогя, е3СЬег йе Ч -СН1 ог Ч -СЕ сЬа|п 'ь йьег$ Со р10, «чЬегеая сЬе осЬег сЬа|п Ь ехргеккес3 иясЬоис Еияол со рй1. $)к|од ПЬгаг|ея солса|п|пц па3че апс3 яешьупсЬейс деппйпе чапаЫе депе«, ап(1Ьосйек ицй ац|п|с|ек сопсрагаЫе со сЬоке |и а яесопс3агу !шгпипе геяропяе сап Ье цепегасег$ ада!пкс !иге|до апс3 ке33 апс|цепя. ТЬе а36п|су о3 япд|е апйюс3$ея г3$кр1ауес$ оп ЬассегюрЬацея сап Ье 6айег 'апргочег| Ьу гапс$огп гписацепеяай кце-сйгессес| ши1ацепея|к (Сгагп еС а!. 1992; ЪУ.-Р уапц ес а|. 1995), апс| ЕгацшепС ог сЬа|п яЬи(6!од (ВигСоп апс3 ВагЬак 1994; И4псег еС а|.
1994). Гог ап ехсейепс с|еяспрйоп оЕ сЬе согьсплсс|оп апс1 а««ау оЕ ПЬгапек оЕ апйЬосйек |и 61агпепсоия ЬассепорЬацея, р|еаяе яее ВагЬак ег а|. (2001). 1 Пашепсось ЬассепорЬаце сцяр!ау «уясеспк ойег а ро«чегЕЫ шеапя со яе|есс гаге депе« епсосцпц ргосеспк и41Ь Пцапс|-Ыпб|пц ас6пцек. Гог ехашр!е, апццеп-Ьспсцпц ЬассепорЬацек Ьаче Ьееп яе1ессег) Ьу аЕВпссу сЬгошасоцгарЬу Егогп рори|а6опк оЕ ЬассегюрЬаце ехргеяяпц Егацшепся оЕ япц1е-сЬаш Гч апПЬосдек (МсСа|Тегсу ес а1. 1990; УегЬааг ес а1. 1995) апс3 съчо-сЬа|п ГаЬ 1«Ьгапек (Капц ес а1. 1991). ОЕЬег икая оЕсЫ« яуксеш шс1ис|е йе яе1ессюп оЕ чапапь оЕ Ьшпап цгоипЬ Ьогпюпе йас Ьаче а ЬсцЬ аЕ6шсу Еог йе Ыипап цгосчсЬ Ьоппопе гесерсог (Вая ес а1.
1990; Ьосчпсап ес а1. 1991); сЬе аяепсЫу оЕ сопсЬспасопа1 ГаЬ ПЬгапея оп ЬассегюрЬаце яигЕасея (НооцепЬоош ес а|. 1991; Капц ес а1. 1991; Еог гечсечг, р1еаяе кее )оЬпяоп апг| СЫ«сче3! 1993; 3«г|псег ес а1. $994); йе яе!ес6оп оЕ ЬассепорЬацея ехргекяпц росепс шЫЬпогя оЕ е1аксаке (ВоЪегся ес а1. 1992а,Ь); сЬе ке|есиоп оЕ РЕ4А-Ь~ссц|пц ргосешя и ПЬ а1сегег| ярессбсЖея (Еог геье«ч, р1еаке яее СЬоо асяс! К1ид 1995); асяс( сЬе ехргекяоп оЕ а чапесу оЕ Еипссюпайу асдче ргосешя оп йе ЬассегюрЬаце яигЕасе.
ТЬеяе |пс!иг)е аПса!ше рЬоярЬасаяе (МсСаЕЕегсу ес а1. 1991), ВРТ! (ПоЬегск ес а1. 1992а,Ь), сЬе В сЬаш оЕ гкш (5чбпипег ес а|, 1992), сгуркш (Согеу ес а1. 1993), р!аяшпоцеп ас6часог шЫЬссог-1 (Раппе|кое|с ес а1. ! 993; чап Мецег ес а!. 1996), апг$ сйсагу пеигосгорЫс Еассог (5ацц|о ес а1. 1995). !3«3ТЕ31АСТ|О$«3 31Е5С$)Е Ая гйясисьес$ аЬоче, ЬассегюрЬадек 1ас34пд сЬе апапо-сегпйпа! г1оша|п о( р30 аге илаЫе со репе!гасе Г р131 апс1 аге пос |п(есйоия. Нои ечег |псессМсу сап Ье гексогес1 П сЬе догоа|п Ь ге|псгог|исес3 со сЬе рЬаце.
|л |лсегассюп геясие, йе апппо-сегпс|па1 с|оша|п о( р10 Ь йяес1 со а «о!иЫе ргосе|л ъчЬоке с31гпег|хас|оп рагспег Ь Еикес| со сЬе сплпсасес3 рп1 апг3 г33«р1ауег3 оп сЬе кипасе о( сЬе ЬассепорЬаде. ууЬеп |псегасйлц с|паса|па (е.д., |еис!пе сбррегк) оЕ Ьесего|оцоия ргосе|лк аге с!опег1 |псо сЬе си о рагь о( сЬе ц1йр депе, йе геки|с|од йьюп ргосе|пя аге аЫе со аяяоаасе апс1 йегеЬу со гексоге асйч!су со д|йр апс| 3п(есйч|су о( йе ргоцепу ЬассегюРЬаде ($3иейак апг3 ВоггеЬаесЕ 1994; Сгагпаб|гоц ес а!.
1994). $псегассюп геясие Ьая ргошье ая а гпесЬос) со яе!есс с|опек епсогйпц 6лпссюпайу |псегасдпд ргосе|п с|оша!пк (гого с!36!А 3|Ьгапея. 5о Еаг, 61ашепсоия ЬассепорЬаце яуяепь Ьаче Ьееп яиссеый! сЫейу Еог йе сцяр1ау оЕ япац асяс! спос|егасе1у я|хес$ яесгесогу ргосешк — ргеяшпаЫу Ьесасье сЬеке ргосешя сап Ье еЕЕсс|епс!у кесгесес$ сЬгоицЬ сЬе шпег гпепсЬгапе о1 Е, со!1, сап Ео!6 шсо сЬесг соггесс сЬгеекйпсепяопа! ясгиссигея сп сЬе репр1акспк красе, апг$ сап пса|псаш сЬе|г соггесс соп6цигасюп оп йе яигЕасе оЕ сЬе ЬассегюрЬаце рагцс1е абег ехрокиге со ап охсц|лпц епч|гопшепс.
УУЬесЬег ЬассегюрЬаце сдяр1ау сап Ье киссеяуийу аррйес3 со 1агцег шсгасейи1аг ргосешк Ь сЬегеЕоге гасЬег с|оиЬс(и1. Гпуоттат!оп Раие!я 18.123 СЕМОМ!С$ АЯ0 ТНЕ ! ЧТЕКАСТ1О1Ч ТКАР Ас сЬтя рошс ш сЬе ргойгеьь от" сЬе 8епотие рго)есся чаьс срлапсгйеь от" ьес)иепсе т1аса тот Пепея апй ргосетпя Ьаче Ьееп 8епегасей Ап ехсгетие1у Ьт8Ь регсепсайе от сЫя )птоппа6оп соггеьропйь со поче! яеъ)иепсеь, чйсЬ по ачат!аЫе Ыпо аЬоис росепйа1 сейи1аг сйпссюп со Ье 8!еапед Стою рапегпь от Ьоию!ойу. От йе тии1ир1е соляр!етиепсагу арргоасЬея ипс[ег с1ече1орисепс со аьяйп сйпссюп со сЬе Пгеас пшиЬег от ргегйссет! ргосетпя, а яуяегпайс ые от' сЬе съчо-ЬуЬгЫ яуясети со еясаЫЬЬ сйгесс рЬуяса1 шсегасстопя Ьеичееп иоче[ Пепея апъ1 ргечтоийу сЬагассепге<1 ргосешя рготийеь со Ье рагс!си1аг1у ыей!. То йтя епс1, а питЬег от ясгасеййея Ьаче Ьееп йече1орей 1осегас11о А Мар о1 АП Рояь!Ые 1и1егас1!опь 5оте !ичеьс[8асогя Ьаче Ьейип рт1ос рго) есся со ехр1оге сЬе исгйсу отсъчо-ЬуЬг)6 Пепопис апа1уьй, ТЬе 8оа!ь от ьисЬ ассетрся аге сп яотпе саяея птииепье ш ясоре, чйсЬ сЬе оЬ)ессЫе от'яо1чш8 аП рояяЫе ргосеш-ргосеш шсегассюпь тот а 8)чеп 8епотпе.
1п осЬег саяея, а тпоге стгсшпьсг1Ьес1 ьес от' 8оа1ь шчо1че сЬе тпаррш8 от шсегассюпя Ьесъчееп аП ргосешя тчоЪей ш гйясгесе пт16ргосеш соитр!ехея сЬас гейи!асе ярестйс сейи1аг ргосеяея. Тъчо ргипагу рарегь ехетрйту сЬе съчо ьсгасе8!еь. 1п сЬе йгяс, Вагсе! ес а!. [1996) апетпрсей со яоЫе сЬе сотр1есе ргосеш тпсегас6оп песъчог)ья от'тЬе -55 1споъчп ргосешя о! Е. со1т' ЬассепорЬайе Т7, ияп8 а яепея от арргоасЬеь сЬас сотЬ!пей шсегасиоп гпа6п8 апд 1тЬгагу ясгеепш8 от'йейтпей апй гапйот1у Пепегасей Ьай апй ргеу !ыюпя, ТЫь енот! у!е!дей а ъчеа!сЬ от" !итотта6оп аЬоис тпсегассюпь апсоп8 д!йегепс ргосешь, ая ъчеП аь !псегассюпь са)с!п8 р1асе Ьесъчееп яерагасе йота!ия от а яп81е ргосе!п йас пи8Ьс Ье са1теп со Ье ргесйсси е от" Ьотпотиепс шсегасйопь оссигпп8 т)ипп8 ргосеш то!6)п8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
