Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (522944), страница 93
Текст из файла (страница 93)
ТЬця П )а а1ъчауа ргеЕегаЫе то с)ешопатгате йе шсегасбоп оГ йе ти о рготешь ън!1Ь)п тЬе)г паттче цптгапаЕесте6 сеПя ТЬе цае о! соцппшпоргес)РПацоп то хеагсЬ Еог поче1 рготешь йат штегаст ълй а )ъпоънп ргосе)п та а роъчегЕц! ъчау то Ыепт)Гу РЬуяо1о8)са! )птегастюпя ъч)тЬ)п тЬе )птаст сеП. ТЬе гпа)ог 6)забчапта8еь оГ тЬе шейот1, Ьоъчечег, аге тЬат Ь )а те1а6че1у )аЬогюця типе-сопацш)п8, оГтеп гет)ц)гея а чету 1аг8е пшпЬег оГ сц1тшет1 сеПя ап6 шау пот с1етесс 1ои -аГЕтп)ту апд тгапяепс ртотетп-рготеш шсегасбопя Могеочег, соцппшпоргестрца6оп оп!у ъчог)сь ънтй рготе)пх йат рег- 1В.бО Ргогосо!4: Гг)ептфсог|оп оЕАяос1огес! Рштетт Ьу Сорптипоргес|р(тот)оп 18.61 |усе сета апс епппнпоргес~рпаге рго|е|п Х острых 3 Сотр)ех 2 Совр)ех 1 Р!Сс)КЕ 18-14 Риис| 1е апг! Р1(Еа!!е оЕ Оетест)оп оЕ Рготе1пь Ь Со)шшцпо тес)р!(ат)оп |п (Ье )п(аст сеП, рготев Х )а ргеаепг | и а сагир| ех ил(Ь рготе|п Х ТЬ)а со гор|ех (е ргееегчег( а(тег сеП |уяе апс) аПоиа ргоге)п г го Ье со|гоп юпоргес)р)гатег) уч)(Ь ргоге!и Х (Согпр|ех 1).
Ноучечег (Ье д)егор(!оп о( юЬсеПц|аг согпрагтгпепса|сеаПоп соцЫ аПои агЬЕастна| )птегастюпе (о оссцг Ьетучееп ьогпе рго(е|пя Еог ехагпр1е, рготею Х апг| рготе|п В (Согпр|ех 2). ! циЬеггпоге, (Ье апт!Ьог(у )Ьат )е цаед Еог йе 'пгнпцпоргес)р)(аг)оп гпау сгояргеасг попереайсаПу и ПЬ ойег рготе|пя Еог ехагпр|е, ргоге|п А (Согпр|ех 3). ТЬе |сеу то Ыеп()Пса()оп о( рготе|п:ргосе|п !птегас(юпа Ьу сооппюпоргес|р|гатюп )а то рег(оггп йе ргорег сои)го)а ю аа со Ыеп(1(у рготе|п ч Ьн( пот рготе!пе Л апг| В. х|хт |и рЬуяо1о8|са! сошр1ехех айег (Ьеу Ьаче Ьееп ю1цЪт1!Хе<1 Еготп (Ье се1!. ТЬця сопппшпоргес|рЬабоп гпау пот Ье арргорпате Еог йе с1етестюп оЕ ртоте|п-ргосе|п !пгегасбопх йат тпа)ге цр 1аг8е, |пю!цые тпасгогпо1есц1аг ягцсыгеа оЕ (Ье се11, ьцсЬ ае (Ье пцс1еаг тпатпх.
ОЕ)ТЗЛЬ!Е ОЕ ТНЕ РКОСЕЕНЗтсЕ 'ччЬетЬег йе Воа) )х то гехт Еог а хрес!Етс шсегастюп Ьепчееп пчо )споччп рготе(па ог то Ыеп6Еу поче! рготеша йат тптегаст ъчЬЬ а )спотчп ргогетп, (Ье рппстр1е оГ сопппшпоргестрба6оп (х (Ье хаше. ТЬе се!1х аге Ьагчеетеб апд !уесть подет сопс66опа (Ьат ргееегче рготе|п-ргоге|п Гптегас6опя а ртогетп оЕ (п(егеет |а прес)6са1!у шцпцпоргестрЬатед Гготп йе се11 ехтгаспп апд йе иппшпортес!рЬатеа аге йеп Егаст|опатег( Ьу ро1уасгу!атиЫе Пе1 е1есггорЬогеяя (п (Ье раат, (Ьта Ьах Пепега11у Ьееп Ьу опе-с1цпепяопа1 ЯЭо-ро1уасгу1агп|6е Пе! е1естгорЬогеяя Но нечет, т~чогбптепяопа! ае1е цх!п8 (еое1естт(с Госцяпа (1Ер) апг1 Ю5-ро1уасгу1атп|6е Ве! е1ессгорЬогеяа ойег (шргочетпепть ш Ъо(Ь гею1ц6оп апг| еепя6чЬу, ап6 йе бече1оршепт оГ рготеоппсз тесЬ- по1оП(ее ыпа)с!и8 юсЬ ае!е пюге сопцпопр!асе.
СоргестрЬа6оп оЕ а рготе|п оЕ 1спои и Ыепшу ыпохт сопцпоп1у бесесте6 Ьу ччеетегп Ыотт!п8 чч|(Ь ап ап6Ьос1у сбгестес1 а8а|пя (Ьат рготе1п. АЬегпа6че!у, !Е (Ье сеПь аге шесаЪо1ка11у 18.62 СЬартег 18| Рготет 1пгетас6оп ТесЬио!оч(ез 1аЬе1е|1 чч!(Ь [лл5)тпетЬюпше ЪеГоге 1уяя йеп соргес|рПабп8 ргосе|па сап Ье чылаПгед Ьу аитогад!оцгарЬу. ТЬе Ыепбту оГсегса!и гагПо!аЪе1ед рготе!пх сап Ье дететпипед ияп8 иппшпо1о8)са1 1есЬшср|ех (е.8., геиппшпоргес|рПа6оп оГ йе ргосе(п ш срлехдоп лч!(Ь а ге1ечапт ап6- Ъоду) (Ве!)егхЪег8еп е| а1.
1994; С(паЪег8 е| а!. 1994; Ча(го ег а1. 1995) ог Ьу сошрага6че рер|Ые шарр!п8. 1Е йе Воа1 ь со Ыеп6Гу поче! !птегасбп8 рготешя йеп |Ье рита6че а|ьос|ате|1 рго1е!и ь Пы детестед |и |Ье Ве!, иялаПу ах а л|8-1аЬе!ед ог зга!пед Ьапд. ЯиЪает!иеп1!у, сопппшпоргес!рЬатюп ь сагпед оит оп а хса1е 1аг8е епоиВЬ со оЬ(а|п аийк(епт п|асепа! Гог Ыеп66са|юп оГ |Ье аяюс|а1ед рготеш Ъу Едшап де8гада6оп ог тпа|ь хресггошетгу.
ТЬе гетпа(п|1ег оЕ (Ь!х !п(годистюп |егнеъ аз а Ви(де Еог ор6пиг|п8 апд тгоиЫеаЬообпц соиппшпоргес!Риа|юп геастюпх апд |Ье хиЬхециепт Ыеп66са6оп оЕ |Ье ргес!РПатед рго|е!пя АЬо |пс1идед ь а дьсгьяоп оЕ |Ье соптго1з йат хЬои1д Ье регГоппед (о епялге йат а соргес(р(- тат)п8 рго|е(п (х тги1у а рЬух!о1о8!саПу те!енап| рагтпег. Рог |1е|адед дьс|ьяопх апд рготосо)а оп сеП 1уяя иппшпоргес|рПа|юп, апд ге1атед тесЬпп1иея р1еахе хее Наг1оъч апд Ьапе (1988, 1999). ТЬе сопппшпоргес|рЬабоп ртогосо1, лчЬ|сЬ ЕоПолчх |Ье |птго|1ис6оп, (х Ьахед оп опе |Ьат нчах |ьед со Ыеп6Еу Си12 апд ПЬгопес6п ах ргогеша а|ьос|асед чч!(Ь рУН1., а гшпог аиррге|ьог рго|е|п лчЬохе 1о|ь оГ Гипс(!оп ь гехропяЫе Гог |шпог Гоппа6оп !и ноп Н!рре1-1лпдаи д!хеахе.
ТЬе ргососо1 нчах оп8!паПу регГоппед их!п8 786-О гепа1 саге!по|па сеПК 1Ьас |чете хтаЫу 1гапхЕес(ед лч((Ь а р!аяпЫ ехргеьяп8 Ьеша881игш)п-са88ед рЧНЬ (786-0)НА-рЧНГ). Соп|го1 сеПЬ йаг |неге х|аЫу ггапхЕесгед лч((Ь |Ье ешрсу честог а1опе, алчете ргосе|ьед ш рагаПе!. ЧНЕ СЕМЕ РКО01)СТ АМ0 ЧОМ Н!РРЕОЕ)МОАГ) О!$ЕАВЕ ноп Н)рре)-!|пдаи д)хеаае 'ь а Ьегед)тату сапсег хупдготе йа| 'ь сЬагас|епгед Ьу |Ье дене!орп|еп| о( гепа! саге)потоах, рЬеосЬтопюсу|оп|ая апд чахси!аг (игоога о( йе сел(та! пегноих чуа(еш апд геПпа (ОЬЬ апд Кае!)п 1999). Тишогх ге|в!( (юш |ипс|юпа! (пасВнаВоп о( Ьой сор)еа о( (Ье ЧНГ депе.
ТЬе рго(е|п ргодисг о( |Ье ЧНГ Вепе, рЧН1., )п|етасЬ лч)(Ь а пип|Ьег о( се!!и!аг рго|еая (пс!ид)п8 е!оо8(пх В апд С, КЬх1, апд а гпегоЬет о( йе Си!!|и Гаш)!у о( рго(е)па, СЫ2 (Оиап е| а!. 1995; К(Ье! е( а!. 1995; Ра|ье е| а!. 1997; Гопе|8ап е| а1. 1998; Кашига е( а!. 1999Ь). Кесеп| нчог1| аи88ех(а йа| (Ье рЧН)/е!оп8(п В апд С7КЬх1 )Си!2 согпр!ех четче ач ап ЕЗ иЬ)г)и(8п !(Вахе апд (а|8е(а сег|а)п рготе)па (ог де8гадаПоп Пнча! е( а!. 1999; Катета е| а!. 1999а,Ь; )льгтлнап е| а), 1999; Туеса апд нн)!!епь 1999).
ТЫх ас((н(ту о( рЧНГ Ь ПлоиВЫ, а| !еая (и раи, Го ипдег!)е |ь (ипюг ялррге|ьог (ипсПоп. ТЬе рНН!. рго|е)п аВо (п|егась а|аЫу лч(ПЬ йе ех|гасе!!и!аг |па|их рго|е)п, ЯЬгопесйп (ОЬЬ е| а1. 1998). СЕЕЕ ЕУБ1$ А)М0 1ММ1ПМОРлхЕС1Р1ТАТЮ!Ч ЪЧЬеп 1уяп8 сеПя а ша)ог сопхЫега6оп (х |Ьа| |Ье сопсП|юпх лье|1 Еог хо!иЪ|1|га6оп ех|гаст |Ье рготе(п |о Ье иппшпоргес(рда|ед, Ъи| до пог йагир| аП оЕ1Ье рготеш-рготе|п !птегасбопх йа| ех(хт лч!(Ь)п |Ье сеП. ТЬия П ь Ьехг го десегпппе |и адчапсе йе пи1дехг 1ух!х сопсП6опх йаг еЕП- слеп(1у ао! иЪ|1)ге |Ье п|а)опту оЕ |Ье рго|еш оЕ (птегехт. ТЬехе рдо| ехрегипепь сап ВепегаПу Ье регЕоппед оп а япаП хса1е, тес)и!пп8 сеП ех|гаст депчед Ггоп| 10" то 10' сеПх Еог еасЬ ипп|ипоргес|РПабоп.
!п лепета!, а Ь)ВЬег ха!| сопсептга6оп (200-1000 тпМ МаС!) ап|1 (Ье ргехепсе оЕ ап юпк детег8епт (0.1 — 19о Я:б ог ход(иш деохусЬо1ате) аге плоте йхгирбне |Ьап!отчет апюипь оЕ ха!1 (120 штхл МаС1) апд йе ргехепсе оЕ а попюп(с дегег8епг (0.1 — 198 МопЫег Р-40 ог Тп|оп Х- 100). 8!пп1аг1у, шесЬапка1 ргосе|ьея якЬ аа хопкат!оп, |епд |о |1епа|иге апд д!хгирт ргосе|пргосе|п шгегасбопя Но|ченег, П ь ппрог|ап| |о поте йа| |Ье 1ух)а сопд!6опа йа| хо1иЪ|!|ге ап|1 уе| до пос д(|ьос!ате а рагбси!аг рготе|п сошр1ех хЬои1д Ье |1есеппшед ешр|псаПу. Опсе |Ье 1уа!х сопсП6опх Ьаче Ьееп дегегпипед, |Ье с1еаге|1 сеП 1уаасе (а ялЬ)естес! |о а хтапдагд иппшпоргес|рПатюп чдй ап ап6Ъоду сПгес|ед а8а)пз( йе ргосеш оГ !птегехт.
П !х |п|рог- Ргогосо! 4; 1Йепгфсаглоп оЕАллос!глгей Ртогейл Ьу СЫттииоргеслрлгабст 18.63 гапг го регЕопп а рагаПе1 иишипоргес)риагюп ъч)лЬ гЬе ге!ечапг сопсго1 ап6ЬосПеа !р1еаъе аее Сои!го!а Еог Соипгпипоргес!риа6оп, Ье!оъч). Ъй~еп екгаЫьЫп8 йе сопсПгюпь Еог сеП !улла апъ1 ргоге!п ко1иЫ!айаг!оп, Ъеаг ли ш!пг) гЬас ЫПЬ сопсепсгаг)опа оЕ юпк дегег8епг !е.8., >0.298 Ю8) апг) гЬе ргеаепсе оЕ гебцс)пц а8епга ъчП! гепс) го бепагпге йе апг!Ъоду ап6 шсегЕеге ън)гЬ йе ипплипоргес)рпа6оп. 0ЕТЕСТ1О]ъ] ОГ А%ОС!АТЕ0 РКОТЕПЧй 1Г йе ригроае оЕ йе ехрегипепс ь со геаг ъчЬейег ичо рагбси1аг ргоге)па )пгегасг )и ч)чо, йеп йе ргезепсе оГ йе аесопс) ргогеш ь гьиаПу ъ)егесге6 Ьу ъчеяегп Ыог6п8 ог, !Е йе сеПа ъчеге гпегаЪоПсаПу!аЬе!е6 ъч)гЬ [лл8] шейюп)пе ЬеГоге 1уяя Ьу аигогасПо8гарЬу.
нъгеагегп Ыог6п8 ь агга18ЬгЕогъчагд апй аааиш)п8 йас гЬе ап6Ьоь!у гье6 Еог гЬе ъчеяегп Ыог 1ъ ънеП-сЬагассег!хеъ] (р1еаае аее Ье1оъч), ге1а6че!у ипашЬ18иоия Аигогас!!о8гарЬу Ьак йе абчапга8е гЬаг гЬе лл8- !аЬе1ед ргогелп оЕ лпгегеаг сап Ье согпрагед Ьу ггур6с шарр)пц ъч)гЬ лл8-1аЪе1е6 ргосе)п с1епчеъ1 Еголп ш ч)гго сгапаспргюп апд сгапк1агюп оЕ а деПпед сР!ъА, геаи16п8 ли ипашЬ18иогь сопПгшаъюп оЕ ГЬе ргогеш'к Ыепгпу ГХюп8 ел а1. ) 992, 1993; К)Ье1 ег а1. 1995). 1Е гЬе ригрозе и го Ыеп6Гу паче) аааос!агег! ргоге)пя йеп гЬезе сап Ъе десессеь! Ьу сПгесс яалшп8 оЕ йе ргоге!пк ш йе Пе1. Аг йь яа8е, ЬеЕоге асаПп8 ир йе ргосег)иге, оп!у гЬе гпоге лепя!!че а!алия аисЬ ал ал)чег ала)п)п8 (Аррепйх 8) ап6 )шЫахо)е-Ыпс пе8а6не аъа)п)п8, 8епегаПу 'пане ГЬе гел)и)ге6!ече1 оГ аепь!6ч)лу (Малаш ег а1.
1999). АЬегпабъе!у, лЕ йе сеПк аге 1аЬе!ед ЬеЕоге 1уяа ън)ГЬ 1лл8]шейюпше, йеп гасПо1аЬе1ес1 аллое)аге6 ргоге)иа сап Ье чьиа1гееъ1 Ъу аигогасПо8гарЬу ог ъч)гЬ а рЬоърЬог!лпа8ег. СО]ъ]ТКОЕ5 ГОК СО!ММ!Пъ]ОРКЕС!Р!ТАТ!О)ь] ТЬе гпа)ог р)лЕаП агьосласед ън)гЬ Ыепбйса6оп оГ поче! аааос)аге6 ргоге)па Ьу соиппшпоргес!рЬа6оп ь йе Ыепг)Глсаг!оп оЕ Еа1ке роя!гнея ТЬеке ГаЬе роябчек абае Егош йе ргехепсе оГ ргосе)па лп гЬе ъчааЬес1 пишипоргес)риасе ГЬаг аге пог поппаПу агьослаге6 ъниЬ йе ргогелп оГ !пгегеп лп йе !пгасл сеП. 8исЬ сопгапипапЬ геял1Г Ггопл Еоппа6оп оГ попрЬуяо1о81са! ргогелп-ргоГелп шлегасл!опа аГГег сеП 1уа)к (Р18иге 18-14, Сошр1ех 2) ог аа а геаи1Г оГ сгоаягеас6ч)лу ап6 попкрес)Пс Ь)псПп8 оГ йе апълЬос1у Го сеПи1аг ргоге)пк ГГ18иге 18-14, Сошр!ех 3).
Рог!пиале!у, шисЬ сап Ъе допе го е!шппаге ог сои!го! Гог аисЬ сопГоип6!п8 шгегасбопя !)81пе 'ъАЕе11-сЬагасГегиед АпЕ]Ьое11е8 Апу ап6Ъоду йас ь гьеъ1 Еог йе иппшпоргеслриабоп кЬои16 Ъе ъчеП-ъ)еПпе6 !е.8., Ни ег а!. 1991; Мапп ег а1. 1998), ).е., !г аЬои!й Ье ргочеп го иппшпоргес)риале Егопл сгибе сеП ехггасгя гЬе ргоге!п а8а)пал ъчЬлсЬ )г ъчаа га)лес). ТЬеге аге а пиплЬег оЕъчаук гЬаг йь аЬПЬу сап Ье бешопкггагей ° Яюъч)п8 гЬаг ши16р1е ап6ЬосПея !пъ)ереглбепг!у гавел) го лЬе ааше ргоге)п, гесо8пгхе йе лате ро!урергЫе.
° Яюъчшц йаг йе ап6Ьо6)еа !аП со белес! гЬелг гаг8ег ргогеш !и а сеП 1ше йаг 1ас)са йаг ргоге)п. СеП Пиеа 1асЫп8 а раг6си1аг ргогеш аге соиииоп!у ачаПаЫе аа Ьшпап сеП !лпех деглче6 Ггош лпсПчЫиа1к ъч!ГЬ сапсег ргег)!ария!!оп купбгошеа (е.8., 786-О гепа! саге!поша сеПа 1ас1с йе ръгНЬ шпюг аирргелаог ргогеш) ог Егогп писе ън!гЬ а сагцегес) )ъпос)ъ-оиг оГа раг6си!аг Пепе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
