Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 97
Текст из файла (страница 97)
Е|ииге 18-18 В а исЬеглабс о1 а и(пи(е-(гессиепсу ГПМ сопййлгабоп, ТЬе |пьпипепС 'ь Ьаюд оп а чЬга- ! бопайу )ио)асад, |пчегсед пс|сгоисоре (е.и., Ле)|ь Ахюнегс 135 ТН). ТЬе Ьаи)с 3|фс юигсе гегригеп|епс ь ап агйоп )аиег ън|бс иийсс(епс оисрис роъчег (ь100 пс(А| рег Ипе). ТЬе 457лкппс, 488.0-ппс, апд 514.5-пгп !|иль аге |деа! 1ог ехсйас)оп о1 сйе СЕР чапапь, ЕСГР ЕСГР апд ЕНГР геирессве|у. ТЬе оисрЫ о1 сбь 3|фс иоигсе В и|пиьойайу п|оди|асед Ьу сйе 5НН-АОМ Оп(та-Ас(юп Согр. Ве|чоод).
А липипа! хесе тес|атее а впц|е 5ъН-АОМ гМ(Ь а сеп(га! геиопапс 1гес|иепсу ас 80 МНк (орбгпа! 1ог СЕР Ииогеисепсе И(ес|пъеи -2 пиес). Ап |гь д)арЬгаи|п р|асед -1.5 |песегз |топс сйе 5(Н-АОМ )ылюд ие)асане)у со Во|асе сйе сепсга! (лего-огдег) гпо|йл|асед Ьеа|п 1гопь сЬе Ь|фег-огдег дИгагсед Ьеаль. То пс)п|пбхе сйеппа! рЬаие дпй, сЛе 5Ч/-АОМ В | соир|ес3 со а (Ьеппоисас)с ъчасег Ьа(Ыагси|асог, апд сЬе гп|сгоисору гоогп 'ь сел|реги(иге-исаЬ|йаед. тЫи | )сеери сйе 5%-АОМ со чи|сЫп 60.1'С о1 а иес сегпрегас|лге сЬас В сьепиа! 1ог рЬаие соЬегепсе Ьесч|ееп сйе Ииогеисепс яцпа! апд сйе гподи|асед ца)п о1 б|е с|есессог. ТЬе плоди)асед сепсга! Ифс Ьеап| ь сЬеп дйессед |псо а 1.5-п|есег одер |пс3ех И Пса ИЬег чи|сЬ а 1-лип соте апд пил|енса! арег(иге о( 037 (ТесЬп|са! НИео Есд) ) ии)пй а 12-сп| (оса! !епйсЬ )епи.
ТЬе соЬегепсе о1 сЬе |йьег Ифс ь дьгирсед Ьу ч(Ьгас)пц сйе Яэег ас |тес|леле(еи о1 -100 Нь геюЫпй |п а гапдогп|у плон)пи иресИе|3 |Пити|пасюп о1 сйе ирис|отел, и ЫсЬ (и (псейгасед диг(пи десессюп. КоеЫег И|ил||пабоп ас сЬе иагпр|е р|апе В асЫечед Ьу )псогрогас)пд ап асЬгол|абс (епи (7.6-сгп 1оса| )епй(Ь) )иис Ье1оге сйе ерй Пили пабоп рог( о1 сЬе гп|сгсьсоре со со||ее( апд сой |плате сЬе |гьег Иф1. ТЫ и соса( )епйсЬ 'ь ии(йс(епс 1ог (Ье ИЬег соге со арреаг аъ а ро|пс юигсе, сйии В)ч)пи а со3|ипасес| Ьеап| гиии)с)пй |п Иас |Пипипасюп в сйе иап|р|е р3апе. А 100-(4) п|егсигу агс |ал|р (7е(|ь НВО 100 НН)2) абасЬед со бсе иесопд ерййип||пасюп рог| ргочдеь ап айегпа(е Иипипабоп юигсе.
А го!а()пй лиггог (асй)сасеи гарИ ычссЫпи Ьелчееп сЬе 3|ьег алд сйе |агп р. ТЬе |йьег |Пи|п|пабоп ылиед 1ог долог йиогеисепсе Иес|гпе ||паапа. и Ьегеаи сйе 3агпр В ииед 1ог |исаи)пи алд ЫеасЬ|пц сйе ассер1ог. А (агйе рагс о1 сЬе лбсгоисоре 'ь епс)оиед чи|сЫп а реги рех сйелпоисаск сЬал|Ьег Ьеасес| со 37'С со 1ас||йасе |Ые сей ехреп п|епби Е пс |ли)пи лъоис о( сЬе гп|сгоисоре |п СЬВ сЬагпЬег ейпс)па(ее сел|риса(иге Вгад(епси Ье(ч|ееп сЬе лмсгоисоре соллропепси ВисЬ аи оЬ|ес- С)нее) алд 1Ье иагпр!е. ТЬе ргоч(и(оп о1 а СО, юигсе со сЬе сЬапъЬег В орбопа|. ТЬе ТН рог| Исиасед сйгесс|у Ье|оьч сЬе иагп- | р|е апд оЬ)еа)нее В сьес| 1ог соирйпй сйе с|есессог, (Ьии ргочсд)пц сЬе иЬогСеис гоисе 1ог йиогеисепсе ел|ьяоп ъч(Ь пб попа3 |о|ьеи. ПВЬс 1гоп| сйе иалър)е 'ь )пъацед опсо сЛе р|юсосасЬоде о( а Ыфдгесрлепсу-л|осйл|асед |исайе (осели(йег Ьеад (Нагпал|асю С5825 ог СаМяоп Исоисаг НК).
ТЫи с|ечсе ииеи ргох|пс|су 1осии- | )пй о1 рЬо(ое)еагопи е)ес|е|1 (гоги б|е рЬоСосабйос|е оп(о Сйе 1асе о1 а и||его-сЬаппе3 р|а(е (МСР). ТЬе е|ес- | стоп |гпайе ас сбе оисрис о( сЬе МСР исгйсеи а рЬоирЬог исгееп со цепегасе ап |псепййес| 3|фс |исайе. Гог Ьоп|одупе десесбоп, сЬе ейес|Ые Ва)п о( сЬе |исайе (осели!1(ег ь гпо|йл|асес| ас а |те||иепсу е||иа| со сйас о1 СЬе 5(Н-АОМ (80 МНх) Ьу СЬе арр|3сабоп о1 а Ыльед ягвю|с|а| чойаие Со СЬе рЬо(осабъоде. ТЬе ап|р|Иес|, рЬже-(ос)сед оисриь 1гопс Ь|фдгесрлепсу иупсЬейхеги (2023 Магсоп|) ргоч||е Ыф|у исаЫе и)пию(да) чо|с- / аде или гсеи (ог |по|Ил)ас)пй ЬосЬ сЬе ехасасюп йе|д ча сйе 5ЪНАОМ апс| сЬе йа)п о1 сЬе ||паде |псепяйег ил|с.
С)йпй а се)еисор)с )епи ч(сЬ а л|айпИсабоп о1 0.5, сЬе ап|рййед )исайе ас сЬе рЬоирЬог исгееп о1 сЬе МСР В рго|ес(ег| оп(о СЬе сЫр о1 а ис)епс)Е|с-цгаде ССО сал|ега (Оиапбх, РЬосогпеспси). Майпйсабоп о1 О 5 псассЬ- еи СЬе (ий юг(асе агеа о( Сйе ССО сЫр Со СЬаС о( Сйе рЬоирбог оп Сйе МСР ТЬе 12-ЫС ССО са|пега Ьоиьеи ' а Кос|а|с КАГ1 400 сЫР ъчсЬ а 1317 х 1035 аггау о1 6.8-иль иссиаге р|хе36 Тур|сайу, бчо-Ьу-Ьчо Ь!пп)пи В арр||ед диг)пй |псаие асс|и)и)с)оп оп (Ье ССО |п огдег со ассоп|гподасе сЬе |оч|ег гею|исюп (12 )рггпгл) о1 СЬе МСР А рЬаю-дерепдепс и)ипа) ас еасЬ р|хе! о( |Ье |исайе В асЫенед Ьу иес(иепс)айу рЬаие исерр)пи сЬе иа)п иоигсе апс! гесогд)пй а иепеи о( |птацеи СЬгоифои( ап епбге сус|е (Π— 360'). Еоипег апа)уи)и 'ь аррйед со еасЬ р|хе! |п сЬе ипаие иессиепсе |п огс|ег со оЬббп сйе рЬаие ап|3 плот|и|а| Сюп |гпайей 1гогп ънЫсЬ Сйе йиогеисепсе Ие|ипеи аге са)си(а(ед.
Тур|са||у, 16 РЬаие-дерепдепС |исакии о1 -300 х 300 р|хе|и аге асс)и)гед |п а ГПМ иессиепсе. (Ч(Ь а п|ах|п|а3 геадоис гасе о1 5 Мр)хе)и и ', еасЬ рбаие||ереп||епс )исайе сап Ье геас3 |п -20 пьес. РЬосоЫеасЫой В гп)п|гп|гед Ьу (Пиит)пас)пй (Ье иаглр)е оп|у диг(пц |исайе асг)и(и)с)оп.
ТЫи ь асЫечес| ъч|ЬЬ ап ехсегпа| ЫВЬ-иреед ибибег (ПН)ВПТЛ Н525 апс| 0122 ийиссег апд дгЫег, Н|псепс Аииос)асеи) |осасед Ьебчееп сйе ййег Ыос|с ап|3 сЬе ерй|3илипабоп рог| о1 сйе писгоисоре. 5упсЬгопоии сг|ййеппй о1 (Ье ийиссег В сопсго||ед ъч|сЬ а Вр|С оисрис оп сйе ССО, (пд)сас)пи иЬибег исасии. ТЬе рЬаие иесбпй о1 (Ье 1гес|иепсу иупсбсь)аег плоди)ас)пй сЬе |исайе |псегьйег Ва)п 'ь ргесье|у исерред ча согпгпапди иеп( очег а СР|В |псег1асе Ьоииед |л а РС. ТЬе |псогрогабоп о1 елдепыбопи |псо 1Р(аЬ 5рессплгп (5сапа)убси |пс.) (ог рЬаю-исерр(пй сои(го| апд доъчп|оасйпй 3|паиеи 1гоп| сйе ССО ргоч)деи сЬе иойъчаге |псег|асе 1ог сйе со3|ессюп о( Н.|М ||ага.
Ргогосо! 5; Ргойгп8 Ргогегп Ъгегасггоие Пте СРР апс! Р!иогеясеисе Яееопаисе Епе>уу Т~апфег 18.77 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ! с о гор и!ег Е1С1!ЙЕ 18-18 $с!!е!па11с о1 а Яп !е4ге оепс ШМ Соей ога11оп Еее 1ех1 1ог г!е1а11п !8.80 СЛаргет !8: Ргосет ЕпсегасВоп ТесЛпо(оВсея СТАСЕ 1: ЕаЬе!1Щ Рго1е1пВ читп Г!иогеВсеп1 ОУеВ ТЬе Вгяс ясаВе оЕ йся ргососо) с)еяст)Ьея йе ргерагапоп оЕ )аЬе1ес) сопсропепь (ияиаПу ап6- Ъойея ог осЬег ргосешя) йас шау Ье шсгойкес1 сп1о йе се11я оЕ шсегеяс си Вса8е 2. РаЬ Ета8- шепь (ЕЕ сЬеу ате тес)и!тес)) пшзс Ье ргос(нсес) ЬеЕоте сЬе Е)иосеясепсе 1аЬе1сп8, ая с)езст)Ьес) !и Всеря 1-7. РаЬ ЕтаВшепся аге ргеЕеггес1 Еог РВЕТ ехрепгиепь ш 1сче се1Ь !и огс)ег со ртечепс росепоа1 сгояя-1!п)сспВ оЕ аи68еп Ъу !исае! апНЬойея. АЫюиВЬ сЬь ртосес(иге гиау Ъе изей со ргераге РаЪ Егарпепся Егоги пюяс сурея оЕ аппЪойея, йе ехашр1е 81чеи Ьеге с)еясг)Ьея сопйсюпз Еот ртерат!08 раЬ ЕгаВшепся оЕ йе ро1ус1опа1 рЬоярЬо-ТЬг-250 апссЪос)у (Т(р]250). ТЬе яесопс) яес)иепсе оЕ перс (10-16) с1еяспЬез 1аЬе1!пц сЬе апипо Вгоиря оЕ сЬеяе Ега8исепсз от осЬег рппйес1 ргосешя чч!1Ь Е)иогеясепс яи)Ео!ис)осуап!ие (Су) с)уея.
1Е апс!Ьоа!ея ог ргосешя аге со Ье 1аЪе1ес) йгесс1у, опис Всеря 1-7 апс) ргосеес) со Втер 8. 1Е сЬе ргоЪе сошропепь аге епсос!ес( ш а р!аяиЫ РХА, ргосеес) йгесс1у со ВсаВе 2. МАТЕК1АЕ5 САНТ!О)с(: Р1еаяе яее Аррепйх 12 Еог арргориа1е Ьапс)1!08 оЕ тагес!а)я тагПед сч!СЬ <!>. ВоЕЕегВ апс! йо1оЕ1опВ Р1еаяе яее Аррепйх ! Еог сот ропеп(я оЕ я(осП яо)иС!опя, ЬиЕЕегя, апс) геаВеп(я.
Р!101е я(ос!с яо101юпя Со йе арргорпаСе сопсеп1гаоопя. В)сте (О. С м, рН 7.5) асЕ)иягес) счсСЛ НаОН Вссте (7 м, рН 9.0 — 9.5) асЕ)иясесЕ счссЛ НаОН ОЕВеяг(оп Ьийег 20 шМ Ыа-рЬозрЬаге 1О псМ ЕРТА 20 шм суясеспе/НС! ЪнЕЕег (рН 7.0) Н,Ы-О(тесЛу)Еостат(с(е (ОМЕ) (! > РМР Ь с1иес1 счссЬ сЬе асЫЬюп ос -С/3 чо!шпе ос Ьухгозсор!с геяп со сЬе ясогахе чеяе1. Рог ехапср1е, Аб 501-ХП шсхес) Ьес! геяп ((гоги Вю-Паа) сап Ье р!асес) реипапепс1у ш сЬе ясос1с Г)Мр Ьосс!е. 1ЕсЬеге В апу с!о нЬс ая со йе !псе8гпу оЕ сЬе РМГ, ессЬег асЫ Енгйег )теяЬ геяп ог гер!асс часЬ !теяЬ геяп. ТЬЬ сяне Ь а сопяЫегасюп яЬон!П ргоЫегпя 1се епсонпсегес) 1аЬе!сп8 ргосешя со а с)еясгес) тасю.
ТЬе ргеяепсе оЕ Н,О сп сЬе 1аЬе1ш8 геаспоп (росеппаПу Сгопс сЬе РМР) шсП сопсресе Сот сЬе Егее с)уе. На-рЛоярЛа(е (20 тм) сий 10 тм ЕОТА (рН 7.0) РЛоярЛаге-Ьийегес( яа)те (РВ5) ТЕ (рН 7.0) ЕпгугпеВ апс1 ВРЕЕегВ Рарасп ЕттоЬсйтесЕ Со аВагояе Ьеас(я (507й я)иггу т йВеяВоп Ьийег; 5(8та) ЕаЬе1ес1 Соспрооп(15 СуЗ апсЕ Су5 О5и топо(ипсйопа! яи)Ео(пс)осуаиспе яисс(истсс(е еяСеся (АтегяЛат) ВнссшспсЫе еясегя ос ян!Ео!пс)осуапспе (Су) с1уея соча1епс!у Ь!пс) со Егее апнпо Вгонря (йе а-апнпо сегпппас ог с-зиппо Пгонря оп !уяпе ъЫе сЬаспя). Су с)уез аге ргочсаес( аз 1уору01сгеа яапср!ез йас пшяс Ье гпа!пса1пес) ш а с)ея!ссасес) еппгоппсепс ас аП Ппсея со ргечепс геассюп сч!сЬ Н,О, ТЬе аспонпс о(с)уе сп еасЬ Ыа! пшяс Ье спйчЫнаПу цнаппсасес1 ая сЬеге сап Ье чагса Вот Ъепчееп ЬассЬея.
!и сЬе ехапср1е Псчеп Ьеге, сЬе янссшспсЫе еясег оЕ Огецоп Огееп (Мо!есн1аг ргоЬез) ы шед со !аЬе! сЬе МС5 РКСа апПЬос)у. Ргогого! 5: 5саее 1: Еабе!!ле Ргоге)ля |и!ЕЬ Р!иогегселг Е)уез 18.81 Апе!Ьос!!е5 Ригсоед алг)Ьог!у хисЬ ах МС5, л|олос!ола! ог Т250, ро)ус)ола! ог ргосе)л со Ье !аЬе!ес! ТЬе !аЪе1!пе геас|юп пша| Ье регсогше|Е ш а Ьийег |гее оЕ а|п|пе егоирс Мацу сошп|ек|а1 апс!Ъог)у ргерашдо|ь аге ргочЫег! иа|Ь хгаЪ|1!х)пе асепыЬа| соп|аш Егее апппо аспирин 1|шсЬ ая Ьойпе сегал| а!Ьипип ог Ве!апп) и|16сЬ ~с!!1 со|пре|е Еог |Ье Су |)уе. А пшпЬег оЕ сарр!!его ргозЫе |Ье аппЬо|!у ргерагаг!ппс |тес ос |Ьеке со|проипй ироп гег)иехг; |и |Ь!х сахе, гег)иеи |Ьа| |Ьеу аге ргоч!це|Е а| 1 шегш! !и РЬозрЬаге-ЪиЕЕегег) са!ше. Се!5 505-ро!уасгу!ат!де Ве! < ! > Рог ргерагаиоп оЕ 5Р5-ро!уасгу1агпЫе ее!я |ог геяо1идоп оЕ рго|ешъ р!еахе атее Аррепйх 8.
прес!а! Ес!и!рспеп1 Селслсол солселсгасолЪ УМ70, УМЗО, алд УМ700 Е70-, 30-, алс! 700-)сО то!еси!аг-таха сис- оЕЕ, гехресСЕУе!у; Агл)сол) Се! Е!!!гас)олуяхе ехс!исдол сЬготасо8гарЬу со!итлх Ергерас)сед Есоло-Рас 70РС д)ярохаЫе; В)о-77ас0 Ргогет А-5ерЬагохе со!игла ЕЕсоло-Рас 2-т! со!итл Егот В!о-Кад) Е|)ш!|Ъгасе |Ье со1шпп Ьу |чазуппд |г!ЕЬ 20 Ъег) хо!шпек оЕ 20 гпы Ъ)а-РЬохрЬасе. Рго|е|п С ь гесогпшепг)ег) Еог риг)Еу)па гпо|ье ап||Ьойес Е)У)иаЕЫе аЬгогрдол хрессгорЬоготегег Ас!Й6опа! Кеа~епЬ 5сер 7 оЕ ЕЬЕх ргогосо! гедйгех сае геа8елп Еог десегт7лЕл8 ргосе|л солселсгадол Ее.8., ВгадЕогд аххау геа8елсз) Е5ресгог ес а!.
7998, СЬаргег 56). МЕТНО0 Сепега6оп апс! Рог!Е!сабоп оЕ ГаЬ Ггарпеп15 1. Сопсепсгаге ТЬе апс)Ьод!еа со 15 — 20 шВ!ш! ш 20 шМ Ха-рЬохрЬаге, 10 гпМ ЕЕ)ТА ЕрН 7.0), Ьу сепгг)Ец8ас!оп ца!пц а д!арохаЫе сопсепсгасог я|сЬ аа а Сепспсоп УМ100. 2. То 250 р1 оЕЕЬе сопсепсгасед апс!Ьоду ргерагапоп Е-4 — 5 ш8), адд 500 р1 оЕ д!Веасюп Ьцйег апд 500 р1 оЕ а 50|Уп а1цггу (!п й8еаПоп Ьцйег) оЕ рараш ппшоЬ|1птед оп а8агояе ЬеасЬ. А1!осе ЕЬе й8есйоп со ргосеед Еог 6 — 10 Ьоцга ас 37'С |У)ЕЬ аЬа)с!п8 (300-400 гргп 1п а аЬа)сЕп8 шсцЬасог).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
