Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 100
Текст из файла (страница 100)
(аЬе1ед рго(е105 аге ~ !п)ес(ед )п(о (Ле су(ор(ает ас $85 Л)ВЛее( ро)пс пеаг дъе гвс1еиа. Сопчегее)у, ОЛ)А ь !п)ес(ес$ йгесйу )п(о !Ле пис1еия ТЛе пигпЬег о( се)Ы (о Ье )п!ес(ед гний( Ье с$е(еггпгоед епър)пса11у (ог еасЛ ехрепгпепг. К 5108)е сейе аге (о Ье )тацед )п а (нпе соигее, оп1у а (еъч се)15 ъч!11 пеес$(о Ье )п)ес(ес$; Ьоччечег, айоъчапсее тиь1 Ье пъаде (ог ипеиссеае(01 )п)есйопе апд се1$ датаВе ог деа)Л аа а геяи11 о| )п)есйоп.
Адд(й(опа! )чйайег! а15 Се(15 оу (п1еге51 хеедед оп1о 8(аъ54ю((отед се|| си((иге чеьхеВ СЕ()оадег (гре <Еррепдог8 НЕРЕ5 (1 М))НаОН (РН 7,4) Н|8Л~ш игу (е.8., НРЕС-8гаде) Н О (пчеаед ткгоасоре ъи(Л 10х алд 40х а|г оЬ)ес(аеа М|сго|и|ес(ог Нррепдог( тоде| 5248) М|сго)п)ес()оп пеед(ее 8 а пеейе-рнй)пй дгйсе ь ачайаЫе, рий пеед)еь )йаг Лаче ап ореп)пй о( -0.25-игп д)агпегег. ТЛе ореп(пй чапек ъий гйе Яагпепг гегпрегаюге ьейпй апд сап Ье де!егпчпед егпр)под)у ияпй а ьуппйе-орегагед ЬиЬЫе тегег Ьу гпеаъиг)п8 (Ле яг ргемиге гецйгед го ехре! а!г ЬнЬЫеа (гонь )Ле р)репе )пго а )й!нйй Айегпаге)у, Еррепдод ьиррйеь согпгпегс)айу ргодисед гпкго)п)есйоп пеед)еь (Гегпгойр).
Мгсгогпапгри|а(ог Яррепбогу тоде1 5171) Мкгор|ре(ге ЬиЬЫе гпе|ег (С(аг)г Е|ес(готедка| )па(гигпеп(Г) ! Мкгор|ре((гя (Еррепдогй Гетгоир) М(1(ех-СЧ4 (0.22 ргп) 5)'пп8е ЙКгабоп ип|йй М|П|роге ьуип8е Вг)(ег оп|В (0.22 ргп, М|1)ех-СМ4) 5агпр1е (о Ье |п)ес1ег| (р|аьтгд ОНА ог 1аЬе(од рго1е|п) 5иссеъян! т)спяп)есйоп дерепдь оп )Ле рнгйу о(гйе $)Г)А нъед апд оп гйе гегпочй о| а($8гейагеь (гогп рпхе)п ю)и- !~ гюпя ТЛеге|оге, ъче гесогпгпепд Фа! 0НА Ье рипйед Ьу е)ййег г|онЫе сеяъхп сЛ!опде-егЛ)д)игп Ьгогйде йгад)епь (СЛаргег 1, Рго(осо! 10) ог ())айеп юп-ехсйапйе со)оголи (пъкйргер ог гпах)ргер) (СЛаргег $, Ргогосо! 9) апд гйаг Ьогй )Ле 0ЫА апд рюге)п ъо)ийоне Ье 8йегед о| рагйюи)аъе гпаиег ах деясг)Ьед )п 5(ер 2.
(Согюлнед оп йъйсачпй Райн ) Ме1Ьос3 1. Рог р1аяиЫ аагпр1ею с(йн(е 1Ье рис|Елее( 0ЫА |и НРЕС-вегас)е Н О со а сопсеп(га(юп арргорпа(е (ог сйе ехрегниеп(а! с(ее|ел. Рог орйгпа| ехргеааюп онеги)ф|, сй10(е (о 1 РЯлги! ап|3 (ог ехргесяоп айег а (еъч Ьоигь, й!и(е 1о 100 )ъй)гп). 2. То ачоЫ Ыос)лане о(гЬе пъкго)п)есйоп пеесйе, с!еаг 1Ье 0)ъ)А ог рго(е|п ял1ииоп о( рагйси|а(е глас(ег. с(еаспЬел3 |и йъе Ма(ег!а)5 И51 о( Сйе гпа1п рго(осо|). 4 6 Ргогосо! 5: 5(аее 2: Се)3 Ргерагаг(ои Еог РЕ1М-РлслТАпа!улгл 48.89 а. Р1асе а 022ъигп Мййроге ауппае й1(ег ни|1 ч|(Ып а 0.5-пъ! пъ(его(нце сиЬе, апд р|асе (ЫИ (па|де а 1 ергп| иъ!его(ийе (иЬе. Ь. |й(ег 1Ье 0СИА ог рго(е|п 501и(юп Ьу сеп(гй лйа(юп а( гпахнтвгп ареес( (ог 1 инни(е |и а пъ)сгоЫйе.
Аа йп|е аъ 10 и( гпау Ье ййегел) 1ЬЬ чгау. й Ясег нп!1ь аге нпаня|аЫе, с|апйсааоп гпау а|ю Ье рег|оп лег) Ьу сепгпйлйа1юп о( |Ье 0)4А юйюоп аг 25,000е(ог 20 пнин(ея Нуе (ачлг |йе нле о( 0.22ъигп М)(й роге лУппйе Я|ег нп)(л (МИ(ех-СН4) (ог 1Ье|г еаъе о( нле апг) )очл-Рго1е!иЫпЯпй сйагассеплйся Еоай сйе а1а55 пеесйе ч(1Ь 2 и1 о( 1Ье 0Ь)А ог рго1е1п 501 0(юп на)ой ОЕЕ 1оас(ег р|ре((е йра.
АноЫ а |г ЬиЬЫеа (чйсЫп(егплр( апс1 ргенеп( пнсголп)ессюп) Ьу р(ае!пц |Ье епй о( сйе р|ре(се аа с1оае (о сйе пеес(!е орел!пй аа рояйЫе чЬеп 1оас(!пц 1Ье 50101!оп. Я( сйе пеесйе с))гесйу |п(о (Ье Ьо1с|ег ог |Ье инсго|п|есйоп с)ечсе. Асйия 1Ье еесйпца (ог оп|его!п)есйоп. ТЬе орйплЯ Рлеллнге апг( ю|есйоп йгпе леВпу ъчй чагу ъчйй сей |уре апг3 пеесйе г))агпегег; Ьочечег, а гур|са| гапйе ъчвЫ Ье 0 3 лесопг) апд 1 50-400 ЬРа |и|ее| юп ргелялге. А Ьасй ргееанге о( -20 ЬРа Ь пенс)ел) 1о ргечепг (Ье гпег))нил йоль еп(еппй (Ье пеесйе Ьу сарй|агу асбоп.
Сюппй орйгп|сааоп ойп|ес|юп сопй(юпя (лу 1о асЫече !п)есйоп ъчтьоы Ялга ргюп ог' гье )исайи(у о( сье сейн|аг лсплсюге и.е., ъчтьонг ехселяче ргеллнге). |п|есиоп Я Ыеайу Рег(оггпег) оп ап )пчепег) гпкгокоре няпй еййег 40х ог 10х яг оЬ!ессяея А чв ла1 |псйсаиоп о( ехсеейче ргеявге л)нппй пнс|еаг 'а|ссгюп ь ап аррагепг еерагайоп о( 1Ье пнс(енл (гоги |йе гнггонпгйпй сеИЫаг гпа|епа| чяЫе Ьу а Ифли ппй агонпс| (Ье пнс|еия Саггу ои( ли|ее(юп а( гоогп (егпрегаилге |п ь(апг)агс) СО -г)ерепс)еп( дгочсЬ гпел3!ииъ (ог )и(егьа(5 о1 — 10 го|пи(еа (о ачоЫ ас|с |йлса(!оп о1 йъе плес)вгп. 1( рго1опдес) рог!ос)5 о( (п)есТ!оп аге песеааалу, аиЬ511(и(е а СО )пс)ерепс(еп1 илес)!ииъ.
К рго1еа ог аи(!Ьос(у ънаа !п)ессес(, ргосеес) 1о 51ер 7. Я р|аагпЫ 0)ъ)А ънаа !п)ес(ес), |псиЬа1е 1Ье (галя тесТес( се! Я ипдег сйе арргорпа(е сопл)!1!опа (ог 16 — 24 Ьоига 1о айоч 1Ье се! Ь (о ехргеаа йъе рго1елп о1 лп1еге51. ТЬе йгпе йагпе (огехргеллюп Я л)егеггп!пес( егпр|псайу лог |йе ргосе|п нпл)ег ьгнл)у. 1гппъесйа(е|у Ье!оге рег(огиъ!па ап ехрегнпеп1 а1 Сйе пъ(сгоасоре, гер!асе 1Ье си|(иге гпес|впь ъчйй СО- !пс(ерепс)еп( |гпай)пе гпег))ииь (согппъегсла! плес((ниь ог 001ЬессоЯ пъсЫ|глес( Еац1е'ыпес))ипь ас))иа(ес( аа 18.90 СЬаргет !Вг Ргогегл Тпгетасдоп ТесЬло1о81ег СТАСЕ 3: ГИМ-ЕКЕТ МеаыгетепЬ 51айе 3 ргеаепга а Ьаяс р!ап Еог саргпппй а йпогеасепсе 17Еегппе ппай!08 пйсгоасору (РЕ!М) аег!еа оЕ ппайеа па!08 1Ье ппсгоасору аегпр деасг!Ьед !и ГЬе гпггос1псйоп го Й!а ргососо1 (р1еаае аее Йе рапе1 оп АН ЕХРЕК1МЕЫТАЕ 5ЕТГ)Р ЕОК ТКЕМ!)ЕНСУ РОМА1Ы ЕНМ, р.
18.76). ТЬе рго1осо1 аресрйса1!у деасгйЬеа 1Ье дага асг)п!яг!оп Еог ЕСЕР ог Огейоп бгееп аа а допог йпогорЬоге; Ьогчечег, й сап Ье адар!ей 1ог ппайе асг)п!яйоп оЕ огЬег сЬгопюрЬоге ауагегпа Ъу ад)пайпс Йе ехсйагюп гчаче1еп81Ь апс1 й11ег аега (р1еаае аее Таие 18-11). Рог Епг(Ьег десайв оп ппгпппойцогеасепсе ппсгоасору, р1еазе аее Врес1ог е1 а1. (1998, СЬар1ег 102). МАТЕК1АЕБ САГ)Т1ОМ: Р!еаае аее Аррепд)х 72 Еог арргорда1е Ьапд!)пд оЕ та1ег)а1ь тагЬед ан1Й <! >.
прес)а! Ецп1ргпеп1 Атрйугег (ЕМ 403!А ог !пгга-асйоп РА-4) Агйоп 1аьег (СоЬегеп(, 1ппона 70С) <! > Вгоад-Ьапд сйе1есгпс т!ггога (2; К4ентрогг Согрогапоп) РеГес(ога МСР, Напгагпапп С5825 ог Еа н)а)оп Ркоагаг НК ССР, РЬогогпегпса ГЗпапйх гнпЬ Ког)а)с КАР 1400 сЬгр Р!!Кета СРР, 06 ГГ)495ЕР, НГ2510120; СЬгогпа) СТЗ (НЕ!545/30, Г)5651Р, НГ)610175; СЬгогпа) Ьа1К-я1чегег) ппггог (Хе)аа) Нехиге т!ггог тоип(5 Г2), Гела Ьо)дега Г2), рогя (5), апг1 рог( Ьо(дега Г5) ГК4егнрогй Гпнеггед тгсгоасоре (2е!55 735Т)т) 1РГаЬ 5ресггит (5!Впа! Апа)удела) 1г(5 д!арЬгайт (Сотаг) Еелаеа (72 апд 7.6 ст Коса! !ел87Ь, 2.5 алд 3.8 сгп Коса) Гелдй, геаресг!не!у; Нентрогг) Мегсигу агс 1атр (700 Ит 7е!55! НВО 700 АйоАгс) Ми)дтоде ВЬег пер-гпдехед 7-тт соте (14ентрог() Ой оЬ!есдне (700х)7.4 ХА! Ле!55 Р!иаг) Орйса) ЬгеадЬоагд (2 х 7 т; ТМО Рогнег гпегег апд Ьеад (ОрЬгг, Хина Р!Зр)ау алд 2А-5Н) Роннег РС (МастгоьЫ егГи!рред на(Ь РСГ-СР)В сагд (К4а((опа) )лаКгигпелга) 5Ьийег (ЫВЬ-ареед, )т!осел( Аааос!аГея Г)пГЫ!Гг )7525) 5Ьиггег дпнег Ггт!поел! Аааос!агент, ()л(Ы(я Р722) 5гапсйп8 и ане асоияо-оргтс тот!и(агог (АОМ) (!пгга-асдоп, 80 МНг) Тано-Кгес)иепсу ьупйеяаега ГГЕК 2023) Маг!аЫе делягу Кйгег и Ьее! (1ааег Сотропепга) ЯаГег с!гси!аГ!л8 соо1ег (Сгалй Се!15 апг1 Т155пе5 Се1!5 йене ог К!хед) екргеаа!п8 Йе ргоЬе ргогеть, ргерагед аа деасг!Ьед т 5(айе 2 18.92 СЬартег 18: Ртотетп /птегасбоп ТесЬпо1о81ек Ь.
Та1те а япа!е ппа8е оуйе а1шпшшп Еот1 чч)тЬ ап ехрокиге типе оЕ-100 тпкес. ТЬтк ипате Ек та1сеп то ке1ест ап ВО! апт1 то Ваиае тЬе !Все!у ехрокиге тппе гет)штеп. Весаике йе РЬаке оЕ тЬе тпактег Егет)иепсу куптЬеяхег шау пот Ъе ат а тпахипшп, апй то ачо)й катига6оп оЕ 1Ье йесестог, ке1есс ап ехрокиге типе йас Вепегатек -1000 соипгя с. Кесогй а сус1е оЕ 16 РЬаке 1ша8ек, еасЬ керагатей Ьу 22.5, Ететегш)пе йе РЬаке кет Впд ат тчЬ)сЬ тпахипшп штепяту 1к геасЬед ш йе ипа8е кеПек. арекет 1Ь)к РЬаке то лего де8геек оп тЬе шактег Ьет)иепсу куптЬеягег. й Кесогй апотЬег сус1е оЕ 16 РЬаке Ешацек Егош 1Ье Еоб то ьаче ак а кето Ие6тпе геуегепсе. ЪЧЬ11е ретЕопшпц Ьуеигпе ипа81п8, тче гесопипепй тЬат РЬаье ьтаЬт1пу Ье птоппотей очет птпе. 1п оит ьешр, тЬе РЬаье 1ь ьтаЫе ейтЫп ОЗ' йиттпа а репой оЕ 1 Ьоит.
Рот оит ьет-ир, а теЕетепсе Еой ье9иепсе 1ь тесотйей апй качей еасЬ Ьоит. 8. Век!иге тЬе тпс64епс ехсЬа6оп коигсе со а шахипшп Еияпц 1Ье чаПаЫе йепяту 611ег тчЬее1); 1Ье куктетп 1к поти геаду Еог 1Ье аст)шят)оп оЕ се11 1ша81п8 дата. 9. Аст)и)ге а т1опог ппаее ияп8 1Ье СРР Ятег кес ЕЕткЬгок: Е)495ЕР, еш)кк)оп: НЕ)510/20). 5е1ест ап ехрокиге типе ятсЬ тЬат 759о оЕ тЬе с1упаппс тапа оЕ тЬе ССЕЗ (3000 соиптк Еог а 12-ЬЬ ССЕт) 1к 611ей. 5е1ест а геа)оп оЕ 1птегект тп тЬе 1шаае оп ъчЫсЬ то тпеаялге 6иогексепсе Ие6шек. ! О.
Сгеате а йопог 6иогексепсе Ие6тпе шар: а. Та)се ттчо сопт18иоик кеПек оЕ 16 РЬаке-йерепдепс 1ша8ек (45ч РЬаке-ктерред), опе Еогтчатй апй опе течетье сус1е то соггесс Еог РЬотоЫеасЫп8. Орт)ш)ге тЬе кет ехрокиге типе Еог еасЬ РЬаке !шаде ак 1п 5тер 9. Ь. Та)те ап айййюпа! Еша8е тп йе аЬкепсе оЕ кашр1е 16ипипа6оп. ТЬ)к Ьас)т8гоипй ойкет ппа8е гк киЪсгастет1 Егош а!1 РЬаке ипа8ек ш тЬе кеПек. ЕасЬ оЕ 1Ье ратгк оЕ ет)и)на)епт РЬаке ппа8ек оЕ йе Еогччагй апд гечегке сус1ек аге тЬеп кшшпед то 6тгкт-огдег то соггесс Еог ЫеасЬ)па оЕ йе йопог. с.
Ргош йеке дата апд 1Ье гего Иетипе геЕегепсе (Ео)1), са1си1асе а т)опог 6иогексепсе Иейпе тпар ак йексПЬес1 тп йе й)ксикяоп оп !шахе Ргосекк)па ш йе рготосо1 штгойк6оп. 11. Кесогй ап ипаае оЕ йе ассертог, апд тЬеп РЬотоЫеасЬ тЬе ассертог Ъу сЬап81пц то тЬе 100- 'чч' шегсигу агс 1ашр (Хе)кк Аттоагс) ак а коигсе оЕ 6)иш)патюп. Моче йе СуЗ 61тег кес Еехс)- 1а6оп: НО545/30, сбсЬгок: О565ЕР, епикяоп: НО610/75 сЬготпа) тпто йе йетес6оп ратЬ. Та1те ап ппаае оЕ тЬе ассерсог Ъу ортпп)т)п8 тЬе ехрокиге типе Со оссиру тЬе ЬтБ с1упаппс гап8е оЕ йе СС)З. С1оке йе детестог рог! апт1 т11шшпате тЬе ассертог ип61 1Ьеге Ек по й)ксегшЫе СуЗ 6иогексепсе. А 1МРОтттА!ьте ъчЬеп рет/осот!па ассерсот рЬотоЫеасЫп8 ехрептпептк, 1т гк стис1а1 то ектаЫ1кЬ тЬас тЬете 1к по Яиогеьсепсе !топь йе рЬотортойист оЕ тЬе рЬосоЫеасЬей ассертог 1и йе т)опог сЬаппе1, Ргогосо! 5: Егаее ьЬ РЕ1М-РВЕТ Меаьигетеп(ь 18.93 ФИИ-'.и ЙЙИ и ИЙИи ИИИи Иййи Е!С~()КЕ 18-20 ГИМ Ехре|дп|еп( оп Е(че СеПь Моп!1ог(пП 1Ье Ас1|ча1юп 51а(иь о( РКСа (о! (очг!пд РМА Тгеа(гпеп( СО5-7 сеПь 1гапйесгед |М1Ь допог ЕОГР-РКСа |неге ппсго(п)ес1ед чч(1Ь ассер1ог ап((Ьод(еь, Т(р)250- СуЗ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
